重組畢赤酵母生產(chǎn)人生長(zhǎng)激素的發(fā)酵條件研究.pdf

1、本研究首次采用基因工程菌重組畢赤酵母表達(dá)人生長(zhǎng)激素(BUm~l growthhormone，hGH)，通過單因素分析和正交實(shí)驗(yàn)法對(duì)巴斯德畢赤酵母的高密度發(fā)酵培養(yǎng)基進(jìn)行了篩選和優(yōu)化；對(duì)高效表達(dá)人生長(zhǎng)激素的培養(yǎng)條件進(jìn)行了優(yōu)化；根據(jù)優(yōu)化的搖瓶發(fā)酵結(jié)果進(jìn)行了補(bǔ)料分批發(fā)酵；對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行了初步鑒定。實(shí)驗(yàn)結(jié)果如下： 1.以BSM培養(yǎng)基為發(fā)酵培養(yǎng)基并對(duì)其進(jìn)行改良：對(duì)基本碳、氮源進(jìn)行了選擇并對(duì)實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)進(jìn)行了分析處理。 2.考察了影響外源

2、蛋白表達(dá)的因素，包括接種量、種齡、誘導(dǎo)時(shí)間、甲醇濃度、pH等，得到最佳培養(yǎng)及誘導(dǎo)條件為：接種量為8％，最佳種齡為24h，誘導(dǎo)時(shí)間為30h，甲醇濃度為2％，pH為6.3～6.9。 3.對(duì)搖瓶實(shí)驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行了放大，用瑞士Bioengineering公司L1523型12.81，發(fā)酵罐進(jìn)行了補(bǔ)料。 4.通過SDS-PAGE凝膠電泳法對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行了定性分析，結(jié)果表明表達(dá)產(chǎn)物與rhGH標(biāo)準(zhǔn)品具有相同的相對(duì)分子量，初步表明該產(chǎn)物即為人