限制生長(zhǎng)法保存幾種果樹離體種質(zhì)資源的研究.pdf

1、山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文限制生長(zhǎng)法保存幾種果樹離體種質(zhì)資源的研究姓名：張演義申請(qǐng)學(xué)位級(jí)別：碩士專業(yè)：果樹學(xué)指導(dǎo)教師：孫仲序2002.6.1山東農(nóng)業(yè)大學(xué)碩士學(xué)位論文限制生長(zhǎng)法保存幾種果樹離體種質(zhì)資源的研究摘要果樹種質(zhì)資源的保存意義重大，方法眾多，其中建立在組織培養(yǎng)基礎(chǔ)上的限制生長(zhǎng)保存方法是一種非常重要的方法。本試驗(yàn)建立了蘋果(羅6、鈴鐺果等)等的莖尖培養(yǎng)體系；并以其為試驗(yàn)材料，研究了果樹莖尖培養(yǎng)苗保存過程中不同添加物和不同培養(yǎng)條件對(duì)保存效

2、果的影響；對(duì)保存前后的莖尖培養(yǎng)材料進(jìn)行了KAPD分析；研究了保存前后和各種保存商法旁果樹莖尖培養(yǎng)材料的遺傳變異；對(duì)保存1年后的羅6進(jìn)行了擴(kuò)繁和生產(chǎn)的研究＼f主要結(jié)果如下：1建立了羅6莖尖培養(yǎng)體系，力進(jìn)一步的保存研究和遺傳變異研究提供了材料對(duì)莖尖培養(yǎng)苗進(jìn)行了大量的試驗(yàn)及繁殖，篩選出適宜快繁的一系列培養(yǎng)基。羅6的分化培養(yǎng)基以MSBAo45IBAol為最佳，試驗(yàn)表明在該配方下分化率高，葉色綠，苗木健壯。對(duì)蘋果無菌苗建立過程中的褐化現(xiàn)象進(jìn)行了較

3、為系統(tǒng)的研究，初步找到了克服和減輕褐化的措施。2改進(jìn)和完善了果樹莖尖培養(yǎng)苗的限制生長(zhǎng)保存法利用減少瓶?jī)?nèi)空氣、添加2％甘露醇、5“C低溫、減少光照時(shí)間為每天6小時(shí)或減少光照強(qiáng)度為500Lux、加大瓊脂含量為11e；，I，、減少蔗糖含量為109n以及添加log／L活性碳等方法對(duì)蘋果、草莓等果樹材料的莖尖培養(yǎng)苗進(jìn)行了限制生長(zhǎng)保存，保存時(shí)間最長(zhǎng)現(xiàn)已達(dá)到18個(gè)月，保存的果樹莖尖培養(yǎng)苗生長(zhǎng)速度遠(yuǎn)低于對(duì)照，轉(zhuǎn)入正常培養(yǎng)基后能正常生長(zhǎng)、分化。對(duì)保存過程

4、中出現(xiàn)的玻璃化現(xiàn)象采取了一些解決措施。3對(duì)保存1年后的果樹莖尖培養(yǎng)材料的遺傳變異進(jìn)行了RAPD分子標(biāo)記檢測(cè)利用14個(gè)隨機(jī)引物，對(duì)用不同方法保存的蘋果和草莓等果樹的不同品種保存前后利用RAPD方法進(jìn)行了分子檢測(cè)，共得到224條帶，發(fā)現(xiàn)斑帶整齊劃一，沒有異帶產(chǎn)生，表明保存前后基因型基本一致，沒有發(fā)現(xiàn)變異現(xiàn)象。4建立了系統(tǒng)的保存果樹離體種質(zhì)資源的技術(shù)程序在保存果樹莖尖培養(yǎng)苗前，首先將其放在正常生長(zhǎng)分化的含7efU瓊脂、309幾蔗糖的固體培養(yǎng)基

5、中，每天2000Lux光照12小時(shí)，于25“C溫度等條件下進(jìn)行培養(yǎng)。二周后待莖尖培養(yǎng)苗生長(zhǎng)較為健壯時(shí)，用青霉素玻璃小瓶作為培養(yǎng)瓶，剪取莖尖培養(yǎng)苗并將其接種在含有2％甘露醇的正常生長(zhǎng)MS培養(yǎng)基中，放于5℃下光照培養(yǎng)箱中，培養(yǎng)條件設(shè)為每天2000Lux光照6小時(shí)，進(jìn)行培養(yǎng)保存。至少每隔二周應(yīng)該抽查莖尖培養(yǎng)苗生長(zhǎng)狀況。5對(duì)保存后的羅6進(jìn)行了擴(kuò)繁和生根研究保存后的羅6伸長(zhǎng)培養(yǎng)基以MSKT2oNAAol為最佳，該配方下苗子伸長(zhǎng)現(xiàn)象明顯，苗子長(zhǎng)勢(shì)壯