天山雪蓮指紋圖譜及總黃酮提取物研究.pdf

1、目的：①建立天山雪蓮藥材的高效液相指紋圖譜，為該藥材的質(zhì)量控制提供依據(jù)。②對天山雪蓮總黃酮提取物進(jìn)行初步質(zhì)量研究、穩(wěn)定性研究及藥效學(xué)研究，為該提取物的進(jìn)一步開發(fā)利用提供依據(jù)。方法：①收集不同產(chǎn)地的天山雪蓮藥材，采用梯度洗脫法建立HPLC指紋圖譜，應(yīng)用《中藥色譜指紋圖譜相似度評價系統(tǒng)》(2004版)軟件對指紋圖譜進(jìn)行分析評價。②采用比色法對天山雪蓮總黃酮提取物中的總黃酮含量進(jìn)行測定。③采用高效液相色譜法對天山雪蓮總黃酮提取物中的蘆丁和紫丁

2、香苷同時進(jìn)行測定。④采用影響因素試驗(yàn)考察溫度、濕度、光線對天山雪蓮總黃酮提取物的影響。⑤采用二甲苯致小鼠耳腫脹、冰醋酸致小鼠扭體、角叉菜膠致大鼠足跖腫脹、Freund's完全佐劑致大鼠原發(fā)性、繼發(fā)性關(guān)節(jié)炎損害和棉球肉芽腫等模型對照觀察天山雪蓮總黃酮提取物的抗炎、鎮(zhèn)痛等作用，采用MTT法測定對小鼠T、B淋巴細(xì)胞增殖的影響。結(jié)果：①建立了天山雪蓮藥材的HPLC指紋圖譜，對圖譜進(jìn)行比對發(fā)現(xiàn)雖產(chǎn)自不同地區(qū)，但圖譜相似度差別不顯著。②用比色法測定

3、天山雪蓮提取物中總黃酮含量，方法學(xué)考察表明本法符合測定要求，其中標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：y=0.5251x-0.0223(r=0.9996)，蘆丁在0.2-1.2mg范圍內(nèi)線性關(guān)系良好；精密度試驗(yàn)RSD為0.46％；穩(wěn)定性試驗(yàn)RSD為1.01％，表明供試品溶液放置5天對測定結(jié)果無影響；重復(fù)性試驗(yàn)RSD為0.70％；加樣回收率試驗(yàn)平均回收率102.32％，RSD為0.96％；3批樣品中總黃酮含量分別為44.39％、42.64％、43.14％。③用

4、高效液相色譜法同時測定天山雪蓮總黃酮提取物中的蘆丁和紫丁香苷，方法學(xué)考察表明本法符合測定要求，其中紫丁香苷標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：A=25842626.81C-939.15，r=0.9999，表明在0.00276～0.02208mg/ml范圍內(nèi)，紫丁香苷峰面積與濃度具有良好的線性關(guān)系；蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線方程為：A=17863886.50C-28941.33，r=0.9996，表明在0.02～0.16mg/ml范圍內(nèi)，蘆丁峰面積與濃度具有良好的線性關(guān)系

5、；精密度試驗(yàn)紫丁香苷和蘆丁的RSD分別為0.97％和0.90％：重復(fù)性試驗(yàn)紫丁香苷和蘆丁的RSD分別為1.16％和1.13％；穩(wěn)定性試驗(yàn)紫丁香苷和蘆丁的RSD分別為1.78％和1.89％；加樣回收率試驗(yàn)紫丁香苷平均回收率為102.56％，RSD為1.40％；蘆丁平均回收率為101.85％，RSD為1.89％；3批樣品中紫丁香苷含量分別為0.88％、0.85％、0.97％；蘆丁含量分別為7.22％、6.34％、6.82％。④影響因素試驗(yàn)結(jié)

6、果表明，溫度(60℃)、光照(45001x)對天山雪蓮提取物的外觀性狀無影響，但相對濕度(RH75％)可引起其吸潮結(jié)塊；溫度(60℃)對天山雪蓮提取物中總黃酮、紫丁香苷和蘆丁的含量均無影響；相對濕度(RH75％)和光照(45001x)對天山雪蓮提取物中紫丁香苷含量無影響，但可使其中總黃酮和蘆丁的含量略有降低；提示該提取物應(yīng)儲存于干燥避光環(huán)境。⑤藥效試驗(yàn)結(jié)果表明，天山雪蓮總黃酮提取物對佐劑性關(guān)節(jié)炎原發(fā)性和繼發(fā)性損害均有保護(hù)作用，并能抑制二

7、甲苯致小鼠耳腫脹，明顯減少冰醋酸致小鼠扭體反應(yīng)次數(shù)，能減輕角叉菜膠致大鼠足腫脹度，明顯抑制大鼠棉球肉芽腫，從抑制率來看，天山雪蓮總黃酮提取物大劑量作用均優(yōu)于陽性對照藥野木瓜片；天山雪蓮總黃酮提取物在濃度0.13-4mg/ml范圍內(nèi)對T、B淋巴細(xì)胞的增殖均有明顯抑制作用，在濃度<0.06mg/ml時抑制作用均明顯減弱；說明天山雪蓮總黃酮提取物有良好的抗炎鎮(zhèn)痛和調(diào)節(jié)機(jī)體免疫功能的作用。結(jié)論：①建立天山雪蓮藥材的指紋圖譜，為綜合評價天山雪蓮藥