費(fèi)菜提取液抑菌效果和抗氧化研究【開題報告+文獻(xiàn)綜述+畢業(yè)設(shè)計】

1、<p><b>　　本科畢業(yè)論文系列</b></p><p><b>　　開題報告</b></p><p><b>　　食品質(zhì)量與安全</b></p><p>　　費(fèi)菜提取液抑菌效果和抗氧化研究</p><p>　　一、選題的背景與意義</p><

2、p>　　費(fèi)菜俗稱“土人參” ，又名土三七、救心菜，屬景天科多年生草本植物。費(fèi)菜主要分布于我國長江以南各地，不論在平原、丘陵地帶還是高原山區(qū)費(fèi)菜均能生長。它含有齊墩果酸、谷甾醇、生物堿、景天庚糖、黃酮類、有機(jī)酸、維生素E等多種成份，費(fèi)菜中的這些成份使得它具有抑菌、抗氧化、增強(qiáng)免疫、擴(kuò)張腦血管、改善冠狀動脈循環(huán)等途徑，達(dá)到降血壓、防中風(fēng)、防心臟病降血脂、抗腫瘤等功效，有很高的食用價值和醫(yī)療保健功能。 </p><p

3、>　　隨著人們對生活水平的不斷提高，對身體保健也越來越重視，近年來世界上掀起了植物藥及保健品的開發(fā)熱潮。通過對費(fèi)菜提取液抑菌和抗氧化效果的研究，可以提高費(fèi)菜的使用價值，有助于生產(chǎn)出具有治療和預(yù)防多種疾病的藥品和天然保健品，為費(fèi)菜的綜合利用開辟新途徑，創(chuàng)造更大的社會效益和經(jīng)濟(jì)效益。</p><p>　　二、研究的基本內(nèi)容與擬解決的主要問題：</p><p><b>　　基本內(nèi)

4、容</b></p><p>　　1.研究費(fèi)菜提取液對大腸桿菌的抑制效果</p><p>　　研究金黃色葡萄球菌的抑制效果</p><p>　　研究枯草芽孢桿菌的抑制效果</p><p>　　4.測提取液中總黃酮的濃度</p><p>　　5.研究費(fèi)菜提取液還原力的測定</p><p>

5、;　　6.研究費(fèi)菜提取液對羥自由基的清除能力</p><p>　　7.研究對DPPH·自由基的清除率 </p><p>　　三、研究的方法與技術(shù)路線：</p><p><b>　　費(fèi)菜提取液制取</b></p><p>　　取新鮮費(fèi)菜葉在70℃烘干24h，然后用藥物粉碎機(jī)粉粉碎并過80目篩，得到的葉粉備用，在提

6、取之前將葉粉在105℃烘干2h左右。 稱取5g干粉，置于150ml錐形瓶中，按照料液比1:50加入濃度為70%的乙醇，超聲提取50min，60℃水浴浸提6h，趁熱抽濾，得到濾液。將粗提液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在45-50℃下濃縮至適量后，加入3-4倍體積的95％乙醇以沉淀多糖6h以上，再將粗提液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在45-50℃下濃縮至適量，備用。</p><p>　　2.抑菌圈法測定抑菌效果</p><p&g

7、t;　　提前3天把大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌進(jìn)行活化，接種斜面上備用。制備營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基, 營養(yǎng)肉湯用于細(xì)菌的液體培養(yǎng)。把所要用的培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、移液槍頭、無菌水等滅菌備用。</p><p>　　首先做每個菌不同梯度濃度的菌懸液。然后選擇一種濃度的菌液用涂布的方法在培養(yǎng)皿中做好平板。用在酒精燈上燒過的6mm的打孔器在每個平板上打3個孔，正三角形均勻分散放置在平皿中央，每兩個孔之間距離30mm以上，每個

8、菌種做三組平行。并用滅菌的鑷子夾掉打孔后的瓊脂，分別取50μL的費(fèi)菜提取液、硫酸慶大霉素和水注入3個孔內(nèi)。硫酸慶大霉素做陽性對照，水做陰性對照。最后測每種菌菌落總數(shù)，基本保證做抑菌圈時各種菌的濃度一樣（106-108個/ml）。暗室培養(yǎng)(細(xì)菌：37℃/24h)。測定抑菌圈直徑，取平均值。</p><p>　　3.費(fèi)菜提取液最低抑菌濃度(MIC)和最低殺菌濃度（MBC）的測定</p><p>

9、;　　采用二倍稀釋法，以水為溶劑，配制一系列梯度濃度的費(fèi)菜提取液溶液，將不同梯度濃度的費(fèi)菜提取液溶液1ml加入到1ml已滅菌的液體培養(yǎng)基中，混合均勻，使培養(yǎng)基中費(fèi)菜提取液的濃度分別為原提取液的1：2，1：4，1：8，1：16，1：32，1：64，再在每管中加入0.1ml的菌液。暗室培養(yǎng)(細(xì)菌：37℃/24h)，每一與對照組（不加菌）比較，是否變渾濁，以不變渾濁管費(fèi)菜提取液濃度為其最低抑菌濃度(MIC，minimum inhibitory

10、 concentration)。分別吸取1ml以上管中的液體到40度左右的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，測是否長菌。不長菌的最小費(fèi)菜提取液濃度就是MBC。</p><p>　　測費(fèi)菜提取液中總黃酮的濃度</p><p>　　用蘆丁做標(biāo)準(zhǔn)曲線，精密量取蘆丁取液0．10mL、0．20mL、0．30mL、0．40mL、0．50mL、0．60mL，費(fèi)菜提取液0.5ml、1.0ml、1.5ml、2ml、2.5ml

11、分置25mL量瓶中，各加水至6mL；分別加5 %NaNO2溶液1mL，搖勻，放置6min；分別加10 %Al(N03)3溶液1mL，搖勻，放置6min；然后分別加4 %NaOH溶液1OmL，并分別加水至刻度，搖勻，靜置15min，在510nm測定吸收度，以蘆丁濃度(C)(mg／mL)對吸光度(A)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，費(fèi)菜提取液吸光度根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線算出濃度。</p><p><b>　　5.還原力測定</b&

12、gt;</p><p>　　取2．5 mL不同濃度的費(fèi)菜提取液于試管中，依次加人2．5 mL0．2 mol／L PBS (pH6．6)、5 mL 1％ K3Fe(CN)6溶液，于5O℃保溫20 min后快速冷卻，再加入2．5 mL10％三氯乙酸溶液，3000 r／min離心10 min，取上清液2．5 mL，依次加入2．5 mL蒸餾水、0．5 mL 0．1％FeC1，溶液，充分混勻，靜置10 min，測定吸光值（

