甘蔗葉指紋圖譜的建立及其總黃酮抗炎作用研究.pdf

1、目的:本文以甘蔗葉為研究對(duì)象。研究甘蔗葉總黃酮的提取工藝，確定最佳提取工藝；測定甘蔗葉中總黃酮的含量；建立甘蔗葉高效液相色譜指紋圖譜；進(jìn)行甘蔗葉總黃酮提取物的抗炎作用研究。
　　方法:1.甘蔗葉總黃酮的提取工藝研究:以甘蔗葉總黃酮的含量為評(píng)價(jià)指標(biāo)，以提取溫度、提取時(shí)間、固液比和乙醇濃度為考察因素，采用L9（34）正交試驗(yàn)法優(yōu)化甘蔗葉總黃酮提取工藝。2.甘蔗葉中總黃酮的含量測定:采用分光光度法，以蘆丁為對(duì)照品，AlCl3為顯色劑，在

2、417nm處進(jìn)行甘蔗葉總黃酮含量測定。3.甘蔗葉指紋圖譜的建立:采用HPLC法對(duì)17個(gè)不同品種的甘蔗葉進(jìn)行分析。通過色譜條件優(yōu)化、方法學(xué)考察研究，確認(rèn)共有峰，建立對(duì)照指紋圖譜，確定各種技術(shù)參數(shù)，應(yīng)用中藥色譜指紋圖譜相似度評(píng)價(jià)系統(tǒng)軟件（2004A版）計(jì)算指紋圖譜的相似度。4.甘蔗葉總黃酮提取物的抗炎作用研究:采用不同類型的炎癥小鼠模型，進(jìn)行二甲苯致小鼠耳廓腫脹實(shí)驗(yàn)、小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性實(shí)驗(yàn)、小鼠棉球肉芽腫增生試驗(yàn)，觀察甘蔗葉總黃酮的抗炎

3、作用。
　　結(jié)果:1.優(yōu)選出甘蔗葉總黃酮提取的最佳工藝:溶劑為70％乙醇，料液比1:25，提取溫度80℃，每次2h。2.三氯化鋁顯色法測定甘蔗葉總黃酮平均含量6.77mg/g，平均回收率95.5%，RSD=1.5%.3.建立甘蔗葉HPLC的指紋圖譜。確定了如下色譜條件:檢測長:320nm，流動(dòng)相:乙腈-0.1%冰醋酸，梯度洗脫，柱溫:25℃，流速:1ml·min-1，在95min內(nèi)記錄甘蔗葉的指紋圖譜。根據(jù)國家中藥注射液指紋圖譜研

4、究的技術(shù)要求，確定14個(gè)共有峰，其中15個(gè)品種的甘蔗葉相似度大于0.9。4.甘蔗葉總黃酮提取物能明顯抑制小鼠耳廓炎癥，對(duì)醋酸所致的小鼠腹腔毛細(xì)血管通透性增高有顯著的抑制作用，對(duì)小鼠棉球肉芽腫增生有顯著的抑制作用。
　　結(jié)論:本研究所建立的甘蔗葉總黃酮提取工藝中，影響甘蔗葉總黃酮提取效率的主要因素為料液比，其次是提取溫度；所建立的甘蔗葉中總黃酮的含量測定方法操作簡便、準(zhǔn)確，具有很好的重現(xiàn)性和穩(wěn)定性；甘蔗葉總黃酮具有一定的抗炎作用；建