免疫血液學(xué)白細(xì)胞血小板血清型

1、,,醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)系 張晨光,免疫血液學(xué),----白細(xì)胞 血小板 輸血前交叉配血試驗(yàn),人類白細(xì)胞抗原,人類白細(xì)胞抗原代表個體特異性 與移植排斥有關(guān)的抗原稱為組織相容性抗原或移植抗原-MHS 編碼MHS的基因組稱為主要組織相容性復(fù)合物(MHC) 人類的MHC是首先在白細(xì)胞上發(fā)現(xiàn)的，稱為人類白細(xì)胞抗原(HLA),HLA的研究歷史,最早發(fā)現(xiàn)人類白細(xì)胞抗原者為Dausset-1954年 HLA不僅僅是白

2、細(xì)胞特異性同種抗原。它是分布廣泛的組織抗原。,HLA 分型,血清學(xué)分型細(xì)胞學(xué)分型PCR—DNA分型,HLA的分型命名,血清學(xué)分型命名具有臨床意義的HLA基因有A、B、C、DR、DQ、DP等位點(diǎn)(Loci)，每個位點(diǎn)又有若干等位基因，這些基因的產(chǎn)物便是HLA抗原。 臨床意義比較大的HLA-A、B、C稱為Ⅰ類抗原HLA-DR、DQ、DP稱為Ⅱ類抗原。,HLA的遺傳,單體型遺傳 存在基因重組 多態(tài)性現(xiàn)象

3、連鎖不平衡,HLA的多態(tài)性,HLA的多態(tài)性，表現(xiàn)在血清學(xué)水平和DNA水平。HLA的表型已達(dá)天文數(shù)字，是人類最復(fù)雜的遺傳系統(tǒng)之一。HLA在DNA水平上比血清學(xué)和細(xì)胞學(xué)更具多態(tài)性。,HLA基因分型,1.PCR-SSOP2.PCR-SSP3.PCR-RFLP4.PCR-SSCP5.直接測序法,HLA抗體及抗體檢測,臨床上HLA抗體多由妊娠、輸血或器官移植等免疫產(chǎn)生1．只與一種HLA基因產(chǎn)物反應(yīng)的抗體 2．能與不止一種HLA基

4、因產(chǎn)物結(jié)合的抗體,HLA抗體及抗體檢測,抗體篩選 采用微量淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn)。混合淋巴細(xì)胞+抗體+補(bǔ)體T淋巴細(xì)胞篩選HLA-I類抗體， 用B淋巴細(xì)胞篩選Ⅱ類抗體。,交叉淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn),以受者血清加供者淋巴細(xì)胞，供者血清加受者淋巴細(xì)胞作微量淋巴細(xì)胞毒試驗(yàn) 本試驗(yàn)主要用于骨髓移植或腎移植配型， 也用于輸注血小板的配型,組織相容性試驗(yàn),組織相容性試驗(yàn)適用于輸血，特別是輸注血小板、骨髓移植及腎移植等的配型,HLA在醫(yī)學(xué)中的應(yīng)用

5、,一、HLA與輸血 HLA與非溶血性輸血反應(yīng) HLA與血小板輸注 二、HLA與器官移植 (一)腎移植 (二)骨髓移植 三、HLA與親子鑒定,?,HLA的生物學(xué)功能,1.參與抗原加工處理遞呈(內(nèi)/外源)2.HLA的限制作用3.參與對免疫應(yīng)答的遺傳控制4.誘導(dǎo)自身或同種淋巴細(xì)胞反應(yīng)5.參與T細(xì)胞分化與免疫應(yīng)答過程,血小板血型,一類是與其他細(xì)胞表面或組織共有的抗原，稱血小板相關(guān)抗

