白蘞提取物核磁共振指紋圖譜的研究【開題報告】

1、<p><b>　　畢業(yè)論文開題報告</b></p><p><b>　　化學工程與工藝</b></p><p>　　白蘞提取物核磁共振指紋圖譜的研究</p><p><b>　　一、前言</b></p><p>　　中藥指紋圖譜是一種綜合的，可量化的鑒定手段，它是建

2、立在中藥化學成分系統(tǒng)研究的基礎上，主要用于評價中藥材以及中藥制劑半成品質量的真實性、優(yōu)良性和穩(wěn)定性。中藥及其制劑均為多組分復雜體系，因此評價其質量應采用與之相適應的，能提供豐富鑒別信息的檢測方法，建立中藥指紋圖譜將能較為全面地反映中藥及其制劑中所含化學成分的種類與數(shù)量，進而對藥品質量進行整體描述和評價[1]。在此基礎上，如果進一步開展譜效學研究，可使中藥質量與其藥效真正結合起來，有助于闡明中藥作用機理。總之，中藥指紋圖譜的研究和建立，對

3、于提高中藥質量，促進中藥現(xiàn)代化具有重要意義。</p><p>　　二、中藥指紋圖譜概述</p><p>　　中藥指紋圖譜技術的特色和創(chuàng)新點</p><p>　　中藥指紋圖譜的研究以反映中藥的整體化學特征為立論依據(jù)，提出以解決兩個關鍵技術為突破口，實現(xiàn)指紋圖譜技術在中藥質量控制方面的應用。它的特色主要表現(xiàn)在三個方面： </p><p>　　1、

4、用規(guī)范化的程序獲得中藥特征性總成分提取物，并用1HNMR、HPLC、UV、IR等多種手段表征其組成和結構。不同的表征手段間的區(qū)別主要表現(xiàn)在所得到的信息多少不同和操作上的方便程度不同。同此，核心的問題在于這種特征性總成分提取物要有真正的特征性，它的組成和結構要能正真代表這種中藥。</p><p>　　2、由于同時采用多種檢測手段來表征中藥特征總提物的結構和相對組成方式，因此，方便了各部門在質量控制方面可以根據(jù)自己的

5、實際情況選擇應用。其中，由于1HNMR具有操作簡便、快速、檢測成本低、重現(xiàn)性好和信息量大等優(yōu)點，更是中藥指紋圖譜研究的主要特色之一[2]。 </p><p>　　3、中藥指紋圖譜的解析研究以及中藥特征總提物和各單體成分的生理活性研究體現(xiàn)了這一技術的科學性。 </p><p>　　中藥指紋圖譜的研究將近代分離手段和儀器分析技術應用于中藥的質量控制，目的在于建立一種新的質量控制方法，因此，是一

6、種具有創(chuàng)新性的研究工作。另外，每種中藥指紋圖譜的建立和對其進行的解析也均具有顯著的創(chuàng)新性。</p><p>　　指紋圖譜建立的一般原則</p><p>　　中藥指紋圖譜的建立，應以系統(tǒng)的化學成分研究和藥理學研究為依托，體現(xiàn)系統(tǒng)性、特征性和穩(wěn)定性三個基本原則。為此，才能保證指紋圖譜的標準化、規(guī)范化、客觀化，從而便于推廣和應用[3]。 </p><p>　　1.系統(tǒng)性

7、是指指紋圖譜中反映的化學成分應包括該中藥有效部位所含大部分成分，或指標性成分的全部，如中藥兩頭尖中抗腫瘤的有效成分為皂苷類化合物，則其指紋圖譜應盡可能地反映其中的皂苷類成分；銀杏葉的有效成分是黃酮類和銀杏內酯類，則其指紋圖譜可采用兩種方法，針對這兩類成分分別分析，達到系統(tǒng)全面的目的。 </p><p>　　2.特征性 是指指紋圖譜中反映的化學信息（如保留時間）應具有較強的選擇性，這些信息的綜合結果，將能特征性地區(qū)

