性病的實驗室檢驗與質(zhì)量控制

1、性病的實驗室檢驗與質(zhì)量控制,人民醫(yī)院檢驗科,一、什么是性病,性病—— 是一組傳染性疾病， 通過性接觸而傳播的疾病。,我國重點防治的八種性病,梅毒、梅毒螺旋體淋病、淋球菌軟下疳、杜克雷嗜血桿菌性病性淋巴肉芽腫、衣原體生殖道沙眼衣原體感染、沙眼衣原體尖銳濕疣、乳頭瘤病毒生殖器皰疹、生殖器皰疹病毒艾滋病 、HIV病毒,性病實驗室在性病疫情監(jiān)測中的任務,,疾病準確診斷* 梅毒* 淋病* 沙眼衣原體感染,淋球菌耐藥監(jiān)測,實驗室

2、檢測,專項性病患病率調(diào)查,實驗室質(zhì)量控制,,,,,,性病實驗室在性病防治中的作用,,臨床服務,疫情監(jiān)測,實驗室診斷,效果評價,科學研究,,,,,主要常見性病實驗室檢測介紹,梅毒淋病生殖道沙眼衣原體,常用梅毒檢測方法,病原學檢測血清學檢測,病原學檢測,原理：查找梅毒螺旋體方法：暗視野顯微鏡檢查、鍍銀染色法、直接熒光法、PCR,暗視野顯微鏡檢查,制片：標本置于載玻片上，加一滴生理鹽水，蓋上蓋玻片，在暗視野顯微鏡上油鏡觀察。

3、觀察：由于光線從聚光器的邊緣斜射到涂片上的梅毒螺旋體而發(fā)出光亮。,梅毒螺旋體特征,螺旋整齊折光性強運動緩慢而有規(guī)律，有三種運動方式： 1.圍繞其長軸旋轉運動 2.伸縮其螺旋間距離移動 3.彎曲扭動如蛇形,病原學檢查的臨床意義,可以確診為梅毒及時治療、預后、盡早切斷傳

4、染源注意：未找到梅毒螺旋體，不能排除患梅毒的可能性。,梅毒血清學檢測,一、非梅毒螺旋體抗原血清學試驗二、梅毒螺旋體抗原血清學試驗,,非梅毒螺旋體抗原血清學試驗,1、原理：檢測人體感染梅毒螺旋體產(chǎn)生的抗類脂抗原的抗體2、方法：性病研究實驗室試驗（VDRL）不加熱血清反應素試驗（USR）快速血漿反應素環(huán)狀卡片試驗（RPR）甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST）,RPR,定性試驗?在紙卡圓圈中加入50μL待檢血清，涂滿整個圓

5、圈?使用滴管和專用針頭（60滴/mL），加1滴抗原懸液?旋轉100rpm8min?立即判斷結果,RPR,定量試驗待檢血清用等滲鹽水在紙卡圓圈中作6個稀釋度：原血清，1:2，1:4，1:8，1:16，1:32按定性試驗步驟操作，以出現(xiàn)陽性反應的最高稀釋度報告結果,RPR定量試驗,中等至大的凝塊為陽性（圈4和7）有明確但很小的凝塊為弱陽性（圈2和3）顆粒均勻分布（圈1,5,8-10）或稍粗糙（圈6）為陰性,非梅毒螺旋體抗原血清試

6、驗的優(yōu)缺點：優(yōu)點： *敏感性特異性好 *不需要昂貴設備，簡單易行 *適用于大量人群的血清篩查 *有效治療后血清滴度可下降并陰轉，故可作療效觀察、判愈、復發(fā)。 *20分鐘可獲得實驗結果。 *試劑與方法均已標化，各實驗室間結果可比較。 *試驗可被內(nèi)部質(zhì)控和外部質(zhì)控監(jiān)控進行。缺點： *敏感性和

7、特異性低于螺旋體抗原試驗，BFP反應和前帶現(xiàn)象,,,非梅毒抗原血清試驗的敏感性和特異性,未經(jīng)治療的各期梅毒的敏感性,,非梅毒螺旋體抗原血清試驗臨床意義,簡單、快速硬下疳出現(xiàn)1周-2周可呈陽性適用于大量人群的篩查療效觀察、復發(fā)或再感染判斷,,非梅毒螺旋體抗原血清試驗臨床意義,早期梅毒（一期、二期）經(jīng)足量規(guī)則抗梅毒治療后3個月，VDRL試驗抗體滴度下降2個稀釋度，6個月下降4個稀釋度。 一期梅毒1年后轉為陰性 二期梅毒2年后轉為