13、以蒸餾水為參比溶液)，吸光度值越高還原力越強(qiáng)，作成曲線。</p><p>　　6.羥自由基清除率測定</p><p>　　按照Smirnof(1989)的方法，利用H2O2與FeSO4混合產(chǎn)生(·OH)，在體系內(nèi)加入水楊酸捕捉(·OH)并產(chǎn)生有色物質(zhì)，該物質(zhì)在510 nm處有最大吸收。于10 mL容量瓶中依次加入2 mmol／LFeSO4 2 mL，6 mmol／L H

14、2O2 2 mL，6 mmol／L水楊酸一乙醇6 mL，于37℃水浴中保溫15 min后取出，以蒸餾水為參比，510 nm下測其吸光度(A。)，然后再加入0.4 mL被測定樣品，搖勻，37℃水浴中保溫15 min后取出，以蒸餾水為參比，510 nm下測其吸光度(Ax)?？紤]到色素本身的吸光度值，做了對照試驗(yàn)：于25 mL容量瓶中依次加入2mmol／LFeSO42mL，蒸餾水5mL，6 mmol／L水楊酸一乙醇6 mL，于37℃水浴中保溫

15、15 min，然后加入0.4mL被測定樣品，搖勻，于37℃水浴中保溫15 min后取出，以蒸餾水為參比，510 nm下測其吸光度 </p><p>　　清除率計算公式為： 清除率(％)=[A0-(Ax-Ax0)]/A0</p><p>　　式中：Ao：為空白對照液的吸光度；Ax：為加入色素溶液后的吸光度；</p><p>　　Axo：為不加顯色劑H202：色素溶液本

16、底的吸光度。</p><p>　　對DPPH·自由基清除率的測定 </p><p>　　取不同濃度費(fèi)菜提取液2 ml及濃度為2×104mol/L的DPPH溶液2ml先后加入同一具塞試管中，避光30 min后以樣品提取溶劑為空白調(diào)零測定其吸光度Ai；測定2 ml濃度為2×104mol/L 的DPPH溶液與2 ml無水乙醇混合液的吸光度Ae；再測定2 ml黃酮提取

17、液與2m1無水乙醇混合液的吸光度Aj，重復(fù)5次，求其平均值。根據(jù)下列公式計算沙棗黃酮提取液對DPPH的抑制率，即：抑制率(％)= [1-(Ai-Aj)/Ae]×100％,做標(biāo)準(zhǔn)曲線。 </p><p>　　四、研究的總體安排與進(jìn)度：</p><p>　　2010．10—2010．11 查閱文獻(xiàn)，設(shè)計初步實(shí)驗(yàn)方案；</p><p>　　2010．11—2

18、008．12 實(shí)驗(yàn)設(shè)計，開題報告；</p><p>　　2011．02—2011．04 實(shí)驗(yàn)操作；</p><p>　　2011．04—2011．05 數(shù)據(jù)處理，撰寫論文。</p><p><b>　　五、主要參考文獻(xiàn)：</b></p><p>　　[1] 袁婷,鐘學(xué)穩(wěn).常見中草藥的體外抑菌試驗(yàn)[J].試驗(yàn)研究,2009

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20、;/p><p>　　[5] 吳萬傳,杜小鳳,王偉中等.植物源抑菌活性成分研究進(jìn)展[J].淮陰工學(xué)院學(xué)報,2004,13(3):28-35.</p><p>　　[6] 曲中堂,項昭保,趙志強(qiáng)等.橄欖總黃酮抑茵作用研究[J].中國釀造,2010,4:62-63.</p><p>　　[7] 劉衛(wèi)今,葛婷,劉勝貴等.羊耳菊黃酮類化合物的提取與抑菌作用[J].湖北農(nóng)業(yè)科學(xué),2

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27、業(yè)大學(xué)學(xué)報,2002,29(3):245～249.</p><p>　　[21] 張燕寧,雷敏,孫偉等.56種植物對植物病原菌的生物活性[J].農(nóng)藥,2010,49(4):290-292.</p><p>　　[22] 任順成,范永超,李翠翠等.30種中草藥提取物對食品細(xì)菌的影響[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2010,38(14):7529-7556.</p><p>　　

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29、黃酮的熱加工與保健飲料生產(chǎn)技術(shù)[J].農(nóng)村實(shí)用技術(shù)與信息,2005,1(5):29.</p><p>　　[27] 張英,沈建福,俞卓裕等.竹葉黃酮作為抗衰老護(hù)膚因子的應(yīng)用基礎(chǔ)研究[J].林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè),2004,24(1):95-100.</p><p>　　[28] 李崇高,黃建初,黃泳梅等.魔芋多糖仿生食品工藝的研究[J].西南大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),2008,30(1):119-1

30、25.</p><p>　　[29] 岳宗翠,周廣田.巖藻多糖啤酒生產(chǎn)工藝的研究[J].中國釀造,2010,1:148-150.</p><p>　　[30] 張麗莉,信維平.枸杞多糖風(fēng)味醬油的工藝研究[J].中國調(diào)味品,2009,1(34):75-77.</p><p><b>　　畢業(yè)論文文獻(xiàn)綜述</b></p><p&

31、gt;<b>　　食品質(zhì)量與安全</b></p><p>　　一些植物提取液抑菌效果和抗氧化研究進(jìn)展</p><p>　　摘要：在人民生活水平提高的同時，崇尚自然、健康已越來越被大眾所接受。從以上種種可以得出開發(fā)天然高效、安全無毒、性能穩(wěn)定、廣譜的天然抑菌劑和抗氧化劑已成為研究和應(yīng)用的一個熱點(diǎn)。通過對植物提取液成份及其功能的研究，可以提高植物有效成分應(yīng)用的新價值，有助

32、于生產(chǎn)出具有治療和預(yù)防多種疾病的藥品、天然保健品和功能性食品，為植物的綜合利用開辟新途徑，創(chuàng)造更大的社會效益和經(jīng)濟(jì)效益。</p><p>　　關(guān)鍵詞：提取液 抑菌 抗氧化</p><p><b>　　1. 前言</b></p><p>　　抗生素[1]的開發(fā)及應(yīng)用表現(xiàn)的是臨床治療細(xì)菌感染性疾病的劃時代標(biāo)志，其抗菌作用不容置疑，但其過敏反應(yīng)、二重

