性病的實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)與質(zhì)量控制

1、性病的實(shí)驗(yàn)室檢驗(yàn)與質(zhì)量控制,人民醫(yī)院檢驗(yàn)科,一、什么是性病,性病—— 是一組傳染性疾病， 通過性接觸而傳播的疾病。,我國重點(diǎn)防治的八種性病,梅毒、梅毒螺旋體淋病、淋球菌軟下疳、杜克雷嗜血桿菌性病性淋巴肉芽腫、衣原體生殖道沙眼衣原體感染、沙眼衣原體尖銳濕疣、乳頭瘤病毒生殖器皰疹、生殖器皰疹病毒艾滋病 、HIV病毒,性病實(shí)驗(yàn)室在性病疫情監(jiān)測中的任務(wù),,疾病準(zhǔn)確診斷* 梅毒* 淋病* 沙眼衣原體感染,淋球菌耐藥監(jiān)測,實(shí)驗(yàn)室

2、檢測,專項(xiàng)性病患病率調(diào)查,實(shí)驗(yàn)室質(zhì)量控制,,,,,,性病實(shí)驗(yàn)室在性病防治中的作用,,臨床服務(wù),疫情監(jiān)測,實(shí)驗(yàn)室診斷,效果評(píng)價(jià),科學(xué)研究,,,,,主要常見性病實(shí)驗(yàn)室檢測介紹,梅毒淋病生殖道沙眼衣原體,常用梅毒檢測方法,病原學(xué)檢測血清學(xué)檢測,病原學(xué)檢測,原理：查找梅毒螺旋體方法：暗視野顯微鏡檢查、鍍銀染色法、直接熒光法、PCR,暗視野顯微鏡檢查,制片：標(biāo)本置于載玻片上，加一滴生理鹽水，蓋上蓋玻片，在暗視野顯微鏡上油鏡觀察。

3、觀察：由于光線從聚光器的邊緣斜射到涂片上的梅毒螺旋體而發(fā)出光亮。,梅毒螺旋體特征,螺旋整齊折光性強(qiáng)運(yùn)動(dòng)緩慢而有規(guī)律，有三種運(yùn)動(dòng)方式： 1.圍繞其長軸旋轉(zhuǎn)運(yùn)動(dòng) 2.伸縮其螺旋間距離移動(dòng) 3.彎曲扭動(dòng)如蛇形,病原學(xué)檢查的臨床意義,可以確診為梅毒及時(shí)治療、預(yù)后、盡早切斷傳

4、染源注意：未找到梅毒螺旋體，不能排除患梅毒的可能性。,梅毒血清學(xué)檢測,一、非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)二、梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn),,非梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn),1、原理：檢測人體感染梅毒螺旋體產(chǎn)生的抗類脂抗原的抗體2、方法：性病研究實(shí)驗(yàn)室試驗(yàn)（VDRL）不加熱血清反應(yīng)素試驗(yàn)（USR）快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗(yàn)（RPR）甲苯胺紅不加熱血清試驗(yàn)（TRUST）,RPR,定性試驗(yàn)?在紙卡圓圈中加入50μL待檢血清，涂滿整個(gè)圓

5、圈?使用滴管和專用針頭（60滴/mL），加1滴抗原懸液?旋轉(zhuǎn)100rpm8min?立即判斷結(jié)果,RPR,定量試驗(yàn)待檢血清用等滲鹽水在紙卡圓圈中作6個(gè)稀釋度：原血清，1:2，1:4，1:8，1:16，1:32按定性試驗(yàn)步驟操作，以出現(xiàn)陽性反應(yīng)的最高稀釋度報(bào)告結(jié)果,RPR定量試驗(yàn),中等至大的凝塊為陽性（圈4和7）有明確但很小的凝塊為弱陽性（圈2和3）顆粒均勻分布（圈1,5,8-10）或稍粗糙（圈6）為陰性,非梅毒螺旋體抗原血清試

6、驗(yàn)的優(yōu)缺點(diǎn)：優(yōu)點(diǎn)： *敏感性特異性好 *不需要昂貴設(shè)備，簡單易行 *適用于大量人群的血清篩查 *有效治療后血清滴度可下降并陰轉(zhuǎn)，故可作療效觀察、判愈、復(fù)發(fā)。 *20分鐘可獲得實(shí)驗(yàn)結(jié)果。 *試劑與方法均已標(biāo)化，各實(shí)驗(yàn)室間結(jié)果可比較。 *試驗(yàn)可被內(nèi)部質(zhì)控和外部質(zhì)控監(jiān)控進(jìn)行。缺點(diǎn)： *敏感性和

