鏈霉素酶聯(lián)免疫分析方法的研究.pdf

1、本文針對(duì)動(dòng)物源性食品和飼料中鏈霉素殘留潛在的安全問(wèn)題，研究建立了間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法(icELISA)。
　　本研究采用環(huán)氧樹(shù)脂法將鏈霉素(STR)與牛血清蛋白(BSA)偶聯(lián)制得免疫原，免疫新西蘭白兔，得到鏈霉素多克隆抗體。通過(guò)鏈霉素(STR)與O-羧甲基羥胺(CMO)連接，引入羧基活性基團(tuán)成功得到半抗原STR-CMO，并利用碳二亞胺法將半抗原與卵清蛋白(OVA)偶聯(lián)制得包被抗原。通過(guò)優(yōu)化包被原包被量，抗體稀釋倍數(shù)，離子強(qiáng)度，

2、pH值等參數(shù)，建立了間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫檢測(cè)方法。最終選擇抗體稀釋倍數(shù)為1∶1000;包被抗原的包被量為0.5μg/well;封閉液為0.5％脫脂乳粉/PBS;樣品稀釋液為0.01mol/LPBS，pH7.4;抗體稀釋液為0.1％BSA/PBS。所建立的icELISA方法靈敏度(IC50)為2.00±0.24ng/mL，檢測(cè)限(IC15)為0.24±0.08ng/mL。所制備的鏈霉素抗體對(duì)雙氫鏈霉素的交叉反應(yīng)為95.50％，對(duì)其他六種結(jié)構(gòu)類(lèi)

3、似的氨基糖苷類(lèi)抗生素沒(méi)有交叉反應(yīng)，證明此抗體具有很高的特異性。
　　選取了雞肉、雞肝、豬肉、豬肝、豬腎、魚(yú)肉、蝦肉、牛奶、雞飼料和豬飼料作為樣品進(jìn)行添加回收實(shí)驗(yàn)。樣品在15ng/g、30ng/g、120ng/g、300ng/g、600ng/g五個(gè)添加水平上的回收率在71.32-106.94％之間，板內(nèi)及板間變異系數(shù)均小于18％?；厥章实姆讲罘治霰砻?，除肝臟樣品外，對(duì)于不同的鏈霉素殘留量以及不同類(lèi)型的檢測(cè)樣品，方法的回收率之間沒(méi)有顯