第三十六章微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量控制

1、第三十六章微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量控制,微生物檢驗(yàn)的質(zhì)量控制，包括室內(nèi)質(zhì)量控制和室間質(zhì)量控制評(píng)價(jià)。室內(nèi)質(zhì)量控制是由實(shí)驗(yàn)室內(nèi)部制定并實(shí)施的，是質(zhì)量保證的核心和基礎(chǔ)。室間質(zhì)量控制評(píng)價(jià)是由實(shí)驗(yàn)室外部的組織或機(jī)構(gòu)對(duì)實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行的質(zhì)量評(píng)價(jià)。,第一節(jié) 室內(nèi)質(zhì)量控制,（一）人員與組織管理 經(jīng)過(guò)廣泛的基礎(chǔ)訓(xùn)練教育，包括微生物學(xué)、基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)臨床醫(yī)學(xué)知識(shí)的學(xué)習(xí)，專業(yè)化的實(shí)驗(yàn)技能培訓(xùn)。 參加醫(yī)務(wù)人員的繼續(xù)教育。配有一名經(jīng)嚴(yán)格訓(xùn)練并長(zhǎng)期從事于微

2、生物檢驗(yàn)的技術(shù)人員，全面負(fù)責(zé)實(shí)驗(yàn)室的工作。,（二）操作手冊(cè),包括：①各級(jí)人員的職責(zé)和權(quán)限；②實(shí)驗(yàn)室安全措施；③標(biāo)本采集和處理指南；④本室開(kāi)展的檢驗(yàn)項(xiàng)目及最低鑒定要求；⑤培養(yǎng)基和試劑的配制方法；⑥質(zhì)量控制方案；⑦常用參考數(shù)據(jù)；⑧其他制度。,（三）培養(yǎng)基的質(zhì)量控制,培養(yǎng)基是分離培養(yǎng)微生物的必需品。培養(yǎng)基質(zhì)量的好壞，直接關(guān)系到分離培養(yǎng)的成敗。目前大多數(shù)實(shí)驗(yàn)室都使用干粉培養(yǎng)基配制或使用成品培養(yǎng)基。對(duì)來(lái)自著名的微生物培養(yǎng)

3、基生產(chǎn)公司的培養(yǎng)基，質(zhì)量比較穩(wěn)定。只要按照說(shuō)明書(shū)的要求貯存，在有效期內(nèi)使用可獲得滿意效果。,測(cè)定羊血瓊脂平板的性能,（四）試劑、抗血清和染色液質(zhì)量控制,1．試劑及染色液注明配制日期， 有效日期及貯存條件。測(cè)試 同時(shí)進(jìn)行陽(yáng)性和陰性對(duì)照試 驗(yàn)。,2．抗血清的質(zhì)量控制來(lái)源可靠， 根據(jù)使用說(shuō)明使用與保存。 凍干制品還應(yīng)注明配成水溶 液的日期?？寡鍛?yīng)澄清。 第一次使用時(shí)，應(yīng)用已知菌 效價(jià)和特異

4、性進(jìn)行測(cè)定。合 格者方可使用。,（五）抗生素與抗生素紙片,抗菌藥物敏感試驗(yàn)是臨床進(jìn)行抗菌治療的指導(dǎo)性實(shí)驗(yàn)，其結(jié)果的正確性直接關(guān)系到抗菌治療的成敗。常用有紙片法和稀釋法，保證結(jié)果的準(zhǔn)確性極為重要。,舉例：紙片法質(zhì)量控制,①培養(yǎng)基：應(yīng)使用合格的MH瓊脂， 應(yīng)使用標(biāo)準(zhǔn)菌株、已知藥敏紙 片和標(biāo)準(zhǔn)方法進(jìn)行測(cè)試，符合 要求才可使用。 ②菌懸液濃度標(biāo)準(zhǔn)： 為1.5×108CFU／ml 。,③含藥紙片應(yīng)冷凍保存

5、，－20℃ 可保存一年。新購(gòu)紙片用標(biāo)準(zhǔn) 菌株和培養(yǎng)基，用標(biāo)準(zhǔn)方法測(cè) 定，符合要求方可使用。,④實(shí)驗(yàn)過(guò)程及結(jié)果測(cè)量：菌懸液應(yīng) 在15min內(nèi)接種至平板，平放3min， 然后將藥物紙片貼到平板上， 100mm的平皿不超過(guò)5張，置35℃ 孵育18h，測(cè)量精確度1／10mm。⑤質(zhì)控菌株有：金黃色葡萄球菌 ATCC25923；大腸 埃希菌ATCC25922