8、陰性。 晚期梅毒 治療后血清滴度下降緩慢，2年后約50%病人血清反應仍為陽性。,,生物學假陽性,滴度常<1:8分為急性（6個月內(nèi)消失） 慢性（持續(xù)6個月以上）,生物學假陽性,急性反應見于：發(fā)熱性疾病如肺炎、上呼吸道感染、瘧疾、心內(nèi)膜炎、傳染性單核細胞增多癥等；疫苗接種；妊娠。,慢性反應見于自身免疫學疾病如SLE；抗磷脂綜合征；瘤型麻風；吸毒者；老年人。,生物學假陽性,前帶現(xiàn)象,發(fā)生率<2

9、％ 當抗體滴度高，原倍血清只是弱陽性甚或陰性，如將血清稀釋后再做，則見高滴度反應,梅毒螺旋體抗原血清學試驗,原理：用梅毒螺旋體抗原檢測特異性抗梅毒螺旋體抗體 方法： 梅毒螺旋體顆粒凝集試驗 (TPPA) 梅毒螺旋體血球凝集試驗 (TPHA) 梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA） 熒光螺旋體抗體吸收試驗（FTA-ABS） 梅毒IgM抗體檢測（IgM） 梅毒螺旋體蛋白印跡試驗（WB）,梅毒螺旋體抗原血清試驗,TP

10、PA,,,梅毒螺旋體抗原血清學試驗臨床意義,作為非梅毒螺旋體抗原血清試驗(如RPR等)初篩陽性標本的確證試驗。梅毒患者經(jīng)過抗梅治療后，TPPA等梅毒螺旋體抗體試驗試驗仍可陽性，故TPPA等試驗陽性不能作為療效觀察的指標。TPPA等陽性不能區(qū)分既往感染和現(xiàn)癥感染，應結合非梅毒螺旋體抗原血清試驗結果進行診斷。,梅毒血清學試驗結果的臨床意義總匯,意義： TRUST TPPA _

11、 _ 排除梅毒 一期梅毒的早期 + + 現(xiàn)癥梅毒(梅毒孕婦所生

12、 的嬰兒除外) + - 生物學假陽性 - + 早期梅毒、經(jīng)治療后,梅毒實驗室檢測策略選擇,根據(jù)目的選擇檢測方法及檢測策略?？刹捎萌魏我活惷范狙鍖W檢測方法作為篩查試驗。方法選擇依據(jù)敏感性、

13、特異性（試劑評估）操作流程（可及性）試劑的價格、結果時間（可接收性）,淋 病,常用淋病檢測方法,直接顯微鏡檢查分離培養(yǎng)淋球菌,直接顯微鏡檢查,原理：男性淋菌性尿道炎的分泌物中，多形核白細胞內(nèi)可找到革蘭染色陰性的雙球菌。,直接顯微鏡檢查的臨床意義,男性淋菌性尿道炎的尿道標本 敏感性及特異性可高達95%～99%，具診斷價值。宮頸標本、無癥狀男性尿拭子及取自直腸的涂片時 敏感性僅40～70%。不推薦直接顯微鏡檢查

14、診斷直腸和咽部淋球菌感染不能用于療后判愈多形核細胞外見到形態(tài)典型的革蘭陰性雙球菌，需做培養(yǎng)進行確證,淋球菌培養(yǎng),1．原理：淋球菌在適宜的培養(yǎng)基上可生長出特征性的菌落，根據(jù)菌落大小、形態(tài)、光澤、邊緣、顏色等情況，可以作為淋球菌的鑒定依據(jù)之一。2、方法特點：敏感性 81~100%。 特異性 100%,淋球菌培養(yǎng),培養(yǎng)條件 ： 35 ℃ ～36℃，含5%～10% CO2，濕潤（70%濕度）的環(huán)境。CO2環(huán)境可由CO2培養(yǎng)箱、CO2

