紅麻蛋白質(zhì)組2-DE建立及不育系和保持系差異蛋白分析.pdf

1、紅麻(Hibiscus cannabinus L.)為錦葵科木槿屬喜溫短日性一年生草本韌皮纖維植物,具有耐環(huán)境脅迫能力強(qiáng)、適應(yīng)性廣、纖維產(chǎn)量高、品質(zhì)好等特性。本研究以紅麻細(xì)胞質(zhì)雄性不育系L23A與保持系L23B為實驗材料,選擇花發(fā)育3個不同時期,在幼蕾、大蕾、開花3個時期,取周邊功能葉為材料。通過生理生化指標(biāo)測定以及差異蛋白組學(xué)分析,旨了解紅麻不育系L23A與紅麻保持系L23B之間的差異,揭示紅麻不育的分子機(jī)理系。研究結(jié)果如下：

2、　　 ⑴比較了紅麻不育系L23A與保持系L23B在幼蕾、大蕾、開花3個不同發(fā)育時期的游離脯氨酸含量。處于三個不同時期的游離脯氨酸的含量有較大的變化,幼蕾含量最高,不育系L23A高于保持系L23B;三個時期可溶性糖含量基本穩(wěn)定,變化趨勢不大,保持系L23B略高于不育系L23A的含量;三個不同花的發(fā)育過程中可溶性蛋白質(zhì)含量,隨著雄花蕾的發(fā)育,不育系L23A與保持系L23B總體趨勢呈現(xiàn)下降的趨勢,保持系L23B可溶性蛋白質(zhì)含量略高于不育系L

3、23A。
　　 ⑵紅麻蛋白質(zhì)提取體系的建立,紅麻葉片采用TCA-丙酮法比苯酚抽提法提取效率高且蛋白點(diǎn)明顯增加;往蛋白質(zhì)干粉的裂解液中增加硫脲后可以獲得更多的差異點(diǎn);對第二向的膠分別進(jìn)行染色,考馬斯亮藍(lán)G-250比R-250以及銀染色方法更適合,雖然銀染靈敏最好,但可重復(fù)性較差;確定了最適上樣量為300μg。利用PDQUEST軟件進(jìn)一步對雙向電泳產(chǎn)生的2-DE蛋白質(zhì)圖譜進(jìn)行比較分析,結(jié)果較為理想,為紅麻蛋白質(zhì)組學(xué)的研究奠定實驗基礎(chǔ)

4、。
　　 ⑶比較了紅麻不育系L23A與保持系L23B蛋白差異點(diǎn),通過MALDI-TOF-MS/MS串聯(lián)質(zhì)譜分析了紅麻不育顯著相關(guān)的12個蛋白點(diǎn),其中6個蛋白點(diǎn)得以鑒定,這6個蛋白點(diǎn)不育系均表現(xiàn)為下調(diào)。6個與紅麻不育有關(guān)的蛋白質(zhì)及其功能如下:1個Rubisco或其大亞基,為所有光合生物進(jìn)行光合碳同化的關(guān)鍵酶;2個Rubisco活化酶,為廣泛存在于光合生物中調(diào)節(jié)Rubisco活性的酶;1個轉(zhuǎn)錄因子;1個蘋果酸脫氫酶,為參與檸檬酸循環(huán)