兩種方法對血培養(yǎng)陽性標(biāo)本細(xì)菌鑒定及藥敏試驗的比較

1、<p>　　兩種方法對血培養(yǎng)陽性標(biāo)本細(xì)菌鑒定及藥敏試驗的比較</p><p>　　【關(guān)鍵詞】 細(xì)菌學(xué)技術(shù) </p><p>　　【Abstract】 AIM: To study the concordance rate of traditional method and direct method in bacterial species identification an

2、d drug susceptibility test. METHODS: The positive specimens detected by BacT9050 were transferred to the automatic microbiology identification system and their bacterial species identification and drug susceptibility te

3、st were conducted respectively by traditional method and by direct method. The concordance rate of the two methods was analyzed. RESULTS: The concordance</p><p>　　【Keywords】 bacteriological techniques; bac

4、teria/isolation &amp; purification; microbial sensitivity tests </p><p>　　【摘要】 目的： 比較直接法與常規(guī)法對血培養(yǎng)陽性標(biāo)本進(jìn)行細(xì)菌鑒定及藥敏試驗的一致率. 方法： 將BacT9050型血培養(yǎng)儀報警的陽性標(biāo)本，直接上機進(jìn)行細(xì)菌檢測及藥敏試驗，同時將陽性標(biāo)本轉(zhuǎn)種平板分離培養(yǎng)，分純后的菌落按常規(guī)法上機鑒定及藥敏試驗，并對兩種方

5、法進(jìn)行比較. 結(jié)果： 直接法與常規(guī)法對腸桿菌科的鑒定一致率為95%，對非發(fā)酵菌、弧菌科及革蘭陽性球菌的鑒定一致率分別為75%, 67%, 77%. 兩種方法藥敏試驗結(jié)果比較無顯著差異(Z=-1.002, P=0.316). 結(jié)論： 對血培養(yǎng)陽性標(biāo)本直接上機進(jìn)行鑒定及藥敏試驗，與常規(guī)法檢測結(jié)果無顯著差異，而報告時間明顯縮短. </p><p>　　【關(guān)鍵詞】 細(xì)菌學(xué)技術(shù)；細(xì)菌/分離和提純；微生物敏感性試驗 <

6、/p><p><b>　　0引言 </b></p><p>　　菌血癥和敗血癥是臨床上嚴(yán)重危及患者生命的疾病，病死率可高達(dá)29%. 因此，快速準(zhǔn)確的菌種鑒定與藥敏試驗是臨床診斷和治療的關(guān)鍵. 隨著全自動血培養(yǎng)儀的引進(jìn)，不僅大大提高了血培養(yǎng)陽性率，而且對于陽性標(biāo)本24 h內(nèi)可報警提示，比傳統(tǒng)手工血培養(yǎng)縮短了24~48 h. 但血培養(yǎng)陽性標(biāo)本從采集到給臨床一份完整的結(jié)果報告，

7、仍需要3~4 d［1］. 為進(jìn)一步縮短檢測時間，我們從全自動血培養(yǎng)儀報警的陽性標(biāo)本中提取菌液，直接上全自動微生物分析儀檢測，同時與陽性標(biāo)本轉(zhuǎn)種孵育后再上機檢測的常規(guī)方法進(jìn)行比較. </p><p><b>　　1材料和方法 </b></p><p><b>　　1.1材料 </b></p><p>　　我院200103/2

8、00210門診及住院患者中發(fā)燒并伴全身感染癥狀者血培養(yǎng)標(biāo)本358例. BacT9050型全自動血培養(yǎng)儀、樹脂血培養(yǎng)瓶均為美國Bactec Dickinson公司生產(chǎn)；Walkaway40全自動微生物鑒定儀、G-菌鑒定及藥敏綜合板（NC21）、G+菌鑒定及藥敏綜合板（PC11）為美國DadeBerhing公司產(chǎn)品；分離用血平板、麥康凱平板、巧克力平板購于陜西寶泰克生物科技有限責(zé)任公司. </p><p><b