6、 等。,⑥抑菌環(huán)的質(zhì)控范圍：在20個(gè)試驗(yàn) 結(jié)果中只能有1個(gè)結(jié)果超出所列的 范圍。 ⑦質(zhì)控測(cè)定次數(shù)：每批新的MH瓊脂和 含藥紙片必須用質(zhì)控菌株進(jìn)行檢測(cè) 30日，30個(gè)抑菌環(huán)直徑只有少于3個(gè) 結(jié)果超出范圍。達(dá)到要求后，每周 檢測(cè)一次。,（六）儀器,1．高壓滅菌器和干熱滅菌器最好 在滅菌器裝上溫度記錄裝置， 以保證整個(gè)滅菌過(guò)程中保持合 適的溫度。為了保證滅菌的徹 底

7、，可用生物指示劑嗜熱脂肪 芽胞桿菌ATCC7953監(jiān)視滅菌效 果。,2．培養(yǎng)箱、冰箱、水浴箱 應(yīng)在每 日工作開(kāi)始和結(jié)束時(shí)記錄溫度。 3．二氧化碳培養(yǎng)箱 每天檢查CO2含量。4．厭氧罐或厭氧箱 美籃為指示劑， 無(wú)氧時(shí)應(yīng)無(wú)色。,5．生物安全柜 更換濾網(wǎng)由專門(mén) 技術(shù)人員進(jìn)行。6．細(xì)菌培養(yǎng)儀 對(duì)每批培養(yǎng)瓶進(jìn) 行生長(zhǎng)試驗(yàn)。保證在有效期內(nèi) 使用。7．微生物鑒定儀 應(yīng)及時(shí)更新系 統(tǒng)操作軟件，

8、使之能識(shí)別最新 認(rèn)識(shí)的微生物。,（七）標(biāo)本檢驗(yàn)過(guò)程的質(zhì)量控制,微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室除了上述儀器、試劑、人員等進(jìn)行質(zhì)量控制外，還應(yīng)對(duì)標(biāo)本檢驗(yàn)過(guò)程中涉及的每個(gè)環(huán)節(jié)進(jìn)行全程質(zhì)量控制。包括從標(biāo)本采集 ，直接涂片檢查 ，分離培養(yǎng)到鑒定的全過(guò)程。使用自動(dòng)化鑒定儀或編碼方式鑒定，必須進(jìn)行核對(duì)以防錯(cuò)誤。,（八）室內(nèi)全面質(zhì)量控制,實(shí)驗(yàn)室人員要對(duì)以上各項(xiàng)的質(zhì)量控制內(nèi)容進(jìn)行全面實(shí)施。由個(gè)人負(fù)責(zé)全面的質(zhì)量控制，自我核對(duì)，定期與參考實(shí)驗(yàn)室核對(duì)

9、并接受考評(píng)。,（九）標(biāo)準(zhǔn)菌株的來(lái)源和保存,l．標(biāo)準(zhǔn)菌株的來(lái)源 標(biāo)準(zhǔn)菌株是 指具有典型的、穩(wěn)定的生理生 化特征，并被國(guó)際社會(huì)所認(rèn)可 的菌株。來(lái)源于專門(mén)的機(jī)構(gòu)， 如衛(wèi)生部藥物生物制品鑒定所 菌種保藏中心。,2．標(biāo)準(zhǔn)菌株的保存,（l）一般保存法：將菌種于半固體培 養(yǎng)基中，35℃培養(yǎng) 18h時(shí)后封蓋無(wú)菌石 蠟油，

10、置4℃保存。,（2）冷凍干燥法：是最可靠的菌種 保藏方法，它具 有不改變菌種性 狀和保存時(shí)間長(zhǎng) 等優(yōu)點(diǎn)，但需有 專門(mén)的冷凍干燥 設(shè)備。,第二節(jié) 空間質(zhì)量控制,（一）機(jī)構(gòu) 我國(guó)負(fù)責(zé)臨床微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控

