水貂脾臟cDNA文庫構(gòu)建及MuLu-DRA基因克隆與多態(tài)性分析.pdf

1、中國農(nóng)業(yè)科學(xué)院博士學(xué)位論文水貂脾臟cDNA文庫構(gòu)建及MuLu-DRA基因克隆與多態(tài)性分析姓名：叢波申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：特種經(jīng)濟動物飼養(yǎng)指導(dǎo)教師：楊福合20080501A B S T R A C TT h em a j o rh i s t o c o m a p a t i b i l i t yc o m p l e x ( M H C ) i sa g r o u po fc l o s e l y —l i n k e da

2、n dh i g h l y p o l y m o r p h i c g e n e i n v e r t e b r a t e a n i m a l s ．T h e g e n e e n c o d e t h e m a j o rh i s t o c o m p a t i b i l i t y a n t i g e na n d p l a y s ac r i t i c a l r o l e i n i

3、 m m u n er e s p o n s e ．D u et o i t sc r u c i a l r o l e i n a n i m a l d i s e a s e —r e s i s t a n c e ，M H Ch a s b e c o m e a n i m p o r t a n tr e s e a r c hS U b j e c to fh u m a n a n da n i m a lh u

4、s b a n d r y ．M i n ki s o n eo ft h em a j o rs p e c i e so fa n i m a l si n t h ef u ri n d u s t r y ，a n d w e h a v em o r et h a nf i f t y y e a r sh i s t o r i e s o ff a r m i n gm i n k si no u r c o u n t

5、r y ．S u c c e s s f u l f a r m i n g f u r a n i m a l c r i t i c a l l y d e p e n d s o n t h e e f f e c t i v ep r e v e n t i o no f e p i d e m i cd i s e a s e s ，a n di m m u n o l o g i c a lc o n t r o li st

6、 h em o s tp o w e r f u lw a yt o a c h i e v e t h e a i m ．H o w e v e r ，a t p r e s e n t o n l y f e w s t u d i e s o n m i n k i m m u n i t ym e c h a n i s m h a v er e p o r t e d ．T h e r e f o r e ，t h ec u

7、r r e n t s i t u a t i o nh a ss e r i o u s l yh i n d e r e dt h ed e v e l o p m e n to fe f f c t i v em e a n s o fp r e v e n t i o n a n d t r e a t m e n to ft h e s e d i s e a s e s ．T h i sr e s e a r c h c o

8、 n s t r u c t e d t h e c D N A l i b r a r y ，w h i c h l a i d t h e f o u n d a t i o n f o r t h e m i n kf u n c t i o n g e n e c l o n e a n d a n a l y s i s ；T h e m i n kM u L u —D R Ag e n ec D N A s e q u e

9、n c e w a sc l o n e da n da n a l y z e df o rp o l y m o r p h i s m ，w h i c h p r o v i d e st h et h e o r e t i c a ld a t af o rf u r t h e rs t u d yo nt h ep o p u l a t i o ne v o l u t i o na n dt h ed i s e a

10、 s e —r e s i s t a c er e l a t e d c a n d i d a t eg e n e s ．( 1 ) T h ef u l l - l e n g t hc D N A L i b r a r yo fA m e r i c a nm i n ks p l e e nw a sb e e nc o n s t r u c t e db yu s i n g S M A R T ( S w i t

11、c h i n gM e c h a n i s m A t 5 ’e n d o f R N A T r a n s c r i p t ) t e c h n o l o g y ．A c c o r d i n g t o t h e r e s u l t s o fp h a g ep l a q u e s b r i g h t s e l e c t i o n o fh o s t b a c t e r i a l

12、s t r a i nX L I —B l u ea n d P C R d e t e c t i o n ，t h e p e r c e n t a g eo f r e c o m b i n a n tp h a g e sw e r e9 1 ．1 ％a n dt h et i t e r w a s1 ．0 7 x 1 0 ’p f u ／m l ，t h el i b r a r yw a so f h i g hq u

13、 a l i t yf o rc l o n i n gt a r g e tg e n e sa n de x p r e s s i n gt a r g e t p r o t e i n s ．( 2 ) I no r d e r t o s t u d yf u n c t i o n a n dm o l e c u l a rp o l y m o r p h i s mo fM u L u —D R Ag e n e o

14、 fm i n k ．F u l l —l e n g t ho f t h ee D N A s e q u e n c ew a s7 6 5 b p ，c o d e2 5 4 a m i n o a c i d ．T h er e s u l to fb l a s t i n gi n d i c a t e d ：t h en u c l e o t i d eh a d9 7 ％，9 3 ％，9 3 ％，8 9 ％，8 8

15、 ％i d e n t i t y w i t h d o g ，c a t ，z a l o p h u s ，h o m os p i e n sa n dm a c a c ar e s p e c t i v e l y ；t h e d e d u c e da m i m oa c i d h a d9 6 ％，9 0 ％，9 3 ％，8 5 ％，8 5 ％i d e n t i t y w i t h d o g ，c a

16、 t ，z a l o p h u s ，h o m o s p i e n s a n d m a c a c ar e s p e c t i v e l y ，a n dt h eh o m o l o g yt r e ew a sc o n s t r u c t e d ．T h ea n a l y s i so fd e d u c e da m i n oa c i ds e q u e n c eb ym o l e

17、 c u l a rb i o l o g ys o f t w a r ei n d i c a t e d ：t h ep r o t e i nm o l e c u l a rw e i g h tw a s2 9 K D ，i s o e l e c t r i cp o i n ta p p r o x i m a t e l yw a sa tp H4 ．8 ．T h ea n a l y s i so fs e c o

18、n d a r ys t r u c t u r eo fp r o t e i n i n d i c a t e d ：t h ep r o t e i n w a st h e m i x i n gp r o p e r t yp r o t e i n ，A l a p h ah e l i x 3 8 ．6 ％，B e t a s h e e t s 2 9 ．5 ％，l o o p ( c o r n e r ) 1 7

19、．3 ％，C o i l ( n o n —r e g u l a r c u r l )1 4 ．6 ％．( 3 ) T h eg e n e t i c p o l y m o r p h i s mo fs i x m i n kb r e e d s w a s i n v e s t i g a t e df o r M u L u ·D R Ag e n ee x o n 2b yP C R - S S C P ,

20、 t h er e s u l t s s h o w e dt h a tt h eg e n es i xk i n d s o fg e n o t y p e s ，r e s p e c t i v e l yw a s 4 A ，B B ，C C ，A B ，A C ，B C ．I t e x p l a i n e dt h a tt h eM u L u ．D R A * e x o n 2g e n e a l t o

21、 g e t h e r w a s c o n t r o l l e d b y t h r e e a l l e l e A ，B ， C ，t h e p o l y m o r p h i s m i sr e l a t i v e l y l o w ． W e c a l c u l a t e d t h e a l l e l e f r e q u e n c y ，t h e h e r e d i t y h