苦瓜皂甙的分離純化及其指紋圖譜的建立.pdf

1、苦瓜(MomordicacharantiaL.)是葫蘆科(Cucurbitaceae)苦瓜屬(Momordica)植物，因其果實具有特殊苦味而得名?？喙闲院犊?，具有清熱解毒、滋養(yǎng)強壯、降血糖、抑菌、抗腫瘤以及提高人體免疫力等功效，同時也是人們喜愛的蔬菜之一，具有藥食兩用的功能。本文對苦瓜中活性成分苦瓜皂甙進行了分離純化，并對其指紋圖譜進行了研究，內(nèi)容如下： 采用大孔吸附樹脂對苦瓜皂甙進行了分離純化，選擇了極性不同、孔徑、比表面

2、積各異的五種大孔吸附樹脂，比較其對苦瓜皂甙的吸附量、吸附率、解吸率及靜態(tài)動力吸附曲線等指標(biāo)，篩選出較優(yōu)的一種樹脂并對其相關(guān)條件下的動態(tài)吸附和解吸性能進行研究。結(jié)果表明：AB-8大孔吸附樹脂對苦瓜皂甙有較好的吸附和解吸性能，最佳洗脫劑為80％的乙醇溶液。當(dāng)層析柱規(guī)格為2×60cm時，最佳工藝參數(shù)為：pH6-7下，上樣液濃度15mg/mL、上樣速度為2.5mL/min，用6BV(柱床體積)體積分?jǐn)?shù)為80％的乙醇溶液基本可將苦瓜皂甙完全洗脫下

3、來，解吸率為90.7％。將所得洗脫液濃縮、冷凍干燥，比色法測得其皂甙含量為63.2％。 將AB-8樹脂純化后的總皂甙進行硅膠柱層析，用不同極性氯仿和甲醇的洗脫劑進行梯度洗脫，得到兩組分。對這兩組分進行重復(fù)硅膠柱層析并結(jié)晶，得到兩種物質(zhì)記為a和b，對其分別作Libermann-Buehard試驗和泡沫試驗，由試驗結(jié)果定性為皂甙。用與苦瓜皂甙結(jié)構(gòu)相似的人參皂甙Rg1作對照，在相同的色譜條件下，這兩種物質(zhì)的出峰時間與之相近，進一步推斷

4、為苦瓜皂甙，在展開劑條件為氯仿：甲醇為8:1時，Rf值分別為0.43和0.16。 為了能從整體上反映苦瓜皂甙的種類，對不同產(chǎn)地的苦瓜進行了HPLC指紋圖譜研究，并采用HPLC-UV法確定了最佳色譜分析條件，即色譜柱：ZorbaxSB-C18柱(150×4.6mm，5μm)；柱溫：25℃；檢測波長：209nm；流速：1.0mL/min；進樣量：20μL；流動相：水(A)和乙腈(B)梯度洗脫：O～15min，A:70％～98％，B:

5、2％～30％；15～55min，A:40％～70％，B:30％～60％；55～65min，A:20％～40％，B:60％～80％；分析時間：65min。以色譜圖中面積相對較大、比較穩(wěn)定的、出峰時間在42.058min左右的物質(zhì)峰作為參照峰對苦瓜皂甙指紋圖譜進行了分析，確定了8個共有峰，并對指紋圖譜進行了相似度計算，并生成了對照指紋圖譜，獲得了滿意的結(jié)果。所建立的HPLC指紋圖譜具有較大的穩(wěn)定性和重現(xiàn)性，該研究為苦瓜的質(zhì)量評價提供了一種手