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文檔簡介
1、大豆(Glycine max)是重要的經(jīng)濟作物,在農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中占有重要地位。近年來,由尖鐮孢菌引起的大豆枯萎病范圍逐漸擴大,危害日益突出。該病害是一種土傳病害,病菌生活力極強,可在土壤中生存多年。國內(nèi)外大量研究和生產(chǎn)實踐證明,選育和利用抗病品種是防治大豆枯萎病最經(jīng)濟有效的措施。我國抗枯萎病育種的進展與大豆生產(chǎn)需求現(xiàn)狀相差甚遠,主要原因是研究方法和手段相對落后,有關(guān)的基礎(chǔ)研究,如尖鐮孢菌的鑒定、遺傳多樣性、抗性鑒定等研究不夠系統(tǒng)和深入。
2、r> 本研究在大豆枯萎病發(fā)生時期,從全國主要大豆種植地區(qū)采集大豆枯萎病病樣,采用傳統(tǒng)形態(tài)鑒定和分子生物學(xué)手段相結(jié)合的方法,對大豆枯萎病病原菌進行分離鑒定,建立了尖鐮孢菌的快速分子檢測體系,同時對大豆枯萎病病原菌的遺傳多樣性和品種抗性進行了研究。
1.從我國各大豆產(chǎn)區(qū)采集大豆枯萎病標(biāo)本285份,通過室內(nèi)分離、培養(yǎng)獲得126株真菌分離物。按照柯赫氏法則,經(jīng)過致病性試驗證實,得到97株致病菌。經(jīng)傳統(tǒng)形態(tài)學(xué)和分子生物學(xué)鑒定,
3、得到61株尖鐮孢菌(Fusarium oxysporum)。
2.根據(jù)尖鐮孢菌(F.oxysporum)和其它病原真菌的甾醇14α-去甲基化酶基因(CYP51C)序列間的差異,設(shè)計了特異性引物C1/C2和C3/C4。檢測體系可以特異地從F.oxysporum菌株中擴增到一條699 bp左右的條帶。引物C1/C2對F.oxysporum基因組DNA的檢測靈敏度為100ng,以引物C3/C4和C1/C2進行套式PCR擴增后,檢
4、測靈敏度提高到1 pg,檢測靈敏度至少提高105倍。引物C1/C2對土壤中分生孢子的檢測靈敏度達到102個孢子/克土,套式PCR檢測體系可以將靈敏度提高到1個孢子/克土。同時,引物C1/C2對發(fā)病植株組織也能特異性的檢測到F.oxysporum的存在。進一步建立了實時熒光定量PCR檢測體系,可以對土壤和發(fā)病植物中病原菌精確定量。
3.利用隨機擴增多態(tài)性DNA(RAPD),對采自我國不同地區(qū)的大豆枯萎病病原菌尖鐮孢菌(F.o
5、xysporum)進行遺傳多樣性分析,篩選到10條多態(tài)性隨機引物,共產(chǎn)生75條RAPD條帶,其中55條為多態(tài)性條帶,占73.3%。利用UPGMA法對DNA擴增圖譜進行聚類分析,以遺傳距離0.68為閾值,55個菌株可分為9個遺傳群體,表明我國大豆枯萎病病原菌中具有豐富的種內(nèi)遺傳多樣性。
4.采用孢子懸浮液蘸根接種鑒定方法,對172份大豆品種進行抗枯萎病鑒定篩選,鑒定得到5份抗大豆枯萎病品種:皖豆28,中黃13,中黃51,中作
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