不同條件下九孔鮑免疫防御因子的差異性.pdf

1、本文對九孔鮑在副溶血弧菌感染過程中以及在低氧脅迫和饑餓脅迫條件下機體細胞和體液免疫防御因子的變化,九孔鮑野生與養(yǎng)殖群體免疫防御因子及生化遺傳差異性等內容進行研究。結果表明,在副溶血弧菌感染過程中九孔鮑血淋巴細胞當中的吞噬細胞和體液中的一些免疫因子發(fā)揮重要作用,吞噬細胞存在呼吸爆發(fā)現(xiàn)象,呼吸爆發(fā)產生的活性氧和活性氮是殺滅被吞噬的異源生物的主要因素;胞內MPO將H2O2轉化為次氯酸(hypochlorous acid,HOCl)和氯胺(ch

2、loramines,RNCl)等次生氧代謝產物,強化殺菌效果;胞內ACP對異物發(fā)揮消化、降解作用;胞內CAT則積極參與胞內氧自由基的淬滅和清除作用;九孔鮑血淋巴液中的凝集素、溶菌酶、酚氧化酶等參與抗感染免疫過程,凝集素發(fā)揮免疫識別、免疫調理、凝集限制、免疫溶解等作用,溶菌酶發(fā)揮水解革蘭氏陽性菌的作用,酚氧化酶則可能參與病原微生物的抑制和免疫識別,九孔鮑存在通過細胞增殖強化免疫效應的機制;此外,九孔鮑血淋巴液中還發(fā)現(xiàn)免疫球蛋白樣物質IgG

3、-like,IgA-like,IgM-like,補體樣物質C3-like,C4-like,C反應蛋白樣物質CRP-like等,它們與機體抗感染免疫應答具有一定的相關性。
　　 平均體重為14.25g±2.21g的九孔鮑在水溫為22.1℃±1.3℃,鹽度為30.72±0.54,pH8.20±0.14的海水環(huán)境中,溶解氧含量由7.49±0.14 mg·L-1下調至2.53±0.16 mg·L-1后120內并未見到個體死亡,而注射感染

4、5.0×105 cells-abalone-1副溶血弧菌后120h內的累計死亡率高達91.11±7.70％,比對照組11.11±3.83％的累計死亡率高出80％,血淋巴的抑菌清除率下降至-(3340.47±298.57)％,顯而易見,低氧脅迫使得九孔鮑拮抗副溶血弧菌感染的抵抗力顯著下降。低氧(2.53±0.16 mg·L-1)脅迫下,九孔鮑血淋巴細胞數(shù)量(THC)下降30.62±4.87％、血淋巴細胞吞噬率下降62.77±5.79％、呼

5、吸爆發(fā)產生的超氧陰離子數(shù)量下降22.21±5.89％。低氧脅迫下九孔鮑血淋巴細胞內MPO活性上升9.63±7.59％～22.90±13.73％、CAT活性提高7.68±6.83％～56.28±13.96％,反映出低氧脅迫下九孔鮑體內應激反應產生的物質氧化加劇,血淋巴細胞內產生大量的活性氧自由基。溶解氧含量由7.49±0.14 mg·L-1下調至4.51±0.12 mg·L-1后九孔鮑120h內的累計死亡率達到37.78±3.85％,血淋

6、巴抑菌率下降至-(883.56±123.22)％;THC、血淋巴細胞吞噬率、呼吸爆發(fā)產生的超氧陰離子O2-數(shù)量等最大降幅分別達到12.51±6.59％、21.90±15.84％、12.93±5.74％;MPO活性在原有水平的-(10.61±4.20)％～7.13±6.45％之間波動,CAT活性在-(5.17+18.08)％～16.26±10.85％之間變化。
　　 在水溫24.3℃±1.7℃、鹽度為30.42±1.63、pH值為

