iaaM基因轉(zhuǎn)化‘美人指’葡萄的研究.pdf

1、本研究以‘美人指’葡萄（Vitis vinifera L‘Manicure Finger’）為材料，在已建立的‘美人指’葡萄不定芽再生體系的基礎(chǔ)上，采用農(nóng)桿菌介導(dǎo)法以及花粉管通道法，將iaaM基因?qū)搿廊酥浮咸阎?，以期獲得定向改良目的性狀的‘美人指’葡萄新種質(zhì)。本實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)探討了影響‘美人指’葡萄遺傳轉(zhuǎn)化效率的因子，優(yōu)化了農(nóng)桿菌介導(dǎo)法的主要技術(shù)參數(shù)，研究結(jié)果如下：
　　 1.以‘美人指’葡萄莖段、葉柄、葉片為農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化ia

2、aM基因的受體，對(duì)影響遺傳轉(zhuǎn)化的一系列因子：農(nóng)桿菌浸染時(shí)間、共培養(yǎng)時(shí)間、卡那霉素選擇壓、頭孢霉崇濃度等進(jìn)行了研究。結(jié)果表明：農(nóng)桿菌侵染4min，共培養(yǎng)3d，卡那霉素選擇壓3mg/L，頭孢霉素濃度250mg/L為最佳的農(nóng)桿菌介導(dǎo)‘美人指’葡萄的遺傳轉(zhuǎn)化體系。
　　 2.通過(guò)超聲波輔助農(nóng)桿菌介導(dǎo)法，對(duì)‘美人指’葡萄遺傳轉(zhuǎn)化體系進(jìn)行研究，以期提高轉(zhuǎn)化效率。利用GUS瞬時(shí)表達(dá)的方法研究了不同處理功率、時(shí)間、外植體類型及AS濃度對(duì)‘美人指

3、’葡萄遺傳轉(zhuǎn)化效率的影響。結(jié)果表明，外植體莖段在含75mg/LAS農(nóng)桿菌懸浮液中侵染4min，并在此期間，用功率為90w的超聲波處理14s，獲得最佳GUS瞬時(shí)表達(dá)率42.8％。
　　 3.采用優(yōu)化的農(nóng)桿菌介導(dǎo)轉(zhuǎn)化體系，對(duì)‘美人指’葡萄進(jìn)行轉(zhuǎn)化，共獲得7株抗性苗。利用GUS組織化學(xué)染色、PCR擴(kuò)增及RT-PCR檢測(cè)，結(jié)果表明，2株抗性植株GUS染色和PCR檢測(cè)呈陽(yáng)性，其中1株通過(guò)RT-PCR檢測(cè)，初步證實(shí)iaaM基因已經(jīng)整合到‘美