苯并(a)芘暴露對羅非魚體內主要生物標志物影響的研究.pdf

1、苯并(a)芘(Benzo(a)pyrene，BaP)是一種五環(huán)多環(huán)芳烴，是一類理化性質穩(wěn)定、難以降解且具致癌致畸性質的環(huán)境污染物，可隨著降雨、工業(yè)廢水排放、表面徑流等方式進入水體。近年來，隨著我國工業(yè)化和城市化的快速發(fā)展，水體BaP的污染越來越嚴重，已經引起人們的重視。
　　 苯并芘的生物監(jiān)測一直是環(huán)境風險評估的重要內容。本試驗以羅非魚為試驗材料，研究不同濃度的苯并(a)芘暴露對羅非魚體內生物標志物-膽汁BaP代謝物、肝臟CYP

2、lA1及GST的活性、DNA損傷及肝臟卵黃蛋白原基因表達的影響，為分析和評價BaP的生態(tài)毒性和遺傳毒性提供科學依據，并為淡水環(huán)境中BaP的監(jiān)測提供可行的方法。
　　 在BaP暴露后的2h、6h、12h、48 h、4d、7d、14d采集羅非魚的膽汁，利用固定波長熒光分光光度法(Fixed wavelength fluorescence，FF)測定膽汁中BaP代謝物。本試驗首先建立針對羅非魚的FF法。將羅非魚膽汁分別稀釋1000倍、

3、2000倍、4000倍、8000倍，在激發(fā)/散發(fā)波長380/430 nm測定熒光強度。結果顯示2000倍左右的稀釋較為合理，結合其他研究，本試驗最終采用1600倍的稀釋倍數。BaP暴露試驗的結果顯示0.1μg/L濃度組的BaP代謝物物隨時間變化無明顯波動，與對照組無顯著差異(P＞0.05）;其他三個劑量組從2h起就與對照組差異顯著(P＜0.05，P＜0.01)。三個試驗組均呈現先上升后下降的趨勢，50μg/L組在48 h后開始下降，而1

4、μg/L、10μg/L組并未出現一個明顯的峰值，但也分別在7d和4d后下降。膽汁中BaP代謝物隨濃度升高不斷升高，呈現明顯的劑量-效應關系。
　　 在BaP染毒后2h、6h、12h、48 h、4d、7d、14d采集魚的肝臟，測定肝臟CYPlA1、GST的活性。結果表明0.1μg/L、1μg/L、10μg/L三個劑量組的CYPlA1活性與對照組沒有顯著差異（P＞0.05），50μg/L劑量組的CYPlA1活性在6h、7d被顯著誘導

5、(P＜0.01);0.1μg/L、1μg/L肝臟GST活性與對照組無差異(P＞0.05），10μg/L、50μg/LGST活性在14 d時與對照組差異顯著(P＜0.05）。研究CYPlA1活性與GST活性之間的關系發(fā)現，兩者的變化趨勢相近，尤其是1μg/L、50μg/L兩個劑量組，表明這兩者之間可能存在一定的對應關系。利用單細胞凝膠電泳(Single cell gel electrophoresis，SCGE)檢測肝臟DNA損傷。于染毒

6、4d、7d、14d取羅非魚的肝臟，立即進行彗星試驗，以尾部DNA含量(TDNA％)、尾長(TL)、尾矩(TM)、Olive尾矩(0TM)四個指標對DNA損傷進行評價。結果表明BaP會對肝細胞DNA造成不同程度的損傷。在0.1μg/L、1μg/L、10μg/L三個濃度組，DNA損傷隨著BaP暴露濃度的增加而增加，呈現一定的劑量效應關系，50μg/L組DNA損傷有所下降。在時間上，除1μg/L劑量組的尾部DNA含量、10μg/L組的尾部DN

7、A含量及Olive尾矩外，其他指標有在第7d降低之后又升高的趨勢，0.1μg/L劑量組尤為明顯，7d時的4個指標顯著低于第4d和第14 d(P＜0.05)。
　　 卵黃蛋白原(Vitellogenin，Vtg)是檢測環(huán)境雌激素的重要生物標志物。雄性魚類VtgmRNA是檢測環(huán)境雌激素的新興生物標志物。為研究BaP是否具有環(huán)境雌激素效應，本試驗對羅非魚Vtg mRNA進行了研究。用總RNA提取試劑盒取得雌魚肝臟總RNA，用Ester

8、huyse和自己設計的引物，以轉錄得到的cDNA為模板，分別得到422bp和687bp的羅非魚卵黃蛋白原特異性cDNA擴增片段。采用熒光定量PCR法檢測10μg/、50μg/L的BaP暴露對羅非魚肝臟Vtg基因表達的影響，結果發(fā)現4d、17d時雄性羅非魚肝臟內Vtgm RNA表達量與對照組無差異(P＞0.05），10d時10μg/L、50μg/L兩個劑量組Vtg mRNA表達量顯著高于對照組(P＜0.01），分別是對照組的113.18倍