葡萄病毒A多克隆抗體的制備及檢測效果分析.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、葡萄病毒A(Grapevine virus A,GVA)是葡萄上普遍發(fā)生的一種病毒,在世界各地的葡萄種植園區(qū)都有分布,侵染葡萄后在木質部上形成莖溝槽,造成產量下降,品質降低,成熟延遲,樹勢衰退,經濟壽命縮短。由于目前尚無理想的化學藥劑來防治病毒病,因此栽培無病毒苗木是防治病毒病的有效途徑,而病毒檢測能夠為培育和繁殖無病毒苗木提供良好的技術支撐。本研究主要是利用意大利提供的GVA毒源材料在本氏煙上進行擴繁,進而利用擴繁得到的材料提取病毒粒

2、子,最后將提取的病毒粒子通過免疫大耳白兔獲得葡萄病毒A多克隆抗血清。
   取得的主要研究成果如下:
   1、通過汁液摩擦接種法將GVA毒源材料接種到草本寄主本氏煙上,然后利用活化了的毒源材料進行轉接,轉接5-7d后可在本氏煙葉片上產生明顯的褪綠、皺縮、畸形等癥狀。利用擴繁得到的材料提取病毒粒子,采用的方法主要是差速離心結合蔗糖密度梯度離心,將病毒提純液經SDS-PAGE電泳檢測后,結果表明其在23KDa處產生明顯的蛋

3、白質分子條帶。
   2、將得到的病毒提純液經磷鎢酸負染后進行電鏡觀察,結果表明在電鏡下可看到大量線狀病毒粒子的存在,大小約為800nm。使用市售GVA的多克隆抗體對病毒提純液進行Western blot分析,結果表明在23KDa處市售GVA的多克隆抗體與病毒提純液產生信號較強的特異性反應。通過將得到的病毒提純液免疫大耳白兔,獲得了效價為1:6400的多克隆抗血清。
   3、對所制備的多克隆抗血清進行Western b

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