鴨A-FABP基因cDNA克隆與基因多態(tài)性的研究.pdf

1、沉積在肌肉內(nèi)的脂肪是影響肉質(zhì)和風(fēng)味的一項(xiàng)重要經(jīng)濟(jì)性狀。肌內(nèi)脂肪（Intramuscular fat，IMF）被認(rèn)為與肉質(zhì)及口感呈正相關(guān)，影響肉質(zhì)的多汁性、嫩度及風(fēng)味。脂肪酸結(jié)合蛋白(Fatty acid binding protein，F(xiàn)ABP)基因在動(dòng)物體內(nèi)脂肪代謝過(guò)程中的作用，與肌內(nèi)脂肪含量等肉質(zhì)性狀顯著相關(guān)，其中A-FABP(Adipocyte fatty acid bingding protein，A-FABP)和H-FABP(

2、Muscle and heart fatty acid binding protein，H-FABP)已被證實(shí)是這些數(shù)量性狀的候選基因，進(jìn)行了重點(diǎn)研究。目前家禽育種工作已經(jīng)取得了很大進(jìn)展，然而高強(qiáng)度選擇又帶來(lái)了許多負(fù)面影響。其中控制脂肪在鴨體內(nèi)的過(guò)多蓄積，提高鴨胴體質(zhì)量和適口性是中國(guó)養(yǎng)禽業(yè)急需解決的問(wèn)題。本研究把A-FABP基因作為鴨肌內(nèi)脂肪含量的候選基因加以研究，旨在通過(guò)cDNA末端快速擴(kuò)增技術(shù)（Rapid amplification

3、 of cDNA ends，RACE）克隆并分析鴨A-FABP基因的結(jié)構(gòu)與功能，利用聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)－單鏈構(gòu)象多態(tài)性( Polymerase chain reaction-Single strand conformation polymorphism，PCR-SSCP)技術(shù)分析鴨A-FABP基因的單核苷酸多態(tài)性，以闡明鴨A-FABP基因的遺傳變異，繼而以此為分子遺傳標(biāo)記進(jìn)行輔助選擇應(yīng)用于鴨的育種，對(duì)降低鴨體脂、提高鴨肌內(nèi)脂肪含量和改善鴨肉

4、品質(zhì)具有重要意義。
　　 為揭示鴨A-FABP基因的結(jié)構(gòu)和功能，應(yīng)用RACE技術(shù)首次克隆并鑒定了鴨A-FABP基因cDNA序列。首先用一對(duì)含高度保守的DNA片段的兼并引物，從鴨腹部脂肪組織總RNA擴(kuò)增部分A-FABP片段，經(jīng)驗(yàn)證與已知序列一致；接著測(cè)序并設(shè)計(jì)新引物分別從5′和3′RACE擴(kuò)增延長(zhǎng)該片段。最后根據(jù)全基因的序列設(shè)計(jì)上、下游引物，經(jīng)SEQMAN軟件拼接5′RACE產(chǎn)物和3′RACE產(chǎn)物以及已知序列獲得片段大小為652b

5、p的cDNA序列。與雞A-FABP基因進(jìn)行BLAST比對(duì)分析，結(jié)果表明該652bp的cDNA序列由5′-UTR區(qū)、CDS區(qū)和3′-UTR區(qū)組成，其中CDS區(qū)長(zhǎng)度為399bp，5′非編碼區(qū)長(zhǎng)度為64bp，3′非編碼區(qū)長(zhǎng)度為189bp。包含完整的1、2、3、4外顯子序列，與雞A-FABP基因序列4個(gè)外顯子一樣也分別編碼24，58，34和16個(gè)氨基酸。鴨A-FABP基因399bp的開(kāi)放閱讀框編碼132個(gè)氨基酸，推導(dǎo)和分析氨基酸序列表明，分子結(jié)

6、構(gòu)與雞A-FABP相似，其中有些氨基酸殘基表現(xiàn)出較高的保守性。利用DNAMAN軟件比較核苷酸序列，與豬、雞和鵝的A-FABP基因分別有78％、95％和98％的同源性。
　　 根據(jù)RACE獲得鴨A-FABP基因的cDNA序列，設(shè)計(jì)引物P0，擴(kuò)增出該基因的第二內(nèi)含子序列，在此基礎(chǔ)上又設(shè)計(jì)3對(duì)引物利用PCR-SSCP方法對(duì)獲得的序列進(jìn)行多態(tài)性研究。結(jié)果引物P1在北京鴨、縉云麻鴨等品種中發(fā)現(xiàn)4處單堿基突變，分別為：386處“A-T”突變