人類胰液蛋白質(zhì)組學(xué)研究——研究方法、2-DE蛋白數(shù)據(jù)庫、圖譜表達(dá)規(guī)律及胰腺癌比較蛋白質(zhì)組學(xué)分析.pdf

1、蛋白質(zhì)組學(xué)是以細(xì)胞、組織或體液內(nèi)全部蛋白質(zhì)的存在及其活動(dòng)方式為研究對(duì)象，研究其結(jié)構(gòu)、功能、相互作用和修飾。將蛋白質(zhì)組學(xué)應(yīng)用于疾病研究，為尋找疾病分子標(biāo)記和藥物靶標(biāo)提供了新的方法和思路。胰腺癌是惡性程度最高預(yù)后最差的腫瘤之一，居我國腫瘤死因順位的6-8位(男性)和9-10位(女性)。提高早期診斷水平，實(shí)現(xiàn)早期診斷、早期治療是改善胰腺癌預(yù)后的關(guān)鍵。近年來應(yīng)用蛋白質(zhì)組學(xué)方法尋找腫瘤標(biāo)志物成為醫(yī)學(xué)基礎(chǔ)研究的熱點(diǎn)。胰腺癌的蛋白質(zhì)組學(xué)研究剛剛起步，

2、用雙向電泳的方法研究胰液蛋白質(zhì)組學(xué)尚無報(bào)道。本課題以人類胰液為研究對(duì)象，以雙向電泳為技術(shù)平臺(tái)，探索胰液蛋白質(zhì)組學(xué)研究的方法、胰液蛋白2-DE圖譜的表達(dá)規(guī)律、建立胰液蛋白的2-DE數(shù)據(jù)庫、并初步探索胰腺癌和胰腺良性疾病間比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究。 選擇有效的標(biāo)本預(yù)處理方法是開展蛋白質(zhì)組學(xué)研究的前提。根據(jù)胰液生理特點(diǎn)，胰液預(yù)處理要達(dá)到三個(gè)目的，脫鹽、蛋白濃縮、防止蛋白降解。本文比較了丙酮沉淀、PlusOne2-DClean-Upkit和超

3、濾離心三種預(yù)處理方法，證實(shí)超濾離心脫鹽充分，2-DE膠上蛋白點(diǎn)分離完全，是有效的胰液預(yù)處理方法。為防止蛋白降解我們采取低溫操作、加入高濃度蛋白酶抑制劑的方法，能夠有效抑制蛋白的降解。經(jīng)過上述預(yù)處理后，胰液的2-DE圖譜具有良好的穩(wěn)定性。 本文選擇胰腺功能正常、胰管正常的膽囊結(jié)石患者的胰液標(biāo)本進(jìn)行2-DE膠上蛋白點(diǎn)的MALDI-TOF質(zhì)譜分析，鑒定出80個(gè)蛋白點(diǎn)，代表了22種蛋白。大部分蛋白為蛋白酶，參與蛋白代謝過程、亞細(xì)胞定位位

4、于細(xì)胞外，符合外分泌消化液的生理特點(diǎn)。 為了進(jìn)行胰液比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究，本文分析了胰液2-DE圖譜的表達(dá)規(guī)律。靜脈快速注射Secretin后收集的胰液標(biāo)本，蛋白濃度隨時(shí)間延長逐漸下降，較早采集時(shí)間的胰液2-DE圖譜上蛋白質(zhì)點(diǎn)多于較晚采集時(shí)間的圖譜，通過對(duì)4例患者圖譜—采集時(shí)間的分析，認(rèn)為隨著時(shí)間延長，胰液中由于Secretin刺激分泌的蛋白比例增加，而蛋白的種類減少，因此應(yīng)用比較蛋白質(zhì)組學(xué)尋找腫瘤標(biāo)志物的研究應(yīng)該選用較早采集時(shí)間

5、段的胰液標(biāo)本，以第一管或第二管為佳。 通過對(duì)16例患者的胰液標(biāo)本進(jìn)行2-DE分析，結(jié)合患者的臨床特點(diǎn)和MALDI-TOF鑒定結(jié)果，胰液2-DE圖譜分為3種類型：(1)胰液2-DE圖譜上各種蛋白酶和胰腺石蛋白表達(dá)完整，無明顯缺失，這些患者的ERCP表現(xiàn)為胰管無明顯狹窄或狹窄位于胰腺的體尾部。此類患者，其胰液的流量較大，胰液中蛋白的濃度較高。(2)胰液2-DE圖譜上各種蛋白酶和胰腺石蛋白大部分或全部缺失，這些患者的ERCP表現(xiàn)為胰頭

6、部或胰頸部胰管明顯狹窄或中斷。其胰液流量明顯減少，蛋白濃度低。(3)胰液2-DE圖譜上各種蛋白酶和胰腺石蛋白呈現(xiàn)中等程度的缺失，這些患者的ERCP表現(xiàn)為胰管頭部或頸部的中等程度狹窄。其胰液流量和蛋白濃度介于前兩種類型之間。 本文初步探討了胰液比較蛋白質(zhì)組學(xué)研究的可行性。胰液2-DE圖譜上蛋白點(diǎn)的表達(dá)個(gè)體差異大，在應(yīng)用2-DE方法尋找腫瘤生物過程引起的蛋白差異時(shí)，應(yīng)在相同圖譜類型中比較疾病間的蛋白差異表達(dá)。 本研究是首次對(duì)