Tat-Cry1A融合基因在模式植物中遺傳轉(zhuǎn)化.pdf

1、目前害蟲對(duì)Bt的抗藥性問題已經(jīng)成為研究熱點(diǎn)，因此國內(nèi)外研究者都在積極尋找新的應(yīng)對(duì)昆蟲抗藥性的途徑。人工合成的Tat肽具有能夠與其它大分子的蛋白組成融合蛋白穿透細(xì)胞膜進(jìn)入細(xì)胞內(nèi)的特性，國內(nèi)已經(jīng)有研究者首次將Tat肽引入農(nóng)業(yè)害蟲防治領(lǐng)域，在原核中對(duì)CrylAc殺蟲基因的增效作用已經(jīng)得到驗(yàn)證，對(duì)抗性小菜蛾種群的的增效倍數(shù)達(dá)到9.69倍。因此將利用遺傳重組方法構(gòu)建的Bt殺蟲基因與Tat基因的融合基因轉(zhuǎn)入模式植物，明確Tat蛋白在植物體系中的表達(dá)

2、對(duì)Bt殺蟲基因的增效作用，從而開辟Tat應(yīng)用的新領(lǐng)域和克服害蟲抗藥性的新途徑。 本課題將Tat肽應(yīng)用到植物轉(zhuǎn)基因工程中，驗(yàn)證Tat肽在植物體系中對(duì)CrylA殺蟲基因的增效功能。通過PCR擴(kuò)增從轉(zhuǎn)雙價(jià)基因抗蟲棉中的DNA基因組中克隆到了包含啟動(dòng)子、增強(qiáng)子、poly A序列、終止子等一系列調(diào)控元件的完整的CrylA殺蟲基因的表達(dá)盒，優(yōu)化Tat基因的表達(dá)密碼子，設(shè)計(jì)并合成了Tat基因序列，為了檢測融合基因在模式植物中的表達(dá)，將黃色熒光

3、蛋白YFP作為標(biāo)記基因利用遺傳重組的方法構(gòu)建了一個(gè)攜帶Tat和YFP基因的完整的CrylA殺蟲基因的表達(dá)盒。同時(shí)為了研究各目的基因之間的相互影響和Tat的功能，分別構(gòu)建pBI121-CrylA、pBI121-Fat-CrylA、pBI121-Tat-CrylA-YFP、pBI121-Tat-CrylA和pBI121-CrylA-YFP(對(duì)照)四種植物表達(dá)載體，.將其導(dǎo)入根癌農(nóng)桿菌GV3101中，同時(shí)建立了完整的模式植物轉(zhuǎn)化體系，分別利用