11、制 的部門(mén)是各級(jí)臨床檢驗(yàn)中心和參考實(shí)驗(yàn) 室，負(fù)責(zé)定期或不定期地通過(guò)各項(xiàng)熟練 程度考核和盲點(diǎn)試驗(yàn)檢查各實(shí)驗(yàn)室的工 作質(zhì)量和水平，進(jìn)行總結(jié)和評(píng)估。各級(jí) 實(shí)驗(yàn)室可同時(shí)接受?chē)?guó)內(nèi)、國(guó)際多個(gè)質(zhì)量 控制機(jī)構(gòu)或參考實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量評(píng)價(jià)。,（二）一般性檢查項(xiàng)目,包括有否制定各種制度及其執(zhí)行情況。1．培養(yǎng)基和試劑的配制記錄、培養(yǎng)基的保存 方法、滅菌質(zhì)量、有效期。2．室內(nèi)全面質(zhì)量控制的建立，室內(nèi)工作人員 的熟練程度的考核和

12、盲點(diǎn)試驗(yàn)的進(jìn)行情況， 細(xì)菌檢驗(yàn)的操作手冊(cè)及操作的規(guī)范性。3．設(shè)備的操作卡，操作人員的操作水平，設(shè) 備的使用保養(yǎng)、維修記錄。,（三）熟練程度的考核,由質(zhì)控管理機(jī)構(gòu)（檢驗(yàn)中心或參考實(shí)驗(yàn)室）發(fā)放模擬標(biāo)本或菌種，接收的實(shí)驗(yàn)室知道菌株的來(lái)源、檢驗(yàn)的內(nèi)容和時(shí)間。實(shí)驗(yàn)室完成鑒定后在規(guī)定時(shí)間內(nèi)將結(jié)果反饋至檢驗(yàn)中心或參考實(shí)驗(yàn)室，進(jìn)行評(píng)價(jià)。,分析結(jié)果錯(cuò)誤的原因，提供有關(guān)的教育資料或舉辦學(xué)習(xí)班，不斷培養(yǎng)和訓(xùn)練技術(shù)人員，提高了解決類

13、似問(wèn)題的技術(shù)水平。但受試實(shí)驗(yàn)室通常對(duì)這些菌株特別重視，采用超過(guò)常規(guī)操作標(biāo)準(zhǔn)的方法進(jìn)行鑒定，使上報(bào)結(jié)果不能準(zhǔn)確反映實(shí)驗(yàn)室的真實(shí)水平。,（四）盲點(diǎn)試驗(yàn),為了準(zhǔn)確反映受控實(shí)驗(yàn)室日常處理臨床標(biāo)本的實(shí)際水平及能力，較好的方法是進(jìn)行未知標(biāo)本的盲點(diǎn)質(zhì)量控制。由質(zhì)控管理機(jī)構(gòu)將模擬標(biāo)本混入臨床普通標(biāo)本，送人實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行常規(guī)測(cè)定。,實(shí)驗(yàn)室主管及實(shí)驗(yàn)操作者不知道哪一個(gè)標(biāo)本是來(lái)自質(zhì)控機(jī)構(gòu)的。實(shí)驗(yàn)結(jié)果由質(zhì)控管理機(jī)構(gòu)負(fù)責(zé)收回，進(jìn)行評(píng)價(jià)。,（

14、五）質(zhì)控結(jié)果的分析與評(píng)價(jià),質(zhì)控管理機(jī)構(gòu)對(duì)每次質(zhì)控結(jié)果進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析，將每一實(shí)驗(yàn)室的結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行比較。根據(jù)參加的規(guī)模和鑒定的正確數(shù)，計(jì)算鑒定正確率及所有參加實(shí)驗(yàn)室的平均分，以及每個(gè)實(shí)驗(yàn)室的得分。,世界衛(wèi)生組織對(duì)每一個(gè)正確的鑒定得3分；部分正確但可以接受的鑒定結(jié)果得2分；鑒定結(jié)果部分錯(cuò)誤得1分；完全錯(cuò)誤的0分。,英國(guó)國(guó)家微生物學(xué)質(zhì)量控制實(shí)驗(yàn)室的計(jì)算公式為：標(biāo)本鑒定正確數(shù)－平均實(shí)驗(yàn)室正確數(shù) /實(shí)驗(yàn)室平均正確數(shù)的標(biāo)準(zhǔn)差,高