33、感染及細(xì)菌的耐藥性等毒副作用使其應(yīng)用受到一定的限制；食品安全保藏歷來都是食品工業(yè)面臨的難題之一,為了防止食品的腐敗變質(zhì)，延長食品的儲存期，一般多采用冷藏、殺菌、密封包裝、添加防腐劑等手段，但一些合成的防腐劑往往對身體有害；植物病害是農(nóng)業(yè)生產(chǎn)的大敵，但由于化學(xué)農(nóng)藥潛在的對人類健康的危害、對環(huán)境的污染、對非靶標(biāo)生物的影響、植物病原菌抗性的發(fā)</p><p>　　展及人類健康、環(huán)保意識的增強(qiáng)，使得化學(xué)農(nóng)藥的發(fā)展受到了來

34、自各方面的限制。</p><p>　　根據(jù)英國Harman的自由基學(xué)說[2-3]，活性氧自由基(Reactive Oxygen Species，ROS)攻擊生命大分子，導(dǎo)致蛋白質(zhì)損傷、酶失活、膜脂過氧化、碳水化合物和核酸損傷是引起機(jī)體衰老的根本原因，也是誘發(fā)腫瘤等惡性疾病的重要原因。常見的癌癥、動脈硬化、糖尿病、白內(nèi)障、心血管病、老年癡呆、關(guān)節(jié)炎等，這些疾病都被認(rèn)為與自由基相關(guān)。</p><p

35、>　　在人民生活水平提高的同時，崇尚自然、健康已越來越被大眾所接受。從以上種種可以得出開發(fā)天然高效、安全無毒、性能穩(wěn)定、廣譜的天然抑菌劑和抗氧化劑已成為研究和應(yīng)用的一個熱點(diǎn)。</p><p>　　2. 植物提取液抑菌效果</p><p>　　2.1 植物提取液的抑菌作用</p><p>　　目前，植物提取液的抑菌作用機(jī)制仍沒有徹底明了。由于提取液所用的種類繁多

36、，其活性成分也很多，因此，提取液抑菌機(jī)制可能有多種機(jī)制。這些作用機(jī)制包括[4]，1)破壞/降解細(xì)胞壁。2)破壞細(xì)胞質(zhì)膜。3)破壞細(xì)胞膜蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)。4)使細(xì)胞內(nèi)容物泄露。5)使細(xì)胞質(zhì)凝聚。6)減弱質(zhì)子運(yùn)動力。需要說明的是，所提出的幾種作用機(jī)制并非都是獨(dú)立的，可能會相互影響，一種機(jī)制的反應(yīng)可能會受另一種反應(yīng)物或生成物的影響。</p><p>　　2.2 植物提取液抑菌活性成分</p><p>

37、　　近年來，國內(nèi)外對植物提取液抑菌劑的研究倍受重視，并取得了較大的進(jìn)展，發(fā)現(xiàn)了很多具有開發(fā)潛力的抑菌、殺菌或抗菌的化學(xué)成分，其結(jié)構(gòu)類型涉及萜類、生物堿類、黃酮類、苷類、皂甙、醌類、香豆素、木脂素、芪類、酯類、酚類、醛類、醇類、甾類、有機(jī)酸及精油類等化合物[5]。其中國內(nèi)外關(guān)于黃酮類的抑菌研究很多，黃酮的抑菌效果也很明顯[6-8]。另外一些蒽甙和植物中的木質(zhì)素、植保素及一些蛋白質(zhì)(如抗真菌蛋白AFP)亦有抑菌抗病活性。</p>

38、<p>　　2.3 近年一些植物提取液的抑菌作用的研究</p><p>　　徐金瑞[9]等分別用水提和醇提法對番石榴葉的提取液進(jìn)行抑菌實(shí)驗(yàn)，結(jié)果得出番石榴葉水提物、乙醇提取物對金黃色葡萄球菌、沙門氏菌、大腸桿菌、枯草芽孢桿菌均有一定的抑菌活性。總體上，水提取物抑菌活性優(yōu)于乙醇提取物，水提取物的抑菌效果是金黃色葡萄球菌>沙門氏菌>大腸桿菌>枯草芽孢桿菌。</p><

39、;p>　　李翠芳[10]等，以甜瓜葉斑病、大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、棉花枯萎病菌和棉花黃萎病菌5種菌為供試菌，對新疆紫草毛狀根紫草素粗提物及多糖進(jìn)行抑菌活性研究。結(jié)果表明：乙醇提取物對3種細(xì)菌均具有抑制作用；丙酮提取物儀對甜瓜葉斑病菌有抑制作用，其抑制作用較乙醇提取物高26.5%。乙酸乙酯和石油醚提取物對3種細(xì)菌均兀抑制作用；4種溶劑提取物對2種真菌均有抑制作用，且對棉花黃萎病菌的抑制率均高于枯萎病菌。</p>&l

40、t;p>　　嚴(yán)漢彬[11]等用肉桂醇提液對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、黑曲霉、釀酒酵母進(jìn)行試驗(yàn)，結(jié)果表明肉桂醇提液對對細(xì)菌、霉菌和酵母均有很強(qiáng)的抑制作用。</p><p>　　3. 植物提取液抗氧化研究[12]</p><p>　　3.1 植物提取液清除自由基作用</p><p>　　自由基系含有未成對電子的原子、原子團(tuán)或分子，生物內(nèi)自由基的形成與需氧細(xì)胞的正常

41、代謝有關(guān)。細(xì)胞的生長會消耗大量氧，結(jié)果導(dǎo)致大量氧自由基的產(chǎn)生，這種現(xiàn)象即“氧化壓力”。細(xì)胞氧化過程中產(chǎn)生的自由基有單線態(tài)氧（1O2）、超過氧化物陰離子（O2-﹒）、羥自由基（OH﹒）以及過氧自由基（R-OO﹒)等[13]。清除自由基的原理有以下幾點(diǎn)[14]：（1）作用于自由基有關(guān)的酶。（2）阻斷自由基鏈的傳遞過程。（3）與誘導(dǎo)氧化的過渡金屬離子絡(luò)合。</p><p>　　3.2 植物提取液抗氧化活性成分</

42、p><p>　　水果、蔬菜，藥用植物中均含有許多抗氧化成分。植物提取物的抗氧化活性成分主要有黃酮類化合物、多酚類化合物、維生素C、E及其衍生物、皂苷類、生物堿類、多糖類等。一些番茄紅素、葉黃素等也有較強(qiáng)的抗氧化能力[15]。另外，天然抗氧化劑多種多樣，有些植物提取物可能含有兩種或多種的抗氧化成分，并非單一因素在起作用[16]。</p><p>　　3.3 近年一些植物提取液的抗菌作用的研究&l

