馬蘭對動物離體子宮的興奮作用及促凝血的實(shí)驗(yàn)研究

1、<p>　　馬蘭對動物離體子宮的興奮作用及促凝血的實(shí)驗(yàn)研究</p><p>　　【摘要】 　　目的探討馬蘭乙醇提取物對己烯雌酚預(yù)處理后大鼠、小鼠離體子宮的興奮作用和對家兔體外凝血功能的影響。方法常規(guī)方法制備動物離體子宮標(biāo)本，采用BL-420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)記錄離體子宮平滑肌的活動, 以子宮收縮的幅度、頻率及收縮力作為指標(biāo), 觀察馬蘭乙醇提取物對注射己烯雌酚后大鼠、小鼠離體子宮興奮作用，計(jì)算興奮子宮的I

2、C50，以益母草為陽性對照。促凝血采用家兔體外復(fù)鈣和對凝血酶原(PT)的影響。結(jié)果馬蘭95%乙醇提取物和50%乙醇提取物對大鼠和小鼠離體子宮平滑肌有明顯地興奮作用，可加快收縮頻率、提高收縮張力和子宮活力(P＜0.05，P＜0.01)，并呈量效關(guān)系。馬蘭50%乙醇提取物能明顯縮短復(fù)鈣凝血時間(P＜0.01)，對凝血酶原時間無明顯影響。結(jié)論馬蘭95%乙醇和50%乙醇提取物對大鼠和小鼠離體子宮平滑肌具有興奮作用，其興奮子宮平滑肌的作用強(qiáng)度較益

3、母草稍強(qiáng)。并具有促凝血作用。 </p><p>　　【關(guān)鍵詞】 馬蘭； 離體子宮； 興奮作用； 凝血時間； 凝血酶原</p><p>　　馬蘭Kalimeris indica (L.)Sch-Bip為菊科馬蘭屬植物，全草可入藥。據(jù)《本草綱目》記載：馬蘭可“破宿血、養(yǎng)新血, 止鼻吐血、合金瘡、斷血痢、解酒疸、諸菌毒、蠱毒”及治“腹中急痛, 痔瘡”等病癥。馬蘭又稱魚鰍串、雞兒腸、路邊菊、田邊

4、菊等，分布于我國的江蘇、浙江、江西、福建、湖南 、湖北 、廣東、廣西、四川、貴州等地［1］。馬蘭味苦、辛，性溫、寒，以全草或根入藥，有清熱解毒，散瘀止血，溫肺止咳，散寒止痛，消積之功效，主治感冒發(fā)熱，咳嗽，急性咽炎，扁桃體炎，流行性腮腺炎，傳染性肝炎，胃、十二指腸潰瘍，小兒疳積，腸炎、痢疾、吐血、崩漏、月經(jīng)不調(diào)、外用治瘡瘍腫毒、乳腺炎、外傷出血、肺寒喘咳、胃脘冷痛等［2］。廣西少數(shù)民族有用馬蘭治療功能性子宮出血，崩漏等婦女出血性疾病之經(jīng)

5、驗(yàn)，并獲得良好的療效。據(jù)報道全葉馬蘭乙醇提取物，對蛋清所致大鼠足趾腫脹及二甲苯所致小鼠耳廓腫脹有抑制作用，對大鼠鉀離子皮下透入致痛法與小鼠扭體法有抑制作用，顯示出良好的抗炎鎮(zhèn)痛作用［3］。藥效學(xué)還研究表明馬蘭具有良好的鎮(zhèn)咳和中樞抑制作用［4］。而馬蘭興奮子宮和對凝血功能的實(shí)驗(yàn)研究未見報道。本文采用BL42</p><p><b>　　1 材料與儀器</b></p><

6、p>　　1.1 藥品與試劑 </p><p>　　馬蘭采自桂林地區(qū)（經(jīng)桂林醫(yī)學(xué)院藥學(xué)系生藥教研室王育生副教授鑒定），曬干備用。益母草購自桂林市藥材市場。取馬蘭1 000 g，用中藥材粉碎機(jī)粉碎后置于5 000 ml圓底燒瓶中加95%乙醇浸沒，加熱冷凝回流1 h，抽濾，重復(fù)上述操作3次；另取馬蘭800 g 加50%酒精浸沒，加熱冷凝回流1 h，抽濾，重復(fù)3次。分別用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀將兩種組分濃縮，45℃烘干后置冰

