潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶的原核表達(dá)及致敏性評(píng)價(jià).pdf

1、本研究從轉(zhuǎn)基因玉米基因組上成功克隆出潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶基因(hpt)，通過(guò)BamH Ⅰ和HindⅢ雙酶切作用，將hpt基因與pET30a進(jìn)行粘性末端連接成功構(gòu)建pET30a-hpt質(zhì)粒，并轉(zhuǎn)化到大腸桿菌BL21中進(jìn)行蛋白表達(dá)。表達(dá)產(chǎn)物用飽和硫酸銨沉淀法和親和層析法進(jìn)行純化。經(jīng)過(guò)酶切后采用抗體制備以及western blotting等方法確定所表達(dá)蛋白的正確性以及活性。 潮霉素磷酸轉(zhuǎn)移酶基因(hpt)屬于"外源基因供體無(wú)食用和食物過(guò)

2、敏史的轉(zhuǎn)基因食品的致過(guò)敏性評(píng)價(jià)"。所以根據(jù)IFBC-ILSI制定的轉(zhuǎn)基因食品致過(guò)敏性評(píng)價(jià)方法，研究了與已知的過(guò)敏蛋白的氨基酸序列相似性比較、消化穩(wěn)定性試驗(yàn)以及動(dòng)物模型試驗(yàn)。結(jié)果表明，未發(fā)現(xiàn)連續(xù)8個(gè)氨基酸序列相同；該蛋白在80℃加熱10min左右時(shí)已全部降解，不具有熱穩(wěn)定性；體外模擬消化實(shí)驗(yàn)表明，消化20min時(shí)，SDS-PAGE和western blotting已檢測(cè)不出HPT蛋白。 試驗(yàn)采用BN大鼠作為過(guò)敏模型，ELISA檢測(cè)