43、t;/p><p>　　樊金玲等[17]采用卵磷脂脂質(zhì)體體系比較了沙棘籽不同溶劑提取物的抗氧化活性，</p><p>　　對其中的抗氧化活性成分進(jìn)行了分析。試驗(yàn)結(jié)果表明：70%丙酮提取物具有最強(qiáng)的抗氧化活性、清除DPPH自由基能力和還原力。</p><p>　　李海云等[18]以水、甲醇、乙醇和乙酸乙酯為溶劑，對羅漢果干果進(jìn)行提取，分別采用磷鉬酸銨體系、鄰苯三酚自氧化體系

44、、Fenton反應(yīng)體系和卵黃脂質(zhì)過氧化體系測定各種提取物的總抗氧化性能、超氧陰離子自由基和羥基自由基清除性能及其抗脂質(zhì)過氧化作用。結(jié)果表明，四種溶劑提取物均具較強(qiáng)的抗氧化性和活性氧自由基清除性能，其能力的大小順序?yàn)椋阂宜嵋阴ヌ崛∥?gt;水提物>甲醇提取物>乙醇提取物。</p><p>　　張改平[19]等制制取了甘草粗提物和用60%乙醇回流提取的甘草提取液，發(fā)現(xiàn)兩者能有效清除·02-、DP

45、PH·和OH·，具有良好的總抗氧化能力和還原能力，而且后者比前者好。</p><p>　　4. 植物提取液的研究展望</p><p>　　抑菌劑在醫(yī)療、食品和農(nóng)業(yè)等方面有著廣泛的應(yīng)用。由于抗生素、防腐劑、農(nóng)藥等不斷有負(fù)面效果的出現(xiàn)，研究新型的抑菌劑已非常必要。通過歷年大規(guī)模藥用植物調(diào)查，已發(fā)現(xiàn)我國藥用植物有8000種左右，而作過抑菌活性研究的植物僅僅涉及菊科、唇形科等十

46、多個科植物[20]。但是張燕寧[21]等研究了56種植物對植物病原菌的生物活性，任順成[22]等研究了30種中草藥提取物對食品細(xì)菌的影響，表明了我們具有豐富的抑菌植物資源有待研究與開發(fā)。</p><p>　　抗氧化劑在食品和醫(yī)療等領(lǐng)域有廣泛的應(yīng)用，由于天然抗氧化劑具有來源廣泛、提取率高、抗氧化活性強(qiáng)、與機(jī)體親和力強(qiáng)和安全性高等優(yōu)點(diǎn)具有取代合成抗氧化劑趨勢，是今后的研究重點(diǎn)。</p><p>

47、;　　5. 植物提取液的新應(yīng)用</p><p>　　植物提取液中有很多有效的生物活性成分。比如生物堿具有抗腫瘤活性，保護(hù)心血管系統(tǒng)，對神經(jīng)系統(tǒng)具有鎮(zhèn)痛和止痛作用，還具有抑菌效果[23]；黃酮類可擴(kuò)張心腦血管，促進(jìn)血液循環(huán)；齊墩果酸還可保護(hù)肝臟，起到延緩老年性肝組織纖維化的作用，經(jīng)常服用能有益健康、延年益壽[24]；多糖在免疫調(diào)節(jié)、抗腫瘤、抗病毒、抗氧化和降血糖等方面有顯著效果等[25]。目前對這方面已有一些研究，

48、從不同植物中提取黃酮和多糖等成分開發(fā)不同的產(chǎn)品。例如銀杏葉黃酮飲料[26]、竹葉黃酮美容護(hù)膚品[27]；大豆異黃酮膠囊；魔芋多糖仿生食品[28]；巖藻多糖啤酒[29]；枸杞多糖風(fēng)味醬油[30]等。</p><p>　　今天，天然產(chǎn)物研究與開發(fā)利用已成為世界潮流的，通過對植物提取液成份及其功能的研究，可以提高植物有效成分應(yīng)用的新價值，有助于生產(chǎn)出具有治療和預(yù)防多種疾病的藥品、天然保健品和功能性食品，為植物的綜合利用

49、開辟新途徑，創(chuàng)造更大的社會效益和經(jīng)濟(jì)效益。把他們應(yīng)用于醫(yī)療、農(nóng)業(yè)、食品等領(lǐng)域，應(yīng)用前景較為廣闊。</p><p><b>　　參考文獻(xiàn)</b></p><p>　　[1] 袁婷,鐘學(xué)穩(wěn).常見中草藥的體外抑菌試驗(yàn)[J].試驗(yàn)研究,2009,9:23-24.</p><p>　　[2] 鄭瑞生,封輝.植物中抗氧化活性成分研究進(jìn)展[J].中國震學(xué)通提

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56、菜屬植物根莖黃酮和多糖的提取及抗氧化活性研究[J]．食品工業(yè)科技,2009,30(3):98-101.</p><p>　　[17] 樊金玲,丁霄霖.沙棘籽提取物抗氧化活性與酚類組成的研究[J].天然產(chǎn)物研究與開發(fā),2OO6,18：529-534.</p><p>　　[18] 李海云,王秀麗,潘英明等.羅漢果不同溶劑提取物抗氧化及清除活性氧自由基作用[J].廣西植物,200828(5):

57、698-702.</p><p>　　[19] 張改平,朱華澤,楊建雄等.甘草提取物的體外抗氧化活性[J].生物加工過程,2010,8(3):53-57.</p><p>　　[20] 吳新安,花日茂,岳永德等.植物源抗菌、殺菌活性物質(zhì)研究進(jìn)展[J].安徽農(nóng)業(yè)大學(xué)學(xué)報,2002,29(3):245～249.</p><p>　　[21] 張燕寧,雷敏,孫偉等.56種

58、植物對植物病原菌的生物活性[J].農(nóng)藥,2010,49(4):290-292.</p><p>　　[22] 任順成,范永超,李翠翠等.30種中草藥提取物對食品細(xì)菌的影響[J].安徽農(nóng)業(yè)科學(xué),2010,38(14):7529-7556.</p><p>　　[23] 王鋒鵬.生物堿化學(xué)[M].北京:化工出版社,2008:1-519.</p><p>　　[24] 唐

59、浩國.黃酮類化學(xué)物研究[M].北京:科學(xué)出版社,2009:273-382.</p><p>　　[25] 謝明勇,聶少平.天然產(chǎn)物活性多糖結(jié)構(gòu)與功能研究進(jìn)展[J].中國食品學(xué)報,2010,10(2):1-11.</p><p>　　[26] 謝筆鈞.銀杏葉提取物黃酮的熱加工與保健飲料生產(chǎn)技術(shù)[J].農(nóng)村實(shí)用技術(shù)與信息,2005,1(5):29.</p><p>　　

