花生過(guò)敏原酶聯(lián)免疫分析方法的建立.pdf

1、本論文采用硫酸銨分級(jí)沉淀法提取制備了花生總蛋白和Ara h1過(guò)敏原蛋白，并免疫動(dòng)物制備了兔、鼠多克隆抗體。針對(duì)花生總蛋白兔、鼠抗血清采用了免疫印跡法分析，證明兔多抗可識(shí)別分子量為63.5、61、57、17和15 kDa的過(guò)敏原蛋白，鼠多抗可識(shí)別63.5、61、57 kDa過(guò)敏原蛋白。
　　優(yōu)化建立了花生總蛋白的間接競(jìng)爭(zhēng)酶聯(lián)免疫方法，IC50為1.18μg/mL。
　　分別針對(duì)花生總蛋白和Ara h1過(guò)敏原蛋白優(yōu)化建立了雙抗體

2、夾心酶聯(lián)免疫分析方法?；ㄉ偟鞍椎膬?yōu)化條件為:捕獲抗體的包被量為0.075μg/孔，封閉液為0.5％脫脂乳粉，花生總蛋白從4μg/mL開(kāi)始1.5倍梯度稀釋?zhuān)?個(gè)梯度，檢測(cè)抗體的稀釋倍數(shù)為1∶25000，HRP標(biāo)記羊抗鼠二抗1∶10000倍稀釋?zhuān)?7℃顯色20 min，檢測(cè)限為40.48 ng/mL。且利用花生總蛋白抗體檢測(cè)Ara h1過(guò)敏原蛋白，建立了雙抗體夾心ELISA方法，檢測(cè)限為8.38 ng/mL。
　　Ara h1過(guò)敏

3、原蛋白的優(yōu)化條件為:捕獲抗體的包被量為0.075μg/孔，封閉液為0.5％脫脂乳粉，Ara h1過(guò)敏原蛋白從1μg/mL開(kāi)始2倍梯度稀釋?zhuān)?個(gè)梯度，檢測(cè)抗體的稀釋倍數(shù)為1∶40000，HRP標(biāo)記羊抗鼠二抗1∶10000倍稀釋?zhuān)?7℃顯色20 min，檢測(cè)限為1.38 ng/mL。這兩種雙抗體夾心免疫檢測(cè)方法與14種植物性蛋白均沒(méi)有交叉反應(yīng)。
　　這兩種夾心ELISA方法的板問(wèn)變異為2.02％-12.00％、板內(nèi)變異為0.68％-