7、箱備用。益母草提取方法與馬蘭相同。</p><p>　　己烯雌酚注射液，天津金耀氨基酸有限公司，批號200801241；凝血酶原(PT)時間試劑盒，上海太陽生物技術(shù)有限公司，批號105035；云南白藥，批號20081113，云南白藥集團(tuán)股份有限公司。</p><p>　　1.2 動物Wistar大鼠，雌性，未孕，體質(zhì)量（220±20）g；昆明種小鼠，體質(zhì)量（30±2）

8、g；家兔，體質(zhì)量（2.2±0.2）kg；均由桂林醫(yī)學(xué)院實(shí)驗(yàn)動物中心提供，許可證號：SCXK(桂)2007-0001。</p><p>　　1.3 儀器SYC-15超級恒溫水浴，北京桑力電子設(shè)備廠產(chǎn)品；旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)器（RE-52AA），鄭州長城科工貿(mào)有限公司產(chǎn)品；BL420生物機(jī)能實(shí)驗(yàn)系統(tǒng)，成都泰盟科技有限公司產(chǎn)品。</p><p><b>　　2 方法</b&g

9、t;</p><p>　　2.1 大鼠和小鼠離體子宮平滑肌張力的測定取正常未孕大鼠12只、小鼠12只，實(shí)驗(yàn)前24 h腹腔注射己烯雌酚，劑量分別為大鼠1 mg·kg–1，小鼠2 mg·kg–1，人工造成動物動情前期或動情期，以提高子宮敏感性。實(shí)驗(yàn)時大鼠、小鼠脫頸椎處死，迅速剖腹取出子宮，分離子宮壁上附著的結(jié)締組織和脂肪組織，立即置于盛有營養(yǎng)液的玻璃皿中。將上述動物離體子宮標(biāo)本陰道端系在盛有20

10、 ml營養(yǎng)液（大鼠用DeJaion氏液［5］、小鼠用Tyrode［5］氏液）的麥?zhǔn)显〔跮型通氣管上，另一端與張力換能器（大鼠用0～5 g張力換能器、小鼠0～3 g用張力換能器）相連，通入氧氣，每秒1個小氣泡，麥?zhǔn)显〔劭販卦冢?6±0.5）℃。將BL-420生物信號采集系統(tǒng)，定標(biāo)，調(diào)零，時間常數(shù)T=DC，G=20 mv，濾波調(diào)節(jié)F=20 Hz（小鼠F=50 Hz），掃描速度S=12.50 s/div［5］。實(shí)驗(yàn)前負(fù)荷（小鼠0.5

11、 g、大鼠1 g），待穩(wěn)定15 min后，開始實(shí)驗(yàn)。加入馬蘭或益母草95%乙醇組分和50％乙醇組分溶液，由低濃度到高濃度。給藥后記錄10 min離體子宮的收縮活動，每加入一個濃度藥物待子宮平滑肌收縮達(dá)</p><p>　　2.2 體外凝血實(shí)驗(yàn)取家兔6只，心臟取血，加入3.8%枸櫞酸鈉抗凝管(抗凝劑與血按1∶9)中， 輕輕混勻，制備抗凝血液。抗凝血漿的制備：抗凝血液經(jīng)3 000 r/min，離心10 min，取上

12、清液備用。</p><p>　　將馬蘭50%乙醇提取物、云南白藥粉劑溶于生理鹽水，配制成1％濃度，進(jìn)行凝血時間(全血復(fù)鈣時間，血漿凝血酶原時間)的測定［6］。以云南白藥為陽性對照，生理鹽水為空白對照。全血復(fù)鈣試驗(yàn)：取抗凝兔血0.7 ml加生理鹽水或馬蘭或云南白藥藥液0.1 ml于試管內(nèi)，置37℃水浴中孵育5 min，加入1/40 mol氯化鈣0.1 ml，每隔30s輕輕傾斜試管1次，觀察有無凝血，從加入氯化鈣溶液