60、[27] 張英,沈建福,俞卓裕等.竹葉黃酮作為抗衰老護(hù)膚因子的應(yīng)用基礎(chǔ)研究[J].林產(chǎn)化學(xué)與工業(yè),2004,24(1):95-100.</p><p>　　[28] 李崇高,黃建初,黃泳梅等.魔芋多糖仿生食品工藝的研究[J].西南大學(xué)學(xué)報(自然科學(xué)版),2008,30(1):119-125.</p><p>　　[29] 岳宗翠,周廣田.巖藻多糖啤酒生產(chǎn)工藝的研究[J].中國釀造,2010

61、,1:148-150.</p><p>　　[30] 張麗莉,信維平.枸杞多糖風(fēng)味醬油的工藝研究[J].中國調(diào)味品,2009,1(34):75-77.</p><p><b>　　本科畢業(yè)設(shè)計</b></p><p><b>　?。?0_ _屆）</b></p><p>　　費(fèi)菜提取液抑菌效果和抗氧

62、化研究</p><p><b>　　目錄</b></p><p>　　1引言錯誤!未定義書簽。</p><p><b>　　2材料與方法14</b></p><p>　　2.1 材料與試劑14</p><p>　　2.1.1 原料15</p><p

63、>　　2.1.2 試驗(yàn)菌種15</p><p>　　2.1.3 試劑2</p><p>　　2.1.4 主要儀器2</p><p>　　2.2 實(shí)驗(yàn)方法16</p><p>　　2.2.1實(shí)驗(yàn)路線16</p><p>　　2.2.2 測定方法3</p><p>　　2.2.2.

64、1 費(fèi)菜提取液中黃酮濃度測定3</p><p>　　2.2.2.2 菌種的預(yù)處理錯誤!未定義書簽。</p><p>　　2.2.2.3 費(fèi)菜提取液抑菌圈測定4</p><p>　　2.2.2.4 費(fèi)菜提取液最低抑菌濃度（MIC）測定5</p><p>　　2.2.2.5 費(fèi)菜提取液最低殺菌濃度（MB）測定5</p>&

65、lt;p>　　2.2.2.6 費(fèi)菜提取液還原力測定5</p><p>　　2.2.2.7 費(fèi)菜提取液羥自由基清除率測定5</p><p>　　2.2.2.8 費(fèi)菜提取液DPPH·清除能力測定6</p><p><b>　　3結(jié)果與分析6</b></p><p>　　3.1 費(fèi)菜提取液總黃酮含量6

66、</p><p>　　3.2 費(fèi)菜提取液的抑菌效果7</p><p>　　3.3不同濃度的費(fèi)菜提取液對細(xì)菌的抑制效果9</p><p>　　3.4 不同濃度的費(fèi)菜提取液的滅菌效果9</p><p>　　3.5 費(fèi)菜提取液的還原能力10</p><p>　　3.6 費(fèi)菜提取液清除羥基自由基的能力10</p

67、><p>　　3.7 費(fèi)菜提取液清除DPPH·的能力11</p><p><b>　　4小結(jié)12</b></p><p>　　4.1 費(fèi)菜提取液的抑菌效果12</p><p>　　4.2 費(fèi)菜提取液的抗氧化效果12</p><p><b>　　致謝13</b>

68、</p><p>　　參考文獻(xiàn)錯誤!未定義書簽。</p><p><b>　　附錄15</b></p><p>　　【摘要】 費(fèi)菜，俗稱養(yǎng)心草、救心菜、三七等，屬景天科多年生草本植物。費(fèi)菜是一種集食用、藥用和觀賞為一體的經(jīng)濟(jì)農(nóng)作物。本文通過測定抑菌圈、MIC、MBC等方法對費(fèi)菜提取液進(jìn)行抑菌效果研究，結(jié)果發(fā)現(xiàn)其對大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯

69、草芽孢桿菌有明顯的抑菌效果，而且抑菌效果隨著費(fèi)菜提取液濃度的增加而加強(qiáng)；用還原力、羥自由基清除率和DPPH自由基清除率測定抗氧化能力表明具有較強(qiáng)的抗氧化能力。通過此研究可以提高費(fèi)菜有效成分的應(yīng)用新價值，有助于生產(chǎn)天然保健品和出具有治療和預(yù)防多種疾病的藥品，為費(fèi)菜的綜合利用開辟新途徑，創(chuàng)造更大的社會效益和經(jīng)濟(jì)效益。</p><p>　　【關(guān)鍵詞】 費(fèi)菜; 抑菌; 抗氧化</p><p>　　

70、【Abstract】 Aizoon stonecrop herb, commonly known as yangxin grass, save heart grass, notoginseng etc.It is belong to Stonecrop Herb perennial herbaceous plants.Aizoon Stonecrop Herb is an economic crops aggregate edible

71、、medicinal and ornamental functions, This article uses determination bacteriostatic circle, MIC, MBC methods to research the bacteriostatic effect of Aizoon Stonecrop Herb extract. Founding that its has obvious bacterios

72、tatic effect to escherichia coli, staphylococcus aureus and </p><p>　　【Keyword】 Aizoon stonecrop herb; bacteriostat; antioxidati</p><p><b>　　1.引言</b></p><p>　　費(fèi)菜，俗稱養(yǎng)心草

73、、救心菜、三七、土三七等，屬景天科多年生草本植物。株高25—50厘米，叢生，分蘗力強(qiáng)。肉質(zhì)根較肥大，葉匙形，對生，翠綠，肥厚多汁，葉緣鋸齒狀；花黃色，星蕓狀集生頂部，成片狀分布，花期6—9月；果熟期8—10月，種子細(xì)小。</p><p>　　費(fèi)菜始載于《救荒本草》，具體很好的營養(yǎng)價值，據(jù)研究測定[1]，每l00g鮮食部位含蛋白質(zhì)2lg、碳水化臺物8g、脂肪0.7g．粗纖維1.5g、胡蘿卜素2.8mg、維生素B．0

74、.05mg、維生素B 0.3lmg，維生素C 95mg、煙酸0.9mg，鈣315mg，磷39mg、鐵32mg。除了營養(yǎng)方面的價值，費(fèi)菜還有不菲的藥用價值，它含有生物堿、谷甾醇、黃酮類、齊敦果酸、景天庚糖，果糖等藥物成分。費(fèi)菜中的生物堿具有抗腫瘤活性，保護(hù)心血管系統(tǒng)，對神經(jīng)系統(tǒng)具有鎮(zhèn)痛和止痛作用，還具有抑菌效果[2]；谷甾醇能阻止人體對膽固醇的吸收，降血脂，防止血管硬化；黃酮類可擴(kuò)張心腦血管，促進(jìn)血液循環(huán)；齊墩果酸還可保護(hù)肝臟，起到延緩老

