簇毛麥重復序列的分離及抗性相關(guān)的分子標記研究.pdf

1、為建立簇毛麥(Dasypyrum)特定染色體上的特異性ISSR標記，以二倍體簇毛麥(Dasypyrum Villosum)、小麥中國春(Chinese Spring)等為材料，對96條ISSR引物進行PCR篩選，發(fā)現(xiàn)引物UBC848可在二倍體簇毛麥中擴出一條長388bp的特異性片段，命名為pDv848/388(Genbank登錄號：EF411201)，而中國春等小麥均未擴出該片段。利用UBC848對小麥近緣種偏凸山羊草(Aegilops

2、ventricosa)、荊州黑麥(Secale cerealecv．Jingzhou rye)和節(jié)節(jié)麥(Aegilopstauschii)等進行擴增，發(fā)現(xiàn)它們均未擴出pDv848/388。進而用一套中國春一二倍體簇毛麥附加系CSDA1V～CSDA7V對pDv848/388進行染色體定位，將目標片段確定在二倍體簇毛麥5V染色體上。進一步用UBC848對多年生簇毛麥(Dasypyrumbreviaristatum)、小麥一簇毛麥雙二倍體、部

3、分雙二倍體及其衍生后代進行擴增，發(fā)現(xiàn)它們均能擴出pDv848/388，這表明pDv848/388可作為簇毛麥5V染色體上的一個特異性ISSR標記，用于快速跟蹤檢測簇毛麥遺傳物質(zhì)向栽培小麥中的導入。 根據(jù)植物抗病基因保守結(jié)構(gòu)域NBS(Nucleotide—binding site，核苷酸結(jié)合位點)、LRR(Leucine—rich repeats，富含亮氨酸重復)設(shè)計13條引物相互組合對多年生簇毛麥基因組總DNA進行PCR擴增，獲

4、得了小麥抗條銹病基因Yr10的全長同源序列DbRGAYr10，其序列全長為5615bp，編碼的氨基酸組成與其他已知的普通小麥(Triticum aestivum)、節(jié)節(jié)麥(Aegilops tauschii)、水稻(Oryza sativa)、大麥(Hordeum vulgare)、高粱(Sorghum bicolot)、一粒小麥(triticummonococcum)基因組內(nèi)Yr10基因或抗性類似基因編碼的氨基酸序列具有89-90％的