13、開始記時，到傾斜試管血塊凝固于管底而不流動時為止，即為凝血時間［7，8］。凝血酶原測定：按凝血酶原試劑盒說明操作，血漿0.1 ml，加PT試劑0.1 ml，對照組加30 μl生理鹽水，給藥組加藥液30 μl，在有機(jī)玻璃板的凹坑內(nèi)37℃孵育3 min，用大頭針混勻，每隔3 s挑1次，直至出現(xiàn)凝塊即為凝血酶原時間。每藥重復(fù)試驗(yàn)3次，取其平均值，與生理鹽水組比較求出凝血時縮短的程度。用t檢驗(yàn)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。</p><p&

14、gt;<b>　　3 結(jié)果</b></p><p>　　3.1 馬蘭95%乙醇和50％乙醇提取物對大鼠和小鼠離體子宮平滑肌興奮的IC50測定結(jié)果 </p><p>　　以馬蘭95%乙醇組分和50%乙醇組分對每個動物離體子宮標(biāo)本收縮最高振幅為100%，依次計(jì)算出不同濃度收縮子宮百分率，以振幅的百分?jǐn)?shù)為y軸，以最終濃度（mg·ml-1）為x軸，代入回歸方程y

15、=ax+b，經(jīng)計(jì)算機(jī)（Windows2007, Microsoft Excel數(shù)據(jù)分析工具）求出a和b，再求出平均50%的效應(yīng)即IC50。見表1。結(jié)果可見馬蘭95%乙醇組分對大鼠離體子宮的興奮作用比益母草稍強(qiáng)。表1 馬蘭和益母草興奮大鼠和小鼠離體子宮平滑肌的IC50結(jié)果(略)</p><p>　　3.2 馬蘭95%乙醇和50％乙醇提取物對大鼠和小鼠離體子宮平滑肌興奮強(qiáng)度、頻率與活力的影響按文獻(xiàn)方法［5］測定馬

16、蘭95%乙醇和50%乙醇組分對大鼠和小鼠子宮收縮強(qiáng)度和頻率，并計(jì)算子宮活力（子宮活力＝平均強(qiáng)度×頻率，單位g×次數(shù)/10 min），結(jié)果見表2～3。表明馬蘭95%乙醇和50％乙醇提取物對大鼠和小鼠離體子宮平滑肌收縮強(qiáng)度均明顯增強(qiáng)，子宮活力明顯增加（P&lt; 0.05或P&lt;0.01），收縮頻率大鼠與小鼠明顯增加。表2 馬蘭乙醇提取物對大鼠離體子宮收縮強(qiáng)度、頻率與活度的影響，表3 馬蘭乙醇提取

17、物對小鼠離體子宮收縮強(qiáng)度、頻率與活度的影響(略)</p><p>　　3.3 對家兔體外凝血的影響體外凝血試驗(yàn)，按文獻(xiàn)計(jì)算凝血時間(凝血酶原時間)縮短率，即凝血時間(凝血酶原時間)縮短率=對照組血凝時間給藥組血凝時/對照組血凝時間×100％。以藥物凝血時間比空白對照組縮短30％以上者認(rèn)為有效［6］。結(jié)果見表4，表明馬蘭50%乙醇提取物能明顯縮短凝血時間(P＜0.01)，而對凝血酶原時間無縮短作用。表

18、4 馬蘭50%乙醇提取物對家兔體外凝血的影響(略)</p><p><b>　　4 討論</b></p><p>　　馬蘭既是藥物也是一種食品，南方有的地方用馬蘭作野菜食用的習(xí)慣。營養(yǎng)學(xué)研究表明，馬蘭含20種氨基酸，多種微量元素如鋅、錳、鎂、硒等。天然藥化研究表明馬蘭含木栓酮、木栓醇、達(dá)瑪二烯醇乙酸酯、月桂酸、β-谷甾醇、脫鎂葉綠甲酯酸等［1］。民間用于治療鼻炎、

19、鼻出血、牙齦出血、皮下出血、黃疸、肝炎、痢疾、小便澀痛、痔瘡、宮頸炎、前列腺炎等多種疾病。我們的研究表明馬蘭的乙醇提取物對動物子宮有明顯的興奮作用，增加子宮收縮強(qiáng)度和頻率，提高子宮收縮活力。凝血試驗(yàn)研究表明，馬蘭可明顯縮短凝血時間，可能是治療功能性子宮出血、崩漏等出血性疾病的藥理學(xué)基礎(chǔ)。對馬蘭興奮子宮平滑肌和促凝血的有效成分和作用機(jī)制值得深入研究。</p><p><b>　　【參考文獻(xiàn)】</b&

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