75、年性肝組織纖維化的作用，經(jīng)常服用能有益健康、延年益壽[3]。</p><p>　　費(fèi)菜幾乎無病蟲危害，栽培過程不施農(nóng)藥，無污染，無農(nóng)藥殘留，是一種綠色食品，受到廣大人們的喜愛。費(fèi)菜主要食用嫩莖葉，無異味。采下洗凈可直接素炒，配肉、蛋、食用菌炒，火鍋、燉食、清蒸、澆湯，久煮不爛[4]。 費(fèi)菜藥用功能主要有消腫、定痛、止血、化瘀、治吐血、衄血、便血、尿血、崩漏、乳癰、跌打損傷等，也是治療心臟病的良藥。</p&g

76、t;<p>　　費(fèi)菜具有群體整齊，顏色鮮綠，覆蓋率高，花色鮮艷，花期較長的特點(diǎn)。費(fèi)菜在栽培過程中不生蟲、無病害，這是它的一大優(yōu)點(diǎn)，能在貧瘠的土壤里長勢強(qiáng)壯，所以無需噴灑農(nóng)藥，避免了化肥污染；加之其易種、易管、產(chǎn)量高，一般栽培條件下，每667m2產(chǎn)量可達(dá)5000kg以上，所以是園林花壇、草坪綠化難得的好品種，又是農(nóng)業(yè)產(chǎn)業(yè)結(jié)構(gòu)調(diào)整和發(fā)展無公害綠色蔬菜的理想品種之一。家庭栽培幾盆費(fèi)菜，既有藥用價值，又能美化環(huán)境，凈化空氣，陶冶情

77、操，增添樂趣[5]。</p><p>　　費(fèi)菜經(jīng)萎凋脫水15％ ～20％ ，搖青3～5分鐘，渥堆6小時，220～240oC殺青5～6分鐘、揉捻、烘干可制得色香味俱佳的方便飲品養(yǎng)心茶[6]，泡出的茶水色、香、味俱佳，飲用后可高效抑制失眠、心悸、煩悶等癥，加糖飲用1：3味更佳；除降血壓外，還可解除酒醉頭痛。除主治心腦血管疾病外，而且對吐血、咯血、煩躁失眠、驚悸癔癥、跌打損傷有療效。</p><p&

78、gt;　　目前已有很多研究，從不同植物中提取黃酮和生物堿開發(fā)不同的產(chǎn)品[7-8]。比如竹葉黃酮飲料、啤酒、保健膠囊、抗氧化劑、美容護(hù)膚品；銀杏黃酮飲料、啤酒、保健膠囊、美容護(hù)膚品；大豆異黃酮膠囊；生物堿的鎮(zhèn)咳止痛抗腫瘤等。費(fèi)菜含有大量的黃酮類和生物堿，目前對費(fèi)菜的研究基本還停留在其藥用價值、培養(yǎng)和繁殖階段，沒有對費(fèi)菜進(jìn)一步的開發(fā)，今后費(fèi)菜的研究方向可以轉(zhuǎn)向費(fèi)菜的生物活性成份。</p><p><b>　

79、　2材料與方法</b></p><p><b>　　2.1 材料與儀器</b></p><p><b>　　2.1.1材料</b></p><p>　　原料：費(fèi)菜，產(chǎn)于寧波慈溪。</p><p>　　試驗(yàn)菌種：大腸桿菌(Escherichia coli)；金黃色葡萄球菌(Staphylo

80、coccus aureus)；枯草芽孢桿菌（Bacillus subtilis）</p><p><b>　　2.1.2 試劑</b></p><p><b>　　無水乙醇：</b></p><p>　　蘆丁(蕓香葉苷）：BR，含量≥95%，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；</p><p>　　亞硝酸鈉:

81、 分析純，宜興市第二化學(xué)試劑開發(fā)中心；</p><p>　　硝酸鋁： 分析純，天津市永大化學(xué)試劑開發(fā)中心；</p><p>　　氫氧化鈉：分析純，杭州高晶精細(xì)化工有限公司；</p><p>　　三氯乙酸：分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；</p><p>　　鐵氰化鉀：分析純，北京化工廠；</p><p>　　三氯化

82、鐵：分析純，宜興市第二化學(xué)試劑廠；</p><p>　　磷酸二氫鈉：分析純，汕頭全砂化工廠；</p><p>　　磷酸氫二鈉：分析純，天津市巨星圣源化學(xué)試劑有限公司；</p><p>　　硫酸亞鐵：分析純，上海展云化工有限公司；</p><p>　　抗壞血酸（VC）：分析純，杭州化學(xué)試劑有限公司；</p><p>　　

83、水楊酸：分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；</p><p>　　冰醋酸：分析純，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；</p><p>　　無水醋酸鈉：分析純，上海試劑四廠；</p><p>　　雙氧水、鹽酸、無水乙醇（均為國產(chǎn)分析純）；蒸餾水。</p><p>　　細(xì)菌用營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基：BR，成分為蛋白胨10g，牛肉膏3g，氯化鈉5g，瓊脂20g，取3

84、8g加蒸餾水至1000mL，pH 7.2~7.4，國藥集團(tuán)化學(xué)試劑有限公司；</p><p>　　LB肉湯：BR，成份為蛋白胨10g，酵母粉5g，氯化鈉5g，葡萄糖1g，取21加蒸餾水至1000mL，中國進(jìn)出口商品檢驗(yàn)技術(shù)研究所。</p><p>　　2.1.3 主要儀器</p><p>　　電熱恒溫水浴鍋：DK-S22型，上海精宏實(shí)驗(yàn)設(shè)備有限公司；</p&

85、gt;<p>　　旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀：SENCO R-201型，上海申順生物科技有限公司；</p><p>　　循環(huán)水真空泵：SHZ-D(Ш)型，鞏義市英峪予華儀器廠；</p><p><b>　　濕熱滅菌鍋：</b></p><p>　　電熱鼓風(fēng)干燥箱：CS101-1AB型，中國重慶銀河實(shí)驗(yàn)儀器有限公司；</p><

86、p>　　酸度計：pHS-25型，上海理達(dá)儀器廠；</p><p>　　可見分光光度計：7200型，尤尼柯（上海）儀器有限公司；</p><p>　　高速臺式離心機(jī)：H1650型，長沙湘儀離心機(jī)儀器有限公司；</p><p>　　電子天平：BP221D型，Sartorius。</p><p>　　氣浴恒溫振蕩器：SHZ-82型，金壇市科析

