魯西黃牛耳組織cDNA文庫(kù)的構(gòu)建及Tβ4基因的克隆與表達(dá)研究.pdf

1、魯西黃牛是我國(guó)重要的瀕危物種之一，構(gòu)建魯西黃牛的cDNA文庫(kù)對(duì)于魯西黃牛遺傳資源的保存以及?；蚬δ艿难芯烤哂兄匾饬x。 本研究為構(gòu)建魯西黃牛cDNA文庫(kù)和胸腺肽β4（Tβ4）基因的原核表達(dá)載體，首先由實(shí)驗(yàn)室提供的魯西黃牛耳緣組織成纖維細(xì)胞中提取總RNA，采用SMARTTM技術(shù)成功構(gòu)建了魯西黃牛耳組織cDNA文庫(kù)。所構(gòu)建的魯西黃牛耳組織cDNA文庫(kù)未擴(kuò)增文庫(kù)滴度為2.88×106pfu/mL，擴(kuò)增后文庫(kù)的滴度為1.33×1010

2、 pfu/mL。從擴(kuò)增文庫(kù)中隨機(jī)挑取96個(gè)克隆進(jìn)行了PCR電泳鑒定，結(jié)果表明重組率為92.7％，插入片段平均大小為1.0Kb。然后利用構(gòu)建好的魯西黃牛耳組織cDNA文庫(kù)，以噬菌體轉(zhuǎn)化為質(zhì)粒的方法篩選出Tβ4基因，成功構(gòu)建了Tβ4基因的原核表達(dá)載體pGEX—4T-1—Tβ4，并設(shè)置誘導(dǎo)劑IPTG的濃度梯度進(jìn)行誘導(dǎo)表達(dá)，用聚丙烯酰胺凝膠電泳檢測(cè)pGEX—4T-1—Tβ4融合蛋白的表達(dá)。結(jié)果顯示，與對(duì)照組相比，實(shí)驗(yàn)組在32KD左右的位置出現(xiàn)T