6、原另一類為血小板特異性抗原,血小板血型,相關(guān)抗原：主要與紅細(xì)胞的ABO血型系統(tǒng)以及人類白細(xì)胞抗原(HLA)有關(guān)特異性抗原：由血小板特有的抗原決定簇組成，表現(xiàn)出血小板獨(dú)特的遺傳多態(tài)性，在其他細(xì)胞和組織上不能發(fā)現(xiàn),血小板血型現(xiàn)狀,血小板血型抗原HPA-1～16個系，已知其中6對系統(tǒng)HPA-1～5 ，HPA-15共計(jì)24個抗原紅細(xì)胞相關(guān)抗原A，B，H，Tja，D?組織相容性抗原HLA-A、B位點(diǎn),血小板血型,血小板表面存在紅

7、細(xì)胞ABO系統(tǒng)的A抗原和B抗原 可能是從血漿中吸附上的。是否還存在其他紅細(xì)胞血型抗原尚在探討之中在我國，通常進(jìn)行ABO同型血小板輸血,血小板血型,HLA血型抗原血小板膜上存在HLA-A和B位點(diǎn)的抗原血小板上未發(fā)現(xiàn)有HLA-DR、DP、DQ等位點(diǎn)的抗原,血小板血型,血小板特異性抗原 具有獨(dú)特的型特異性，并構(gòu)成血小板膜結(jié)構(gòu)中的一部分血小板特異性抗原有6個血型系統(tǒng)24個抗原，正式命名為HPAl—HPA5,HPA15,血

8、小板抗原糖蛋白,自身抗體,同種抗體,抗原,配合性血小板輸注,ABO同型血小板抗體的篩選交叉配合試驗(yàn)：確保供受體的血小板型和HLA型的配合,血小板同種抗體與輸血,1、ABO血型的選擇 一般不需要做主側(cè)或次側(cè)的交叉配血，最好輸注ABO血型配合的血小板,對有多次輸血史和妊娠史例外.2．Rh血型的選擇 D陰性的患者，最好要避免用D陽性獻(xiàn)血者的濃縮血小板。對育齡婦女可以注射Rh免疫球蛋白.,血小板血型抗原抗體檢測

9、方法,一、血清學(xué)檢測方法—SEPSA 二、基因分型方法,血小板血型抗原抗體檢測方法,SEPSA方法學(xué)原理： SEPSA試驗(yàn)在U型孔微量反應(yīng)板上進(jìn)行，將血小板抗原固定在U型孔壁上，與被檢血清在低離子溶液中反應(yīng)后洗凈，以抗IgG指示細(xì)胞指示反應(yīng)結(jié)果,1.試劑紅細(xì)胞(表面標(biāo)有抗血小板抗體),2.加入供者血小板,3.試劑紅細(xì)胞和血小板特異性結(jié)合,4.加入受者的血清,如有抗血小板抗體,則和血小板發(fā)生特異性結(jié)合,5.凝膠柱中的抗人球

10、蛋白捕獲抗血小板抗體,導(dǎo)致試劑紅細(xì)胞凝集。,血小板配血實(shí)驗(yàn)原理示意圖（陽性）,1.試劑紅細(xì)胞(表面標(biāo)有抗血小板抗體),2.加入供者血小板,3.試劑紅細(xì)胞和血小板特異性結(jié)合,4.加入受者的血清,如血清中無抗血小板抗體,則凝膠柱中的抗人球蛋白不發(fā)生特異性結(jié)合，試劑紅細(xì)胞仍呈單個分布。,血小板配血實(shí)驗(yàn)原理示意圖（陰性）,3．方法,直接測定法間接測定法交叉配血試驗(yàn)質(zhì)量控制：作陰陽性對照,SEPSA試驗(yàn)應(yīng)用,插圖,血小板血型的臨床意義

11、,一.血小板輸注無效性(PTR)二.輸血后紫癜(PTP)三.新生兒同種免疫性血小板減少性紫癜(NAITP)四.血小板的自身免疫作用---特發(fā)性血小板減少性紫癜(簡稱ITP),,血 清 型,1.血清中成分2.蛋白具有遺傳多態(tài)性,型的差別.3.蛋白分類:免疫球蛋白、酶、蛋白、補(bǔ)體 同種型 抗體 抗原 同種異型（Gm、Am、Km） 獨(dú)特型