87、儀器有限公司；</p><p><b>　　2.2 實(shí)驗(yàn)方法</b></p><p><b>　　2.2.1實(shí)驗(yàn)路線</b></p><p>　　實(shí)驗(yàn)主要分為三部分，原料準(zhǔn)備、抑菌能力和抗氧化能力測定。</p><p>　　原料準(zhǔn)備包括原料的預(yù)處理和費(fèi)菜提取液粗提取。原料預(yù)處理：取新鮮費(fèi)菜葉在70℃

88、烘干24h，然后用藥物粉碎機(jī)粉粉碎并過80目篩，得到的葉粉備用，在提取之前將葉粉在105℃烘干2h左右。費(fèi)菜提取液粗提取過程[9-10]：稱取5g干粉，置于500ml錐形瓶中，按照料液比1:50加入濃度為90%的乙醇，超聲提取50min，60℃水浴浸提6h，趁熱抽濾，得到濾液。將粗提液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在45-50℃下濃縮至適量后，加入2倍體積的95％乙醇以沉淀多糖，放入冰箱6h，過濾，再將提液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在45-50℃下濃縮至適量后待用。&

89、lt;/p><p>　　抑菌能力測定包括費(fèi)菜提取液中黃酮濃度、抑菌圈大小、MIC（最低抑菌濃度）和MBC（最低殺菌濃度）的測定。</p><p>　　抗氧化能力測定包括費(fèi)菜提取液還原力、費(fèi)菜提取液羥自由基清除率和費(fèi)菜提取液DPPH﹒清除能力的測定。</p><p><b>　　2.2.2測定方法</b></p><p>　　

90、2.2.2.1 費(fèi)菜提取液中總黃酮濃度測定</p><p>　　標(biāo)準(zhǔn)溶液的制備[11-12]。精密稱取120℃干燥至恒重的蘆丁9.0mg，置50mL量瓶中，加30%乙醇適量，置水浴上微熱使其溶解、冷卻，加30%乙醇至刻度，搖勻，量取上述試液10.0mL，置100mL量瓶中，用蒸餾水稀釋至刻度，搖勻即得標(biāo)準(zhǔn)溶液。每1mL含蘆丁0.018mg。</p><p>　　精密量取上述標(biāo)準(zhǔn)溶液1.0m

91、L、1.5mL、2.0mL、2.5mL、3.0mL、3.5mL，分置25mL量瓶中，各加水至6mL；分別加5 %NaNO2溶液1mL，搖勻，放置6min；分別加10 %Al(N03)3溶液1mL，搖勻，放置6min；然后分別加4 %NaOH溶液10mL，并分別加水至刻度，搖勻，靜置15min，在510nm測定吸收度，以30%乙醇溶液代替蘆丁溶液做空白對照。以濃度(C)(mg/mL)對吸光度(A)作標(biāo)準(zhǔn)曲線.繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線如圖1所示。由圖1

92、得到回歸方程y=12.353x-0.0022，R2=0.9997。</p><p><b>　　圖1 蘆丁標(biāo)準(zhǔn)曲線</b></p><p>　　Fig.1 The standard curve of Rutin</p><p>　　費(fèi)菜提取液中總黃酮含量測定。把制得的費(fèi)菜提取液取1ml稀釋100倍，分別吸取0.5ml、1.0ml、1.5ml、2

93、.0ml、2.5ml稀釋液代替蘆丁溶液，按照制作標(biāo)準(zhǔn)曲線相同的方法測吸光值。</p><p>　　2.2.2.2 菌種的預(yù)處理[13]</p><p>　　首先制作九管無菌的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基斜面，并標(biāo)記好菌種和時間，第一天用三管斜面分別接種三種細(xì)菌，在37oC培養(yǎng)24h；第二天以培養(yǎng)好的細(xì)菌為菌種，分別接種一管，繼續(xù)在在37oC培養(yǎng)24h；第三天以第二天培養(yǎng)的細(xì)菌為菌種，分別接種一管，在在3

94、7oC培養(yǎng)24h，備用。</p><p>　　在無菌條件下，取一環(huán)大腸桿菌放入0.9%的無菌生理鹽水中，充分震蕩混勻后，制成10-1的均勻稀釋液。大概使菌懸液的濃度為106、107cfu/ml（之前做幾次預(yù)實(shí)驗(yàn)）。領(lǐng)取5支9ml無菌生理鹽水試管，分別標(biāo)記大腸桿菌和10-2、10-3、10-4、10-5、10-6。用1ml滅菌移液槍吸取10-1稀釋菌液1ml，沿著管壁徐徐注入標(biāo)有10-2試管的滅菌生理鹽水中（注意移

95、液槍頭不要觸及管內(nèi)稀釋液），然后另換1個1ml移液槍頭插入10-2試管中反復(fù)吹吸菌懸液10余次，充分混合均勻（吹吸菌液時不要過猛太快，吸時將槍頭插入液面下面一點(diǎn)，吹時將吸管提到接近液面以下），制成10-2稀釋液。按上述操作順序，制成10-3、10-4、10-5、10-6系列稀釋菌液（每遞增稀釋一次，即換用一個槍頭，否則稀釋不準(zhǔn)）。</p><p>　　2.2.2.3 提取液的抑菌圈測定</p>&l

96、t;p>　　先將滅菌的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基融化后，在無菌室中趁熱導(dǎo)入無菌平板中，冷卻后分別做好標(biāo)記。用移液槍取10-6試管中的菌液0.1ml，對號接種于10-6的平板中（每個編號設(shè)兩個重復(fù)），再用無菌玻璃涂布棒（用酒精棉擦拭并灼燒滅菌）將菌液涂布均勻，平放于實(shí)驗(yàn)臺上20-30min，使菌液滲入培養(yǎng)基內(nèi)。</p><p>　　按照上述方法制作 10-1、10-4、10-5菌液的平板，10-4、10-5菌液各兩個，1

97、0-1菌液6個平板。10-4、10-5、10-6菌液做菌落總數(shù)計數(shù)用，10-1菌液做抑菌圈用。</p><p>　　把直徑為6mm的打孔器（用酒精棉擦拭并在酒精燈上灼燒滅菌），在每個10-1菌液平板上打3個孔，每個孔之間相差30mm以上，并用無菌鑷子（酒精棉擦拭并在酒精燈上灼燒滅菌）把平板上打孔后的瓊脂拿掉。取出一個平板，分別在里面的三個孔中注入50μl的無菌水、硫酸慶大霉素溶液、費(fèi)菜提取液，做3個平行。取出另一