7、8.15±0.11環(huán)境條件下,饑餓脅迫20d九孔鮑尚能存活。在停食5d時,九孔鮑血淋巴液蛋白含量不僅沒有下降,甚至略有升高,而7d后,九孔鮑血淋巴液蛋白質含量逐漸大幅度下降,由此推測,九孔鮑在饑餓脅迫早期并沒有動用體蛋白作為能源物質,而饑餓7d后,體蛋白被大量消耗于機體的生命維持。饑餓脅迫狀態(tài)下九孔鮑血淋巴細胞吞噬活性下降、血淋巴細胞呼吸爆發(fā)水平下降、體液溶菌酶活性、凝集活性下降、抗感染免疫機能下降。但是,九孔鮑經歷5d時間的饑餓,血淋

8、巴抗菌清除效率、血淋巴細胞吞噬活性、血淋巴細胞呼吸爆發(fā)產生的超氧陰離子水平、體液溶菌酶活性等免疫指標都不僅變化不大,有時甚至略有升高,說明九孔鮑具有面對饑餓脅迫的應激適應機制,饑餓之初,由于營養(yǎng)不足,機體通過提高免疫機能加強來適應環(huán)境、保護自我。饑餓脅迫持續(xù)時間超過7d,這種本能的逆境適應方式和機能維持終因體內的營養(yǎng)狀況嚴重不足和體內資源的過度消耗而改變和衰退。饑餓脅迫下的九孔鮑血淋巴液中的溶菌酶活性、凝集活性下降可能由體液蛋白含量下降

9、引起,胞內顆粒性物質減少則可能是血淋巴液中溶菌酶及凝集素活性減弱的直接原因。
　　 對九孔鮑野生與養(yǎng)殖群體的細胞與體液免疫因子進行比較,結果表明:九孔鮑野生群體與養(yǎng)殖群體之間、養(yǎng)殖鮑的提純復壯群體與養(yǎng)殖性狀退化群體之間的免疫因子及機體免疫防御機能均有顯著的差異性。養(yǎng)殖鮑的提純復壯群體(養(yǎng)殖10個月,個體大小為51.8mm～59.2mm)細胞與體液免疫因子活性都明顯高于養(yǎng)殖性狀退化的養(yǎng)殖群體(養(yǎng)殖20個月,個體大小為37.4mm～

10、43.1mm)(p＜0.01),與野生群體(個體大小為67.7mm～76.7mm)相比,九孔鮑提純復壯群體的細胞免疫因子活性略高于野生群體,體液免疫因子活性則明顯低于野生群體。九孔鮑血淋巴細胞在吞噬活動中引發(fā)呼吸爆發(fā)產,生活性氧的水平與九孔鮑自身生理、環(huán)境溫度以及異物數(shù)量等因素有顯著的相關性(p＜0.01)。環(huán)境溫度由25℃下降至18℃,九孔鮑的細胞與體液免疫因子活性都有明顯的下降。養(yǎng)殖九孔鮑退化群體在25℃和18℃溫度條件下血淋巴液的

11、抗菌活力水平差異性不明顯。酚氧化酶存在于九孔鮑血淋巴液中,但,活性水平不高,在各類九孔鮑群體之間的差異性也不明顯。
　　 對深圳野生與養(yǎng)殖、廣東碣石養(yǎng)殖及南澳野生4個九孔鮑群體8種酶共16個位點進行了等位酶檢測分析。研究表明,以P0.95為標準,上述4個九孔鮑群體的位點Sod-1、Aat、Me、Mdh-1、Est-1、Est-2為多態(tài),多態(tài)位點比例為37.5％;野生群體的觀察雜合度分別為:0.1604(深圳野生)、0.1604(

12、南澳野生),養(yǎng)殖群體的觀察雜合度分別為:0.1521(廣東碣石養(yǎng)殖)、0.1562(深圳養(yǎng)殖);野生群體的期望雜合度分別為:0.1697(深圳野生)、0.1766(南澳野生),養(yǎng)殖群體的期望雜合度分別為:0.1534(廣東碣石養(yǎng)殖)、0.1557(深圳養(yǎng)殖);野生群體的平均有效等位基因數(shù)分別為:1.3633(深圳野生)、1.3943(南澳野生),養(yǎng)殖群體的平均有效等位基因數(shù)分別為:1.3072(廣東碣石養(yǎng)殖)、1.3120(深圳養(yǎng)殖)。