豬流感病毒表位抗原基因串聯(lián)表達(dá)及小鼠免疫試驗(yàn).pdf

1、豬流感（Swine influenza，SI）是由A型流感病毒引起的一種豬的急性呼吸道傳染病，一年四季均可發(fā)生，各種日齡的豬都可感染，目前對(duì)豬流感尚無(wú)有效的治療手段，臨床上主要通過疫苗接種預(yù)防該病.SI的商品化滅活疫苗主要是H1NI型和H3N2亞型單價(jià)或雙價(jià)全病毒滅活疫苗.但由于近年來(lái)重組毒株頻繁出現(xiàn)，以傳統(tǒng)流行株為毒種的滅活疫苗已無(wú)法提供理想的保護(hù)作用，因此人們開始對(duì)SIV進(jìn)行新型疫苗研究，以應(yīng)對(duì)其高度變異的特性. 本研究選擇

2、SIV主要結(jié)構(gòu)蛋白的T、B細(xì)胞抗原表位片段，將多個(gè)表位片段串聯(lián)，定向克隆到原核表達(dá)載體pET-30a（+）中，命名為pET-30a-EP1.經(jīng)測(cè)序鑒定閱讀框正確后，轉(zhuǎn)化宿主菌BL21（DE3），以IPTG誘導(dǎo)，目的片段獲得成功表達(dá).SDS-PAGE電泳，表達(dá)重組蛋白為27KD，與預(yù)期大小相相符.免疫轉(zhuǎn)印試驗(yàn)顯示，重組蛋白可以與His-tag抗體發(fā)生免疫學(xué)反應(yīng)，表明表達(dá)重組蛋白為構(gòu)建的目的蛋白，命名EP1.經(jīng)BCA蛋白定量試劑盒分析，蛋白

3、濃度為1306.88μg/mL.本室采用不同的表位抗原基因串聯(lián)表達(dá)，獲得了第二種表位抗原蛋白，命名EP2. 純化的EP1蛋白、EP2蛋白分別采用皮下和滴鼻方式免疫6周齡KM小鼠。間接ELISA檢測(cè)小鼠血清IgG抗體、鼻液IgA抗體水平，結(jié)果，EP1蛋白免疫小鼠的血清IgG、局部粘膜IgA抗體水平均高于PBS對(duì)照組，EP2蛋白皮下免疫組血清IgG、滴鼻免疫組局部粘膜IgA抗體水平高于PBS對(duì)照組，但滴鼻免疫組血清IgG抗體較低.M

4、TT法分析小鼠脾臟T淋巴細(xì)胞增殖反應(yīng)，結(jié)果，EP1、EP2蛋白免疫組T淋巴細(xì)胞對(duì)免疫原刺激反應(yīng)明顯高于PBS組.HI試驗(yàn)檢測(cè)SIV血凝抗體，皮下注射組抗SIV H1N1亞型病毒效價(jià)均達(dá)1：128以上，EP1滴鼻組的HI效價(jià)1：64；但EP2蛋白滴鼻免的HI效價(jià)只有1：4. 結(jié)果表明，所構(gòu)建的融合蛋白獲得很好的表達(dá)，EP1重組蛋白無(wú)論以何種途徑免疫小鼠，均可誘導(dǎo)小鼠產(chǎn)生較好的體液免疫反應(yīng)和細(xì)胞免疫反應(yīng)，其中滴鼻免疫還獲得了理想的局