甘草黃酮的分離鑒定、藥效及其指紋圖譜研究.pdf

1、隨著對(duì)甘草藥理作用的進(jìn)一步認(rèn)識(shí)，全世界對(duì)甘草的需求日益增長，甘草資源急劇減少，合理開發(fā)甘草資源已十分必要。甘草的植物化學(xué)成分十分復(fù)雜，以往人們只對(duì)甘草中的三萜類化合物作了大量的研究，對(duì)其質(zhì)量評(píng)價(jià)也僅以甘草酸的含量作為標(biāo)準(zhǔn)，難以全面地評(píng)價(jià)甘草的質(zhì)量。近年來，對(duì)甘草藥理作用的深入研究表明，甘草黃酮類化合物具有多種藥理作用，是一類非常有效的活性成分。因此，本課題對(duì)甘草中總黃酮的分離純化及重要單體甘草查爾酮A和光甘草定的分離鑒定和藥效進(jìn)行研究，

2、同時(shí)建立脹果甘草黃酮類化合物的HPLC指紋圖譜，為甘草黃酮資源的有效、合理開發(fā)和質(zhì)量評(píng)價(jià)提供依據(jù)。 本論文首先建立了甘草中總黃酮的含量測定方法，測定脹果甘草、光果甘草和烏拉爾甘草中總黃酮平均含量分別為：4.476％、2.478％和1.372％。 對(duì)比研究了甘草總黃酮的幾種不同提取方法，結(jié)果超聲輔助法提取甘草總黃酮在提取時(shí)間和提取效率方面均優(yōu)于其他幾種方法。利用響應(yīng)面分析法優(yōu)化甘草總黃酮超聲輔助提取的工藝參數(shù)，得到超聲輔助

3、提取甘草總黃酮的最佳工藝，以此工藝進(jìn)行超聲輔助提取甘草總黃酮一次提取率達(dá)到80.56％。通過比較，選擇AB-8大孔樹脂純化甘草總黃酮，優(yōu)化了AB-8大孔樹脂純化甘草總黃酮的實(shí)驗(yàn)條件，經(jīng)過純化的甘草總黃酮含量達(dá)到60％以上，收率80％以上。 建立了基于生物信息學(xué)的甘草黃酮類化學(xué)成分抗乙酰膽堿酯酶活性虛擬評(píng)價(jià)的新方法，在光果甘草幾種主要化合物成分中，光甘草定與乙酰膽堿酯酶的對(duì)接能和結(jié)合能均較小，結(jié)合"吻合度"很好，與三種乙酰膽堿酯酶

4、抑制劑（加蘭他敏、石杉?jí)A甲和美曲膦脂）的對(duì)接能和結(jié)合能接近。通過分子對(duì)接分析，將光甘草定A環(huán)或B環(huán)上的氫原子用氟原子取代進(jìn)行對(duì)接分析，得到對(duì)接能和結(jié)合能與光甘草定相似的小分子5'-氟光甘草定。 根據(jù)分子對(duì)接結(jié)果，從光果甘草中提取分離并鑒定了光甘草定，還建立了甘草中光甘草定的含量測定方法，測定了光果甘草中光甘草定的平均含量為0.199％，而脹果甘草和烏拉爾甘草中沒有檢測到光甘草定。 以東莨宕堿所致的小鼠認(rèn)知功能障礙為模型，

5、研究了光甘草定對(duì)小鼠學(xué)習(xí)記憶功能的影響，在"Y"型電迷宮實(shí)驗(yàn)和跳臺(tái)實(shí)驗(yàn)中，光甘草定組(2，4 mg/kg)與模型組相比，學(xué)習(xí)記憶成績均有顯著提高，且光甘草定大劑量組（4 mg/kg）獲得了與陽性組腦復(fù)康（400 mg/kg）相當(dāng)?shù)慕Y(jié)果。中高劑量的光甘草定(2，4 mg/kg)和陽性藥美曲膦脂(50 mg/kg)能使小鼠大腦乙酰膽堿酯酶的活性分別下降14.4％，19.0％和 21.3％。 本論文還從脹果甘草中提取分離了甘草查爾酮A

6、，并運(yùn)用LC-MS和NMR對(duì)其結(jié)構(gòu)進(jìn)行了鑒定。并建立了甘草中甘草查爾酮A的含量測定方法，測定了脹果甘草和光果甘草中甘草查爾酮A的平均含量分別為0.411％和0.054％，而烏拉爾甘草中沒有檢測到甘草查爾酮A。 以二甲苯所致的小鼠耳腫脹和角叉菜膠所致的大鼠足腫脹研究了甘草查爾酮A的抗炎效果，結(jié)果表明甘草查爾酮A(5，10 mg/kg)能顯著抑制二甲苯所致的小鼠耳腫脹。三個(gè)劑量2.5，5和10 mg/kg的甘草查爾酮A 均能顯著抑制

7、角叉菜膠所致的大鼠足腫脹。甘草查爾酮A(0.1，0.5和 1 μg/mL)能顯著抑制COX-2的合成和活性，且高劑量(1 μg/mL)的甘草查爾酮A 對(duì)COX-2合成的抑制作用要強(qiáng)于0.5 μg/mL的陽性藥吲哚美辛。 采用HPLC方法，以乙腈-0.1％冰醋酸為流動(dòng)相進(jìn)行梯度洗脫，對(duì)10批脹果甘草樣品中黃酮類化合物進(jìn)行了分析研究，并采用計(jì)算機(jī)軟件對(duì)色譜峰數(shù)據(jù)進(jìn)行評(píng)價(jià)，建立了脹果甘草黃酮類成分的HPLC指紋圖譜，可利用其特征峰有效