9、>　　1.2方法 </b></p><p>　　1.2.1陽性標(biāo)本的處理與直接檢測將臨床標(biāo)本的血培養(yǎng)瓶放入BacT9050系統(tǒng),系統(tǒng)自動孵育和檢測. 當(dāng)系統(tǒng)發(fā)生響聲報警時，提示有細(xì)菌生長的陽性瓶被檢出. 用無菌注射器抽取陽性瓶中菌液涂片，行革蘭染色后鏡檢，根據(jù)鏡檢結(jié)果盲試選擇觸酶或氧化酶，并將菌液濃度調(diào)整至6.9×108 CFU/L. 然后將其接種于相對應(yīng)的NC21或PC11綜合板，上

10、微生物分析儀進(jìn)行細(xì)菌鑒定與藥敏試驗. </p><p>　　1.2.2陽性標(biāo)本的常規(guī)檢測將陽性標(biāo)本分別轉(zhuǎn)種血平板、麥康凱平板和巧克力平板，經(jīng)35℃孵育18~24 h后，挑取生長菌落涂片，行革蘭染色鏡檢. 根據(jù)鏡檢結(jié)果選擇相應(yīng)的氧化酶或觸酶試驗，按Walkaway40系統(tǒng)操作步驟上機進(jìn)行細(xì)菌鑒定與藥敏試驗. </p><p>　　統(tǒng)計學(xué)處理： 采用MannWhitney U檢驗，檢驗水準(zhǔn)α=

11、0.05. </p><p><b>　　2結(jié)果 </b></p><p>　　2.1直接法與常規(guī)法細(xì)菌鑒定結(jié)果的比較358例血培養(yǎng)標(biāo)本經(jīng)血培養(yǎng)儀報警為陽性的135例. 其中經(jīng)常規(guī)法鑒定出G-桿菌101株，G+球菌34株，直接法鑒定出G-桿菌88株，G+球菌26株. 兩種方法菌種鑒定總一致率為84%，其中腸桿菌科鑒定一致率為95%，非發(fā)酵菌與弧菌科一致率分別為75%與

12、2/3，G+球菌一致率77%. 直接法未檢測出細(xì)菌有21株，其中葡萄球菌屬6株，不動桿菌屬4株，假單胞菌屬3株，腸桿菌屬、黃桿菌屬、腸球菌屬各2株，變形桿菌屬、氣單胞菌屬各1株（Tab 1）.表1直接法與常規(guī)法對135株菌鑒定一致率的比較（略） </p><p>　　2.2直接法與常規(guī)法藥敏試驗結(jié)果的比較從藥敏試驗的結(jié)果（Tab 2）可見，兩種方法對135例陽性標(biāo)本細(xì)菌藥敏結(jié)果的總一致率為96%，其中對G-菌測試

13、的總一致率為95%（敏感、中度敏感、耐藥的一致率分別為96%, 88%, 96%），對G+菌測試的總一致率為99%（敏感、中度敏感、耐藥的一致率分別為97%, 88%, 99%）. 統(tǒng)計學(xué)分析顯示，兩種方法對G-菌藥敏結(jié)果無顯著差異（Z=-1.075, P=0.282），對G+菌藥敏結(jié)果無顯著差異（Z=-0.118, P=0.906），對135株細(xì)菌的藥敏結(jié)果均無顯著性差異(Z=-1.002, P=0.316).表2直接法與常規(guī)法對13

14、5株菌藥敏試驗結(jié)果的比較（略） </p><p><b>　　3討論 </b></p><p>　　血培養(yǎng)是菌血癥、敗血癥臨床診斷的關(guān)鍵，但血培養(yǎng)陽性標(biāo)本按常規(guī)法進(jìn)行細(xì)菌鑒定和藥敏試驗，往往需要2~3 d，且有些細(xì)菌常規(guī)鑒定幾天也無法確定結(jié)果，這使得患者得不到及時有效的治療. 因此,如何對血培養(yǎng)陽性標(biāo)本進(jìn)行快速準(zhǔn)確的菌種鑒定和藥敏試驗，一直是臨床微生物工作者亟待解決的

