費菜提取液抑菌效果和抗氧化研究【開題報告】

1、<p><b>　　畢業(yè)論文開題報告</b></p><p><b>　　食品質(zhì)量與安全</b></p><p>　　費菜提取液抑菌效果和抗氧化研究</p><p>　　一、選題的背景與意義</p><p>　　費菜俗稱“土人參” ，又名土三七、救心菜，屬景天科多年生草本植物。費菜主要分布

2、于我國長江以南各地，不論在平原、丘陵地帶還是高原山區(qū)費菜均能生長。它含有齊墩果酸、谷甾醇、生物堿、景天庚糖、黃酮類、有機(jī)酸、維生素E等多種成份，費菜中的這些成份使得它具有抑菌、抗氧化、增強(qiáng)免疫、擴(kuò)張腦血管、改善冠狀動脈循環(huán)等途徑，達(dá)到降血壓、防中風(fēng)、防心臟病降血脂、抗腫瘤等功效，有很高的食用價值和醫(yī)療保健功能。 </p><p>　　隨著人們對生活水平的不斷提高，對身體保健也越來越重視，近年來世界上掀起了植物藥及

3、保健品的開發(fā)熱潮。通過對費菜提取液抑菌和抗氧化效果的研究，可以提高費菜的使用價值，有助于生產(chǎn)出具有治療和預(yù)防多種疾病的藥品和天然保健品，為費菜的綜合利用開辟新途徑，創(chuàng)造更大的社會效益和經(jīng)濟(jì)效益。</p><p>　　二、研究的基本內(nèi)容與擬解決的主要問題：</p><p><b>　　基本內(nèi)容</b></p><p>　　1.研究費菜提取液對大腸

4、桿菌的抑制效果</p><p>　　研究金黃色葡萄球菌的抑制效果</p><p>　　研究枯草芽孢桿菌的抑制效果</p><p>　　4.測提取液中總黃酮的濃度</p><p>　　5.研究費菜提取液還原力的測定</p><p>　　6.研究費菜提取液對羥自由基的清除能力</p><p>　　7

5、.研究對DPPH·自由基的清除率 </p><p>　　三、研究的方法與技術(shù)路線：</p><p><b>　　費菜提取液制取</b></p><p>　　取新鮮費菜葉在70℃烘干24h，然后用藥物粉碎機(jī)粉粉碎并過80目篩，得到的葉粉備用，在提取之前將葉粉在105℃烘干2h左右。 稱取5g干粉，置于150ml錐形瓶中，按照料液比1:5

6、0加入濃度為70%的乙醇，超聲提取50min，60℃水浴浸提6h，趁熱抽濾，得到濾液。將粗提液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在45-50℃下濃縮至適量后，加入3-4倍體積的95％乙醇以沉淀多糖6h以上，再將粗提液用旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)儀在45-50℃下濃縮至適量，備用。</p><p>　　2.抑菌圈法測定抑菌效果</p><p>　　提前3天把大腸桿菌、金黃色葡萄球菌、枯草芽孢桿菌進(jìn)行活化，接種斜面上備用。制備營養(yǎng)瓊

7、脂培養(yǎng)基, 營養(yǎng)肉湯用于細(xì)菌的液體培養(yǎng)。把所要用的培養(yǎng)基、培養(yǎng)皿、移液槍頭、無菌水等滅菌備用。</p><p>　　首先做每個菌不同梯度濃度的菌懸液。然后選擇一種濃度的菌液用涂布的方法在培養(yǎng)皿中做好平板。用在酒精燈上燒過的6mm的打孔器在每個平板上打3個孔，正三角形均勻分散放置在平皿中央，每兩個孔之間距離30mm以上，每個菌種做三組平行。并用滅菌的鑷子夾掉打孔后的瓊脂，分別取50μL的費菜提取液、硫酸慶大霉素和水

8、注入3個孔內(nèi)。硫酸慶大霉素做陽性對照，水做陰性對照。最后測每種菌菌落總數(shù)，基本保證做抑菌圈時各種菌的濃度一樣（106-108個/ml）。暗室培養(yǎng)(細(xì)菌：37℃/24h)。測定抑菌圈直徑，取平均值。</p><p>　　3.費菜提取液最低抑菌濃度(MIC)和最低殺菌濃度（MBC）的測定</p><p>　　采用二倍稀釋法，以水為溶劑，配制一系列梯度濃度的費菜提取液溶液，將不同梯度濃度的費菜提

9、取液溶液1ml加入到1ml已滅菌的液體培養(yǎng)基中，混合均勻，使培養(yǎng)基中費菜提取液的濃度分別為原提取液的1：2，1：4，1：8，1：16，1：32，1：64，再在每管中加入0.1ml的菌液。暗室培養(yǎng)(細(xì)菌：37℃/24h)，每一與對照組（不加菌）比較，是否變渾濁，以不變渾濁管費菜提取液濃度為其最低抑菌濃度(MIC，minimum inhibitory concentration)。分別吸取1ml以上管中的液體到40度左右的營養(yǎng)瓊脂培養(yǎng)基，測

