喹乙醇酶聯(lián)免疫分析方法研究.pdf

1、隨著人們物質(zhì)生活水平的不斷提高和畜牧業(yè)的迅速發(fā)展，畜產(chǎn)品藥物殘留檢測和食品安全評估方法研究倍受重視。喹乙醇是一種化學(xué)合成的抗菌促生長飼料添加劑，但不規(guī)范使用會產(chǎn)生蓄積毒性作用。該藥屬于禽類和魚料的禁用品。因此，開展畜產(chǎn)品、飼料或飼料添加劑中喹乙醇含量檢測和安全評價(jià)工作十分必要。目前喹乙醇常用的檢測方法如HPLC等需依靠大型儀器，且大都存在樣品前處理繁瑣、費(fèi)用高、檢測時(shí)間長等缺陷。研究和開發(fā)快速檢測技術(shù)對喹乙醇添加量的驗(yàn)檢和監(jiān)督具有重要意

2、義。本論文采用人工合成抗原技術(shù)，利用制備的多克隆抗體初步建立了喹乙醇ELISA檢測方法，旨在為喹乙醇快速檢測提供相關(guān)技術(shù)。 實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：采用TLC、熔點(diǎn)、紅外、質(zhì)譜、核磁共振法顯示，實(shí)驗(yàn)合成的OLA結(jié)構(gòu)衍生物OLA-HS符合設(shè)計(jì)結(jié)構(gòu)，成功的在喹乙醇分子結(jié)構(gòu)中2位的-OH基團(tuán)位點(diǎn)上引入了-COOH； OLA-BSA、OLA-KLH、底物間的紫外圖譜表明載體蛋白與底物間偶聯(lián)成功，OLA-BSA偶聯(lián)比為5．2：1，OLA-KLH的偶

3、聯(lián)比為7．8：1；用OLA-BSA免疫新西蘭大白兔6次后，OLA-BSA特異性抗血清最高效價(jià)為128000；實(shí)驗(yàn)建立OLA的ELISA檢測方法中，應(yīng)用方陣滴定法確定包被抗原、抗血清、酶標(biāo)二抗的最佳工作濃度分別為10-3mg/ml、1：8000、1：10000；采用辛酸-硫酸銨法純化抗血清后，最適工作濃度為1：2000時(shí)，在0．1～100μg/ml的濃度范圍內(nèi)喹乙醇濃度與抑制率存在較理想的線性關(guān)系，線性回歸方程：I=12．313LogC+

4、22．662（R2=0．9992），靈敏度為0．122μg/ml；抗體交叉實(shí)驗(yàn)中抗血清與OLA結(jié)構(gòu)類似物喹胺醇間有一定的交叉反應(yīng)，但抑制率明顯低于OLA，抗血清與氯霉素和鹽酸克侖間沒有交叉反應(yīng)性。 本實(shí)驗(yàn)初步結(jié)論為：運(yùn)用優(yōu)化后的丁二酸酐法與活潑酯化法可成功合成出偶聯(lián)比較高的目標(biāo)抗原OLA-BSA和OLA-KLH；人工抗原OLA-BSA免疫動物后，可獲得效價(jià)較高的抗血清，但與同類母體結(jié)構(gòu)的化合物間呈現(xiàn)一定交叉反應(yīng)，因此方法特異性有