8、分中藥的真?zhèn)闻c優(yōu)劣，成為中藥自身的“化學條碼”。如北五味子的HPLC指紋圖譜和TLC指紋圖譜，不僅包括多種的五味子木脂素類成分，而且具有許多未知類成分，這些成分的峰位順序、比值在一定范圍內是固定的，并且隨藥材品種不同而產生差異，依此可以很好地區(qū)別其來源、產地，判別藥材的真?zhèn)蝺?yōu)劣。 </p><p>　　3.穩(wěn)定性 是指所建立的指紋圖譜在規(guī)定的方法、條件下的耐用程度，即不同操作者、不同實驗室所重復做出的指紋圖譜應在

9、所允許的誤差范圍內，以體現(xiàn)其通用性和實用性。因而要求包括樣品制備、分析方法、實驗過程、數(shù)據(jù)采集、處理、分析等全過程都要規(guī)范化操作，同時，還應建立相應的評價機構，對其進行客觀評價。</p><p><b>　　指紋圖譜的分類</b></p><p>　　目前，中藥指紋圖譜技術已涉及眾多方法，包括薄層掃描（TLCS）、高效液相色譜法（HPLC）、氣象色譜法（GC）和高效毛

10、細管電泳法（HPCE）等色譜法以及紫外光譜法（UV）、紅外光譜法（IR）、質譜法（MS）、核磁共振法（NMR）和X—射線衍射法等光譜法。其中色譜方法為主流方法，尤其是HPLC、TLCS和GC已成為公認的三種常規(guī)分析手段[4]。由于HPLC具有分離效能高、選擇性高、檢測靈敏度高、分析速度快、應用范圍廣等特點。中藥成分絕大多數(shù)可在高效液相色譜儀上進行分析檢測，且積累較豐富的應用經(jīng)驗。因此高效液相色譜法已成為中藥指紋圖譜技術的首選方法。隨著H

11、PLC—MS和GC—MS等聯(lián)用技術的應用[5]，中藥指紋圖譜技術更趨完善。</p><p>　　指紋圖譜技術研究概況</p><p>　　以指紋圖譜作為中藥（天然藥物）提取物及其制劑的質量控制方法，已成為目前國際共識，各種符合中藥（天然藥物）特色的指紋圖譜控制技術體系正在研究和建立。美國食品藥品管理局（FDA）允許草藥保健品申報資料中提供色譜指紋圖譜；世界衛(wèi)生組織（WHO）在1996年草藥

12、評價指導原則中也規(guī)定，如果草藥的活性成分不明確，可以提供色譜指紋圖譜以證明產品質量的一致；歐共體在草藥質量指南中亦稱，單靠測定某種有效成分考查質量的穩(wěn)定性是不夠的，因為草藥及其制劑是以整體為活性物質。色譜指紋圖譜尤其是薄層色譜的鮮明的指紋圖譜是很有用的。國外指紋圖譜的應用，目的在于解決成分復雜，有效成分不明確的植物藥質量檢測和產品批次間質量差異的問題。其中德國研制的銀杏葉提取物制劑是一個突出的例子。他們應用指紋圖譜制定了相應的標準，該圖

13、譜體現(xiàn)了制劑所含的33個化學成分（主要為黃酮類和內酯類）和各自的含量。經(jīng)化學成分和藥效相關性研究，發(fā)現(xiàn)約24%銀杏黃酮和約6%銀杏內酯組成的提取物具有最佳療效。此外，采用“混批勾兌”法[6]，可使最終產品質量穩(wěn)定，指紋圖譜重現(xiàn)性良好，含量浮動范圍為5%左右。 </p><p>　　20世紀70年代我國已有學者嘗試使用TLCS對中成藥進行分析，因主客觀條件的限制，技術和時機的不成熟，沒有得到公認；20世紀90年代《

14、中國藥典》增設了中藥化學對照品和對照藥材，為中藥指紋圖譜的研究奠定了基礎。隨著色譜技術的迅速發(fā)展和檢測能力的顯著增強，為指紋圖譜的研究和應用提供了良好的技術保證。目前我國已對中藥注射劑做出了必須用指紋圖譜進行檢測的規(guī)定，同時提出了具體的技術要求；在中藥材規(guī)范化生產實施過程中指紋圖譜亦有較廣泛的應用。 </p><p>　　但是作為一項新技術，中藥指紋圖譜在實際應用中還面臨許多問題，只有進一步加強中藥材種植加工和中

