稻瘟病菌三個侵染表達上調(diào)基因的功能研究.pdf

1、稻瘟病菌(Magnaporthe oryzae)是目前研究絲狀真菌的重要模式生物。為了探索水稻與稻瘟病菌互作的分子機理，本文從稻瘟病菌全基因組基因芯片中挑選了三個該菌侵染水稻后表達上調(diào)倍數(shù)比較高的基因，對它們進行基因敲除，同時對其中的兩個基因進行過量表達，分析它們的表型變化，以初步確定它們在稻瘟病菌侵染致病過程中的作用。
　　 首先構建了三個基因的敲除載體和MGG_06834.6與MGG_03891.6基因的過量表達載體，然后通

2、過原生質(zhì)體轉(zhuǎn)化，獲得基因的缺失突變體和過量表達突變體。突變體表型分析發(fā)現(xiàn)，MGG_03356.6缺失突變體在菌落形態(tài)，孢子萌發(fā)，致病性方面與野生型沒有顯著差別，而在疏水性表面上附著胞形成率比野生型菌株KU70低；MGG_06834.6缺失突變體的表型與對照菌株也沒有明顯變化，但過量表達突變體的產(chǎn)孢量降低，且附著胞形成提前，而致病性減弱；MGG_03891.6的缺失突變體的表型與野生型菌株沒有顯著差別，但過量表達突變體的附著胞形成滯后，且

3、致病性也有所減弱。RT-PCR分析表明，MGG_06834.6和MGG_03891.6在野生型菌株中表達量很低。這些結(jié)果表明它們可能在稻瘟病菌侵染致病過程中充當一定的作用。
　　 同時，我們利用SDS的脅迫來觀察細胞壁的完整性，實驗結(jié)果發(fā)現(xiàn)，敲除MGG_03356.6和MGG_03891.6基因?qū)毎耐暾杂绊懖幻黠@，而敲除MGG_06834.6基因后病菌對SDS抗性較弱，說明細胞完整性減弱，因此MGG_06834.6可能是細