TAT-Cry1Ac融合蛋白在煙草、擬南芥中陽(yáng)性植株的篩選及對(duì)小菜蛾治理研究.pdf

1、小菜蛾P(guān)lutella xylostella屬鱗翅目菜蛾科，主要是十字花科蔬菜害蟲(chóng)，在世界上80多個(gè)國(guó)家都有分布。對(duì)我國(guó)十字花科蔬菜的生產(chǎn)構(gòu)成很大威脅。多個(gè)國(guó)家或地區(qū)已報(bào)道其對(duì)Bt殺蟲(chóng)基因產(chǎn)生高抗藥性。
　　 蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域(trans-activator of transcription，TAT)是一類(lèi)能自動(dòng)穿透細(xì)胞膜，并能作為載體將其它生物大分子攜帶進(jìn)入細(xì)胞膜內(nèi)的一段富含精氨酸的多肽。
　　 本文人工合成一段TAT基

2、因，以實(shí)驗(yàn)室保存的cry1Ac殺蟲(chóng)基因?yàn)榛A(chǔ)，以黃色熒光蛋白(YFP)做為標(biāo)記基因構(gòu)建出：pBI121-Cry1Ac、pBI121-TAT-Cry1Ac、pBI121-Cry1Ac-YFP、pBI121-TAT-Cry1Ac-YFP四種重組載體。
　　 完成農(nóng)桿菌介導(dǎo)四種融合基因載體在模式植物煙草、擬南芥遺傳轉(zhuǎn)化條件的摸索；通過(guò)Cry1Ac基因特異引物基因組PCR、RT-PCR分子檢測(cè)和Cry1Ac毒蛋白Western-blot

3、分析成功篩選轉(zhuǎn)基因煙草和擬南芥陽(yáng)性克隆植株；提取陽(yáng)性植株蛋白，利用ELISA分析方法完成融合基因在植株中表達(dá)蛋白定量。
　　 以抗性與敏感小菜蛾為供試蟲(chóng)源，提取煙草陽(yáng)性植株蛋白，利用擬南芥陽(yáng)性植株幼葉進(jìn)行室內(nèi)生測(cè)，結(jié)果表明，蛋白轉(zhuǎn)導(dǎo)結(jié)構(gòu)域TAT對(duì)Cry1Ac有明顯的增效和克抗作用，煙草陽(yáng)性植株表達(dá)融合蛋白對(duì)敏感小菜蛾增效區(qū)間：3.260～3.296，對(duì)抗性小菜蛾增效區(qū)間：2.107～2.169；擬南芥陽(yáng)性植株表達(dá)融合蛋白對(duì)敏感小