15、成藥生產貯存的規(guī)范化；中藥化學成分和中藥藥理研究的系統(tǒng)化和標準化；以及技術上多學科的滲透，才能保證中藥質量的穩(wěn)定，進而保證中藥指紋圖譜的建立和實施。</p><p>　　三、白蘞提取物核磁共振指紋圖譜的研究的研究內容及擬采取的研究方法</p><p><b>　　主要任務與目標</b></p><p>　　以有機溶劑對不同產地白蘞進行次生代謝物

16、的提取與分離，對其特征提取物進行核磁共振指紋圖譜研究。</p><p>　　分別用產地是四川、湖北和陜西的白蘞進行試驗，用乙醇對白蘞進行冷浸提取將白蘞中的有效成分提取出來，在利用旋轉蒸發(fā)儀回收乙醇提高白蘞中藥效成分的濃度并用不同極性有機溶劑石油醚、乙酸乙酯、正丁醇來萃取。取其正丁醇萃取物進行核磁共振譜圖研究及分析</p><p><b>　　主要內容</b></

17、p><p>　　先將買來的白蘞用研磨機器研磨，研磨成粉末狀。將研磨好的白蘞粉末倒入圓底燒瓶中并加入乙醇溶液，放入如圖裝置進行冷浸提取，調節(jié)水浴箱溫度調節(jié)到90℃。待冷凝管中出現(xiàn)乙醇液體時開始計時30分鐘后停止加熱將球型燒瓶取出，靜置后把球型燒瓶中提取后的乙醇溶液倒入空桶中收集起來。再將乙醇溶液倒入球型燒瓶中重復冷浸提取3到4次，將收集好的含有白蘞提取物的乙醇溶液收集在一個桶內做好標簽。</p><

18、p>　　將桶內的白蘞提取物的乙醇溶液倒入干凈的圓底燒瓶中，組裝到旋轉蒸發(fā)儀中，將旋轉蒸發(fā)儀的溫度調節(jié)到50℃并且調節(jié)好旋轉蒸發(fā)儀的轉速調經(jīng)好高度將球型燒瓶的3/1浸沒在水槽中裝置如圖所示。打開真空泵很快就會有乙醇蒸發(fā)出來并滴入大的球形燒瓶，這時候要細心觀察冷凝柱的接口處，如有倒吸暴沸的現(xiàn)象應該立即調節(jié)開關，這樣可以有效的阻止倒吸暴沸。直到收集的含有白蘞的乙醇溶液都濃縮完后將小圓底燒瓶中的白蘞提取物的濃縮物質取出再將餾出的乙醇重新回

19、收收集。分別用不同極性有機溶劑石油醚、乙酸乙酯、正丁醇來萃取白蘞的提取物，分別收集好萃取后的溶液做好標簽。隨后用旋轉蒸發(fā)儀分別將石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取的溶液進行蒸餾濃縮，得到濃度較高的白蘞提取物不同組分的物質。</p><p>　　最后取正丁醇萃取物進行核磁共振譜圖研究及分析。</p><p>　　四、論文詳細工作進度和安排</p><p><b>

20、　　計劃進度</b></p><p>　　2010年11月22日前，學生選題，布置論文任務；</p><p>　　2011年1月10日前，在廣泛查閱文獻資料的基礎上，完成外文翻譯、文獻綜述和開題報告等工作；</p><p>　　2011年5月23日前，進行課題的實驗、設計、調研及結果的處理與分析等，完成畢業(yè)設計說明書或論文寫作，進行畢業(yè)設計（論文）的修改

21、完善；</p><p>　　2011年6月10日前，畢業(yè)設計（論文）答辯。</p><p><b>　　五、主要參考文獻</b></p><p>　　[1] 甘師俊，李振吉，鄒健強.中藥現(xiàn)代化發(fā)展戰(zhàn)略［M］.北京：科學技術文獻出版社，1998</p><p>　　[2]秦海林,尚玉俊,趙偉. 核磁共振氫譜法鑒別黃連的研究

22、. 中草藥, 2000, 31(1):48.</p><p>　　[3]安燕，李海麗，于軍。建立中藥指紋圖譜的一般方法，青海師專學報（教育科學）2006年第五期</p><p>　　[4]劉慧瓊,郭書好. 現(xiàn)代儀器與中草藥指紋圖譜, 中醫(yī)藥學報, 2002, 32(2):35.</p><p>　　[5] 朱穎超，劉 斌 ，徐冬艷，石任兵. 核磁共振及其聯(lián)用技術在天