枳CBF1類似基因(PtCBF1)啟動(dòng)子功能分析.pdf

1、柑橘是我國(guó)南方的主要栽培果樹，受到低溫的嚴(yán)重影響。周期性的凍害導(dǎo)致柑橘果實(shí)產(chǎn)量急劇降低，樹體受害，造成巨大經(jīng)濟(jì)損失。培育抗寒性強(qiáng)的品種是解決凍害問(wèn)題的關(guān)鍵之所在。由于柑橘的多胚性、性器官敗育以及童期長(zhǎng)等原因，傳統(tǒng)的雜交育種等方法難以解決育種上存在的問(wèn)題，而基因工程的發(fā)展，為柑橘育種提供了一個(gè)新的途徑。但在早期的基因工程中，組成性啟動(dòng)子被廣泛地用來(lái)驅(qū)動(dòng)外源基因的表達(dá)，難以獲得生長(zhǎng)發(fā)育正常的轉(zhuǎn)基因品種。故在柑橘抗寒育種中，尋找有效的低溫應(yīng)答

2、啟動(dòng)子，更好地驅(qū)動(dòng)相關(guān)基因的表達(dá)，為進(jìn)一步了解柑橘抗寒機(jī)理奠定基礎(chǔ)。
　　 本研究在已克隆的枳（Poncirus trifoliata（L．）Raf）PtCBF1啟動(dòng)子和啟動(dòng)子缺失片斷分析的基礎(chǔ)上，深入研究該啟動(dòng)子的活性，判斷該啟動(dòng)子是不是冷誘導(dǎo)型啟動(dòng)子，試圖找出最有活性的冷敏感啟動(dòng)子，并對(duì)啟動(dòng)子的功能區(qū)域進(jìn)行研究。旨在進(jìn)一步揭示柑橘類植物抗低溫的機(jī)制。其主要內(nèi)容和結(jié)果如下：
　　 1．根據(jù)已克隆的PtCBF1啟動(dòng)子及啟

3、動(dòng)子上具有的可能應(yīng)答環(huán)境脅迫的元件，特別是上游順式作用元件MYC識(shí)別位點(diǎn)在冷應(yīng)答途徑中的作用，將啟動(dòng)子缺失片斷與報(bào)告基因GUS連接，根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)的煙草轉(zhuǎn)化，來(lái)研究啟動(dòng)子的功能特性。
　　 2．GUS組織化學(xué)染色和熒光定量試驗(yàn)表明：全長(zhǎng)片段和571 bp啟動(dòng)子活性最強(qiáng)。PtCBF1啟動(dòng)子可能是一種冷誘導(dǎo)型啟動(dòng)子：推斷MYC元件可能調(diào)節(jié)PtCBF1啟動(dòng)子感應(yīng)低溫信號(hào)，還可能受其它轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控。
　　 3．RT-PCR表明，