15、問題. 目前新發(fā)展的直接檢測方法，因其具有簡便、快速，在確定純培養(yǎng)和染色鏡檢結(jié)果正確的情況下無須再進(jìn)行轉(zhuǎn)種的優(yōu)點，逐漸引起臨床檢驗工作者的關(guān)注. 本實驗所采取的直接鑒定法也是只需根據(jù)陽性標(biāo)本涂片染色后的鏡檢結(jié)果來選擇相應(yīng)的鑒定板型，調(diào)整合適的菌液濃度直接上機進(jìn)行檢測. 但與過去文獻(xiàn)報道的直接鑒定法相比，本實驗在兩個方面有所改進(jìn)： 一是采用了樹脂血培養(yǎng)瓶，其最大優(yōu)點是能溶解血液紅細(xì)胞和白細(xì)胞、無須離心且對直接法檢測的結(jié)果沒有影響［2］.

16、二是比較菌種鑒定一致率的同時，還對兩種方法藥敏檢測結(jié)果的符合率進(jìn)行了比較. </p><p>　　比較本實驗兩種方法對135株血培養(yǎng)陽性標(biāo)本細(xì)菌鑒定的結(jié)果，發(fā)現(xiàn)兩者對腸桿菌科的鑒定一致率高達(dá)95%，說明應(yīng)用直接法來快速檢測腸桿菌科有著與傳統(tǒng)的常規(guī)法相近的高鑒定率，這與Waites等［3］報道的結(jié)果基本一致. 但直接法與常規(guī)法對有些細(xì)菌的檢測結(jié)果并不一致［4,5］. 本實驗的結(jié)果顯示，兩種方法對非發(fā)酵菌和苛養(yǎng)菌的鑒

17、定一致率相對較低. 這可能與這些細(xì)菌營養(yǎng)要求較高，在鑒定板中生長緩慢或不充分有關(guān)，也可能是由于實驗中根據(jù)鏡檢細(xì)菌形態(tài)盲試選擇觸酶或氧化酶，從而對生化反應(yīng)的測試板選擇和數(shù)據(jù)庫編碼的合理性有關(guān). 本實驗中直接法存在的這些不足，需進(jìn)一步補充試驗加以確證. </p><p>　　臨床快速得到藥敏結(jié)果不但比快速得到準(zhǔn)確的細(xì)菌鑒定結(jié)果更為重要、迫切，而且根據(jù)某些細(xì)菌的藥敏試驗結(jié)果還可進(jìn)一步修正或確認(rèn)菌種的鑒定結(jié)果. 因此，我

18、們在比較血培養(yǎng)陽性標(biāo)本細(xì)菌鑒定一致率的同時，還對兩種方法藥敏檢測結(jié)果的符合率進(jìn)行了比較. 統(tǒng)計分析結(jié)果表明，兩種方法對135例血培養(yǎng)陽性標(biāo)本的藥敏檢測結(jié)果無顯著性差異. 這進(jìn)一步說明，利用直接法進(jìn)行鑒定與藥物敏感試驗，不但可以省略傳統(tǒng)鑒定方法中的細(xì)菌分離培養(yǎng)步驟，而且在血培養(yǎng)儀報告陽性瓶次日即可將準(zhǔn)確結(jié)果快速預(yù)報給臨床醫(yī)生. 這為臨床選擇用藥提供了及時有效的依據(jù)，避免了經(jīng)驗用藥，減少了并發(fā)癥及院內(nèi)感染，對提高菌血癥、敗血癥等感染性疾病的

19、治愈率具有重要的意義. </p><p><b>　　【參考文獻(xiàn)】 </b></p><p>　?。?］ 胡必杰. 我國細(xì)菌藥敏試驗如何適應(yīng)醫(yī)院感染控制的淺見［J］. 中華醫(yī)學(xué)檢驗雜志,1996;19（2）：115. </p><p>　　Hu BJ. Review on how to control the hospital infectio

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