乙烯響應因子家族基因MdERF98的表達載體構建、蘋果細胞轉化與功能初步鑒定.pdf

1、乙烯是一重要植物激素，而在蘋果這一以果實發(fā)育為重要研究對象的植物中，它的地位和作用又尤為重要和特殊，因為它調(diào)控果實的成熟；同時，乙烯又是植物抗病抗逆過程中重要的信號分子。
　　乙烯響應因子（Ethylene responsive factor，ERF）基因是植物中特有的轉錄因子家族，調(diào)控植物的生長發(fā)育、抗性以及對乙烯等植物抗性相關激素的應答。我們實驗室的前期研究結果表明，AP2/ERF轉錄因子家族中一轉錄因子MdERF98的表達能

2、夠被蘋果輪紋病菌侵染所特異性誘導表達（張芮，2015），而該基因的功能以及在抗病抗逆中的作用，仍屬未知，這引起我們強烈的興趣。因此，在本研究中，首先應用生物信息學的方法，對該基因所屬的蘋果ERF基因家族的282個成員進行了生物信息學與進化樹聚類分析；其次，克隆構建了MdERF98二元表達載體，進行了蘋果愈傷組織細胞轉化，成功獲得超表達MdERF98轉基因細胞株，對該轉基因在抗鹽中的作用進行了研究。
　　主要研究結果如下：
　

3、　1.生物信息學與進化樹分析表明：MdERF98與蘋果基因組中MDP0000286915、MDP0000187369、MDP0000880063、MDP0000155543、MDP0000133854具有較高同源性，在進化樹中，聚為一類，該類轉錄因子家族基因功能未知。同時，與在抗病反應中具有重要作用的經(jīng)典的AP2轉錄因子家族基因Pti4沒有聚為一類，相似性較低，同源關系較遠。
　　2.從蘋果愈傷組織細胞中提取RNA，以反轉錄得到的

4、cDNA為模板，應用PCR技術擴增得到MdERF98目的基因，將目的基因片段鏈接至中間載體pHBT上，用NcoI和PstI雙酶切獲得目的基因片段，將目的基因成功連接至二元表達載體pCB302上，然后將表達載體轉入農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞中，進一步用含有目的基因的農(nóng)桿菌感受態(tài)細胞侵染野生型蘋果‘王林’愈傷組織，獲得轉化MdERF98基因的‘王林’愈傷組織。
　　3.分別對超表達MdERF98的蘋果愈傷組織（王林）與野生型愈傷組織（王林）進行

5、鹽脅迫處理，共設置0 mM、25 mM、50 mM、100 mM、150 mM和200 mM六個NaCl的濃度梯度。結果表明：隨著NaCl濃度的升高，愈傷組織的細胞生長量顯著下降，但是，在鹽分脅迫下，超表達MdERF98的轉基因王林細胞的生長量顯著高于野生型， MdERF98超表達顯著提高了對鹽分脅迫的抗性。
　　4.與以擬南芥為研究試材的研究結果不同，在蘋果中超表達MdERF98，沒有顯著提高維生素C的含量。推測，在蘋果細胞中，