10、是否長菌。不長菌的最小費菜提取液濃度就是MBC。</p><p>　　測費菜提取液中總黃酮的濃度</p><p>　　用蘆丁做標(biāo)準(zhǔn)曲線，精密量取蘆丁取液0．10mL、0．20mL、0．30mL、0．40mL、0．50mL、0．60mL，費菜提取液0.5ml、1.0ml、1.5ml、2ml、2.5ml分置25mL量瓶中，各加水至6mL；分別加5 %NaNO2溶液1mL，搖勻，放置6min；分

11、別加10 %Al(N03)3溶液1mL，搖勻，放置6min；然后分別加4 %NaOH溶液1OmL，并分別加水至刻度，搖勻，靜置15min，在510nm測定吸收度，以蘆丁濃度(C)(mg／mL)對吸光度(A)作標(biāo)準(zhǔn)曲線，費菜提取液吸光度根據(jù)標(biāo)準(zhǔn)曲線算出濃度。</p><p><b>　　5.還原力測定</b></p><p>　　取2．5 mL不同濃度的費菜提取液于試管

12、中，依次加人2．5 mL0．2 mol／L PBS (pH6．6)、5 mL 1％ K3Fe(CN)6溶液，于5O℃保溫20 min后快速冷卻，再加入2．5 mL10％三氯乙酸溶液，3000 r／min離心10 min，取上清液2．5 mL，依次加入2．5 mL蒸餾水、0．5 mL 0．1％FeC1，溶液，充分混勻，靜置10 min，測定吸光值（以蒸餾水為參比溶液)，吸光度值越高還原力越強(qiáng)，作成曲線。</p><p&

13、gt;　　6.羥自由基清除率測定</p><p>　　按照Smirnof(1989)的方法，利用H2O2與FeSO4混合產(chǎn)生(·OH)，在體系內(nèi)加入水楊酸捕捉(·OH)并產(chǎn)生有色物質(zhì)，該物質(zhì)在510 nm處有最大吸收。于10 mL容量瓶中依次加入2 mmol／LFeSO4 2 mL，6 mmol／L H2O2 2 mL，6 mmol／L水楊酸一乙醇6 mL，于37℃水浴中保溫15 min后取出

14、，以蒸餾水為參比，510 nm下測其吸光度(A。)，然后再加入0.4 mL被測定樣品，搖勻，37℃水浴中保溫15 min后取出，以蒸餾水為參比，510 nm下測其吸光度(Ax)?？紤]到色素本身的吸光度值，做了對照試驗：于25 mL容量瓶中依次加入2mmol／LFeSO42mL，蒸餾水5mL，6 mmol／L水楊酸一乙醇6 mL，于37℃水浴中保溫15 min，然后加入0.4mL被測定樣品，搖勻，于37℃水浴中保溫15 min后取出，以蒸

15、餾水為參比，510 nm下測其吸光度 </p><p>　　清除率計算公式為： 清除率(％)=[A0-(Ax-Ax0)]/A0</p><p>　　式中：Ao：為空白對照液的吸光度；Ax：為加入色素溶液后的吸光度；</p><p>　　Axo：為不加顯色劑H202：色素溶液本底的吸光度。</p><p>　　對DPPH·自由基清除率

16、的測定 </p><p>　　取不同濃度費菜提取液2 ml及濃度為2×104mol/L的DPPH溶液2ml先后加入同一具塞試管中，避光30 min后以樣品提取溶劑為空白調(diào)零測定其吸光度Ai；測定2 ml濃度為2×104mol/L 的DPPH溶液與2 ml無水乙醇混合液的吸光度Ae；再測定2 ml黃酮提取液與2m1無水乙醇混合液的吸光度Aj，重復(fù)5次，求其平均值。根據(jù)下列公式計算沙棗黃酮提取液對

17、DPPH的抑制率，即：抑制率(％)= [1-(Ai-Aj)/Ae]×100％,做標(biāo)準(zhǔn)曲線。 </p><p>　　四、研究的總體安排與進(jìn)度：</p><p>　　2010．10—2010．11 查閱文獻(xiàn)，設(shè)計初步實驗方案；</p><p>　　2010．11—2008．12 實驗設(shè)計，開題報告；</p><p>　　2011．0

18、2—2011．04 實驗操作；</p><p>　　2011．04—2011．05 數(shù)據(jù)處理，撰寫論文。</p><p><b>　　五、主要參考文獻(xiàn)：</b></p><p>　　[1] 袁婷,鐘學(xué)穩(wěn).常見中草藥的體外抑菌試驗[J].試驗研究,2009,9:23-24.</p><p>　　[2] 鄭瑞生,封輝.植物中

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