養(yǎng)殖半滑舌鰨常見疾病的病理學觀察與感染微生態(tài)分析.pdf

1、半滑舌鰨(Cynoglossus semilaevis Gtinther)是原產(chǎn)我國近海的優(yōu)良海水魚類品種,也是繼牙鲆和大菱鲆之后,其養(yǎng)殖形成產(chǎn)業(yè)規(guī)模的又一鲆鰈魚類。本論文以養(yǎng)殖的半滑舌鰨為研究對象,采用現(xiàn)場調查、石蠟切片、細菌分離培養(yǎng)、PCR-DGGE和Roche454平臺高通量測序等技術方法,分別進行了初步的流行病調查,代表性的疾病病理學和感染微生態(tài)的研究,以期充實和豐富鲆鰈魚類疾病研究的資料,并為半滑舌鰨疾病高效防控技術體系的構建

2、奠定工作基礎。論文的主要研究結果如下:
　　1.養(yǎng)殖半滑舌鰨主要的流行病類型論文流行病調查的范圍集中于山東半島,調查的方式以現(xiàn)場采樣和來樣送檢為主。通過調查,發(fā)現(xiàn)在我國北方半滑舌鰨的主要養(yǎng)殖區(qū),疾病逐漸成為養(yǎng)殖生產(chǎn)中經(jīng)常面對的問題,對產(chǎn)業(yè)的平穩(wěn)發(fā)展已經(jīng)構成了威脅。調查同時發(fā)現(xiàn),爛鰭爛尾癥、皮膚潰瘍癥、皮下膿腫病、腹水病和腸炎病是半滑舌鰨養(yǎng)殖過程比較常見的幾種疾病,這些疾病都具有非常明顯的臨床病變特征,在生產(chǎn)中比較容易識別。在所采集

3、的半滑舌鰨疾病樣品中,沒有發(fā)現(xiàn)寄生蟲性疾病和病毒性疾病。
　　2.養(yǎng)殖半滑舌鰨代表性疾病的病理學研究選取皮膚潰瘍癥和腹水病這兩種有代表性的疾病進行了組織病理學的觀察。觀察結果顯示,感染皮膚潰瘍的半滑舌鰨除體表出現(xiàn)明顯病灶外,全身主要的組織器官都發(fā)生了不同程度的病理變化。如潰瘍病灶處肌纖維發(fā)生了嚴重的固縮,并有局灶性潰爛;鰓小葉局部組織水腫,毛細血管擴張并充血;鰭組織表現(xiàn)了真皮層充血的病理變化:眼部視網(wǎng)膜的內顆粒層和外網(wǎng)狀層發(fā)生剝離

4、;肝胰臟和腎臟發(fā)生了嚴重的組織變性、壞死和潰爛等病理變化;脾臟血紅細胞大量壞死和沉積;,心臟出現(xiàn)了心肌組織的大面積壞死和血細胞、淋巴細胞浸潤現(xiàn)象;消化道的粘膜層和粘膜固有層分離,并有局灶性的組織增生和潰爛現(xiàn)象·而感染腹水病的半滑舌鰨全身各個組織器官也出現(xiàn)了不同程度的病變,但整體病變程度相對皮膚潰瘍癥病魚較輕。腹水病病魚主要組織器官的病理表現(xiàn)為:皮膚真皮層出現(xiàn)大量點狀淤血;鰓小葉上皮細胞水腫和柱狀細胞組織增生;心肌組織局灶性斷裂;肝胰臟也

5、出現(xiàn)局灶性組織壞死和潰爛;腎小球與腎間質發(fā)生了組織融合;膽囊壁形成血栓,并發(fā)生明顯的結締組織增生;腦組織中可以發(fā)現(xiàn)空泡變性和顆粒變性的神經(jīng)細胞;胃的粘膜固有層出現(xiàn)局灶性組織壞死,而腸道的組織病變和胃基本一樣。病理學的分析結果說明,多器官的病變使器官功能衰竭,正常的生理代謝逐漸下降并消失,這可能是皮膚潰瘍癥和腹水病病魚發(fā)生死亡的最終原因。
　　3.池塘養(yǎng)殖半滑舌鰨的微生態(tài)研究從池塘養(yǎng)殖的健康半滑舌鰨中隨機挑選了3條樣本魚,用微生物分

6、離培養(yǎng)、PCR-DGGE和Roche454平臺的高通量測序技術分別對它們體內各個組織中和環(huán)境中菌群的相關性進行了分析。研究結果發(fā)現(xiàn),傳統(tǒng)的微生物分離培養(yǎng)方法僅能從樣品魚的腸道、水樣和底泥中分離出細菌,這些細菌都是弧菌屬細菌。以這些細菌為依據(jù),不能很好的解析各樣品之間的菌群相關性。PCR-DGGE技術可以定性解析半滑舌鰨組織、水樣和底泥中菌群的相關性,通過對電泳條帶的切膠回收和測序,也能較好的體現(xiàn)各個樣品的菌群多樣性,但平行樣之間的結果分

7、析存在一定的的誤差。通過對高通量測序數(shù)據(jù)的分析,證實池塘養(yǎng)殖的半滑舌鰨各個組織中菌群構成非常相似,并且與所投喂餌料中菌群結構存在一定的相關性,而幾乎不受養(yǎng)殖水體和池塘底泥中菌群的影響。
　　4.工廠化養(yǎng)殪半滑舌鰨疾病發(fā)生的感染微生態(tài)研究采用上述3種實驗方法,同時對兩家工廠化養(yǎng)殖廠感染皮膚潰瘍癥和腹水病的半滑舌鰨病魚進行了感染微生態(tài)的分析。病魚樣品為皮膚潰瘍癥和腹水病病魚各3條,同一養(yǎng)殖系統(tǒng)中未發(fā)病的正常魚各1條。研究結果表明,傳統(tǒng)

8、的培養(yǎng)方法僅能從少部分病魚的病灶和腸道中分離出細菌,這些細菌分別歸屬弧菌屬、交替單胞菌屬、假單胞菌屬、希瓦氏菌屬等不同菌屬,因此仍無法解析各樣品間菌群構成的相關性。PCR-DGGE實驗結果證實皮膚潰瘍癥病魚和腹水病病魚體內不同組織中的優(yōu)勢菌群的構成具有一定的相似性,與正常魚相比存在較為明顯的差異性。PCR-DGGE的實驗結果同時證實工廠化養(yǎng)殖半滑舌鰨腸道菌群的構成似乎與水體和餌料中的菌群構成不太相關。采用高通量測序技術對其中4條樣本魚及

9、水樣和餌料樣本進行測序分析,結果表明樣本魚各個組織中優(yōu)勢菌株的種類構成非常相似,并且與水樣和餌料中的菌群相關性不明顯,但其豐度在發(fā)病前后發(fā)生了顯著變化,即優(yōu)勢菌株的生態(tài)位在疾病發(fā)生的前后發(fā)生了轉變。通過高通量測序獲得的半滑舌鰨各組織中優(yōu)勢細菌的16S rRNA序列大部分在NCBI數(shù)據(jù)庫中沒有可供比對的已知菌種序列。
　　通過以上研究,本論文引申了兩點推測。一是在本論文的研究案例中,所有樣本魚組織中的優(yōu)勢菌種組成幾乎是相同的,因此人