98、個平板，分別在里面的三個孔中注入50μl的費(fèi)菜提取液、0.1%山梨酸鉀、0.5%山梨酸鉀溶液，同樣做三個平行。以上操作完后，菌落計數(shù)的幾個平板倒置于37oC培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h，做抑菌圈的幾個平板正放于37oC培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24h后觀察。</p><p>　　金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌也做以上相同的操作，但用山梨酸鉀做對照的只做大腸桿菌。</p><p>　　2.2.2.4 費(fèi)菜提取液最低抑

99、菌濃度（MIC）的測定[14-15]</p><p>　　總黃酮采用二倍稀釋法配成各種濃度，其方法：取6支試管分別加入2mL液體培養(yǎng)基，2mL提取液于第1支試管中，混勻后取2mL入第2管，然后依次取2mL移入下一管，到笫6管時棄去2mL，即將提取原液(1g/mL)用提取相應(yīng)的溶劑按照1：2、1：4、1：8、1：16、1：16、1：32的比例進(jìn)行倍半稀釋，得6個濃度的稀釋提取液。在這6管中分別加入0.1rnL大腸桿

100、菌10-1菌液，另取7支試管不加菌液作為空白對照。將其放于培養(yǎng)箱中，37℃培養(yǎng)24h，觀察記錄澄清不長菌的最高稀釋度就是最低抑菌濃度(MIC)，每個樣品設(shè)2個平行組，結(jié)果以平均值計。金黃色葡萄球菌和枯草芽孢桿菌也做以上相同的操作。</p><p>　　2.2.2.5 費(fèi)菜提取液最低殺菌濃度（MBC）的測定[16-17]</p><p>　　取若干個無菌平皿做好標(biāo)記，將MIC測定中未生長細(xì)菌

101、的肉湯用傾注平板法接種于營養(yǎng)瓊脂平板上，37oC培養(yǎng)24h，觀察結(jié)果，以仍無細(xì)菌生長的管內(nèi)的費(fèi)菜提取液的濃度，為最低殺菌濃度。</p><p>　　2.2.2.6 費(fèi)菜提取液還原力測定</p><p>　　原理[18]：抗氧化劑的還原力與其抗氧化性之間存在十分密切的關(guān)系?？寡趸瘎┦请娮拥慕o予體(elec—tron donor)，通過自身的還原作用給出電子而清除自由基，還原力越強(qiáng)，抗氧化性越

102、強(qiáng)。因此，可通過測定還原力來說明其抗氧化活性的大小。普魯士藍(lán)法測定還原力的原理是樣品將鐵氰化鉀(K3Fe(CN)6）還原成亞鐵氰化鉀(K4Fe(CN)6)，亞鐵氰化鉀再與Fe3+作用，生成亞鐵氰化鐵(普魯士藍(lán))，在700nm波長處檢測普魯士藍(lán)的吸光度，以表示還原力的大小，吸光度越高樣品的還原力就越強(qiáng)。</p><p>　　操作步驟[19]：在2.5 ml、pH 6.6磷酸緩沖溶液(phosphate bufer

103、saline，PBS，pH 6.6)中加入1ml不同濃度的費(fèi)菜提取物溶液、1ml 1%鐵氰化鉀，混合物在50℃恒溫條件下加熱20min，急速冷卻，加2.5 ml10%三氯乙酸，離心分離10min。取上層清液5ml，加5ml水，再加1ml 0.1%FeC13，混合均勻，靜置10min后，在700nm下測定其吸光度值(以蒸餾水代替樣品的混合液作參比溶液)，吸光度值越高還原力越強(qiáng)。</p><p>　　2.2.2.7

104、費(fèi)菜提取液羥自由基清除率測定</p><p>　　原理[20]：參照Fnton反應(yīng)的方法建立反應(yīng)體系模型，利用H2O2與Fe2+混合產(chǎn)生·OH，但由于·OH具有很高的反應(yīng)活性，存活時間短，若在反應(yīng)體系中加入水楊酸，就能有效地捕捉·OH，并產(chǎn)生有色產(chǎn)物。</p><p>　　反應(yīng)式如下： H2O2 + Fe2+ → Fe3+ +·0H + 0H-<

105、;/p><p>　　該產(chǎn)物在510nm處有強(qiáng)吸收，若在此反應(yīng)體系中加入具有清除·OH功能的被測物，便會與水楊酸競爭·OH，從而使有色產(chǎn)物生成量減少。</p><p>　　操作步驟[21]：于25mL容量瓶中依次加入2mmol/LFeSO4 5mL，6mmol/L H2O2 5mL，6mmol/L水楊酸一乙醇15mL，于37℃水浴中保溫15min后取出，以蒸餾水為參比，510

106、nm下測其吸光度(Ao)，然后再加入1 mL被測定樣品，搖勻，37℃水浴中保溫15min后取出，以蒸餾水為參比，510nm下測其吸光度(Ax)?？紤]到色素本身的吸光度值，做了對照試驗(yàn)：于25mL容量瓶中依次加入2mmol/LFeSO45mL，蒸餾水5mL，6mmol/L水楊酸一乙醇15mL，于37℃水浴中保溫15min，然后加入1mL被測定樣品，搖勻，于37℃水浴中保溫15min后取出，以蒸餾水為參比，510nm下測其吸光度(Axo)。

107、根據(jù)下面的公式計算抑制率。</p><p>　　清除率=[Ao-(Ax-Axo)]/Ao×l00％</p><p>　　式中：Ao為蒸餾水代替樣品的對照值；Ax為加樣后的吸光度；Axo為樣品本身的本底值。</p><p>　　把費(fèi)菜提取液稀釋10倍、8倍、6倍、4倍、2倍、1倍，分別測清除率，作圖。</p><p>　　2.2.2.

108、8 費(fèi)菜提取液DPPH﹒的清除能力測定</p><p>　　原理[22]：DPPH·（1，1-二苯基-2-三硝基苯肼）是一種穩(wěn)定的有機(jī)自由基，其乙醇溶液顯紫色，在517nm處有最大吸收峰。當(dāng)有供氫的抗氧化劑存在時(如酚類)，孤電子被配對，DPPH·溶液的顏色變淺，吸光度值變小，根據(jù)吸光度的變化可測得抗氧化劑的活性。</p><p>　　操作步驟[23]：DPPH

109、3;以50%乙醇溶液配成0.2μmol/L溶液，取上述不同質(zhì)量濃度的待測液各2m1和DPPH·溶液2ml先后加入同一具塞試管，搖勻于室溫下放置30min后，于517 nm波長處分別測定各反應(yīng)液的吸光值。 </p><p>　　DPPH·的清除率(%)=[1-(Ai-Aj)/Ac]×100%</p><p>　　式中，Ai代表2mlDPPH