15、產(chǎn)氣袋及燭缸提供。使用燭缸時，應使用白色、無芳香味的無毒性蠟燭。在燭缸底部放些浸水棉球以保持一定的濕度。培養(yǎng)時間：24~48小時,淋球菌的初步鑒定,初步鑒定淋球菌的依據(jù)菌落特征氧化酶試驗革蘭染色,淋球菌培養(yǎng)的臨床意義,培養(yǎng)法為診斷淋病的金標準.用于女性感染者、亞臨床感染者、以及來自直腸和咽部的感染的確診試驗。,生殖道沙眼衣原體感染,常用生殖道衣原體感染檢測方法,抗原檢測 酶聯(lián)免疫吸附試驗（ELISA） 免疫層析快速檢測

16、核酸檢測,酶聯(lián)免疫吸附試驗,原理：與衣原體特異性單克隆抗體形成抗原抗體復合物，通過酶聯(lián)顯色反應檢測衣原體抗原。方法特點 敏感性：79－97％ 特異性: 97－99％試驗結果陰性時，不能完全排除沙眼衣原體感染，有可能是沙眼衣原體數(shù)量不足或標本采集不當?shù)木壒?結果判讀客觀性強，適宜于大樣本沙眼衣原體感染的檢測。在沙眼衣原體高流行率的人群臨床和健康體檢；低流行率（小于5%）的人群中應用時，結果解釋應慎重。,酶聯(lián)免疫吸附試驗

17、臨床意義,抗原快速檢測,原理：利用免疫層析法原理，采用膠體金標記的沙眼衣原體抗體濾紙條或卡，快速檢測標本中的沙眼衣原體抗原。方法特點簡易，方便，快速，尤其適用于基層單位標本中需要足夠數(shù)量的沙眼衣原體抗原，否則有假陰性結果,抗原快速檢測臨床意義,該方法主要適用于女性患者宮頸標本的檢測，敏感性較低。該法快速、簡便，無需特殊儀器，因此，較適合基層實驗室開展。,核酸擴增檢測,原理：核酸擴增技術是通過擴增沙眼衣原體的多拷貝基因（如隱蔽性質(zhì)

18、粒、染色體和RNA）檢測病原體。方法： 包括聚合酶鏈反應（PCR）、連接酶鏈反應（LCR）、等溫鏈置換擴增技術（SDA）、轉錄介導擴增技術（TMA）等。目前國內(nèi)廣泛使用的有實時熒光PCR。,核酸擴增檢測臨床意義,核酸擴增檢測具有很高的敏感性和特異性，世界衛(wèi)生組織已推薦為擴大的生殖道沙眼衣原體感染實驗室診斷的“金標準”。核酸擴增檢測不僅可用于宮頸、尿道標本中沙眼衣原體的檢測，也可用于男女性尿液標本的檢測。 開展核酸檢測的實驗室

19、應通過有關部門考核取得開展臨床核酸檢測技術資格證。,方法評價,核酸檢測 是目前為止最好的檢測方法－但存在檢測敏感性上的局限性ELISA抗原檢測 嚴格按操作說明進行操作－是非常好的檢測方法高通量，自動化快速抗原檢測 操作時間短，單人份操作，但敏感性極低,性病實驗室的質(zhì)量控制,內(nèi)部質(zhì)量控制外部質(zhì)量控制,1. 有實驗室負責人，實驗人員分工明確2. 實驗室人員應該定期參加培訓、進修或?qū)I(yè)研討會3. 有實驗室

20、各項管理制度4. 制定常規(guī)實驗室標準操作程序（SOP）,性病實驗室的質(zhì)量管理,性病實驗室的質(zhì)量管理,1．儀器、設備 實驗室所有使用儀器應有使用、保養(yǎng)及維修記錄有溫控的儀器需每天記錄溫度2．培養(yǎng)基及試劑 ⑴ 嚴格按配方及技術要求配制培養(yǎng)基及試劑 ⑵ 對配制的培養(yǎng)基及試劑應有質(zhì)檢 ⑶ 購買的試劑盒應為經(jīng)國家有關部門檢驗 合格的產(chǎn)品（附有關證明） ⑷ 所有培養(yǎng)基及試劑的保存都應符合要求,,性病實驗室質(zhì)