7、特異性低于螺旋體抗原試驗(yàn)，BFP反應(yīng)和前帶現(xiàn)象,,,非梅毒抗原血清試驗(yàn)的敏感性和特異性,未經(jīng)治療的各期梅毒的敏感性,,非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)臨床意義,簡單、快速硬下疳出現(xiàn)1周-2周可呈陽性適用于大量人群的篩查療效觀察、復(fù)發(fā)或再感染判斷,,非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)臨床意義,早期梅毒（一期、二期）經(jīng)足量規(guī)則抗梅毒治療后3個(gè)月，VDRL試驗(yàn)抗體滴度下降2個(gè)稀釋度，6個(gè)月下降4個(gè)稀釋度。 一期梅毒1年后轉(zhuǎn)為陰性 二期梅毒2年后轉(zhuǎn)為

8、陰性。 晚期梅毒 治療后血清滴度下降緩慢，2年后約50%病人血清反應(yīng)仍為陽性。,,生物學(xué)假陽性,滴度常<1:8分為急性（6個(gè)月內(nèi)消失） 慢性（持續(xù)6個(gè)月以上）,生物學(xué)假陽性,急性反應(yīng)見于：發(fā)熱性疾病如肺炎、上呼吸道感染、瘧疾、心內(nèi)膜炎、傳染性單核細(xì)胞增多癥等；疫苗接種；妊娠。,慢性反應(yīng)見于自身免疫學(xué)疾病如SLE；抗磷脂綜合征；瘤型麻風(fēng)；吸毒者；老年人。,生物學(xué)假陽性,前帶現(xiàn)象,發(fā)生率<2

9、％ 當(dāng)抗體滴度高，原倍血清只是弱陽性甚或陰性，如將血清稀釋后再做，則見高滴度反應(yīng),梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn),原理：用梅毒螺旋體抗原檢測特異性抗梅毒螺旋體抗體 方法： 梅毒螺旋體顆粒凝集試驗(yàn) (TPPA) 梅毒螺旋體血球凝集試驗(yàn) (TPHA) 梅毒酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA） 熒光螺旋體抗體吸收試驗(yàn)（FTA-ABS） 梅毒IgM抗體檢測（IgM） 梅毒螺旋體蛋白印跡試驗(yàn)（WB）,梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn),TP

10、PA,,,梅毒螺旋體抗原血清學(xué)試驗(yàn)臨床意義,作為非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)(如RPR等)初篩陽性標(biāo)本的確證試驗(yàn)。梅毒患者經(jīng)過抗梅治療后，TPPA等梅毒螺旋體抗體試驗(yàn)試驗(yàn)仍可陽性，故TPPA等試驗(yàn)陽性不能作為療效觀察的指標(biāo)。TPPA等陽性不能區(qū)分既往感染和現(xiàn)癥感染，應(yīng)結(jié)合非梅毒螺旋體抗原血清試驗(yàn)結(jié)果進(jìn)行診斷。,梅毒血清學(xué)試驗(yàn)結(jié)果的臨床意義總匯,意義： TRUST TPPA _

11、 _ 排除梅毒 一期梅毒的早期 + + 現(xiàn)癥梅毒(梅毒孕婦所生

12、 的嬰兒除外) + - 生物學(xué)假陽性 - + 早期梅毒、經(jīng)治療后,梅毒實(shí)驗(yàn)室檢測策略選擇,根據(jù)目的選擇檢測方法及檢測策略?？刹捎萌魏我活惷范狙鍖W(xué)檢測方法作為篩查試驗(yàn)。方法選擇依據(jù)敏感性、

13、特異性（試劑評(píng)估）操作流程（可及性）試劑的價(jià)格、結(jié)果時(shí)間（可接收性）,淋 病,常用淋病檢測方法,直接顯微鏡檢查分離培養(yǎng)淋球菌,直接顯微鏡檢查,原理：男性淋菌性尿道炎的分泌物中，多形核白細(xì)胞內(nèi)可找到革蘭染色陰性的雙球菌。,直接顯微鏡檢查的臨床意義,男性淋菌性尿道炎的尿道標(biāo)本 敏感性及特異性可高達(dá)95%～99%，具診斷價(jià)值。宮頸標(biāo)本、無癥狀男性尿拭子及取自直腸的涂片時(shí) 敏感性僅40～70%。不推薦直接顯微鏡檢查

14、診斷直腸和咽部淋球菌感染不能用于療后判愈多形核細(xì)胞外見到形態(tài)典型的革蘭陰性雙球菌，需做培養(yǎng)進(jìn)行確證,淋球菌培養(yǎng),1．原理：淋球菌在適宜的培養(yǎng)基上可生長出特征性的菌落，根據(jù)菌落大小、形態(tài)、光澤、邊緣、顏色等情況，可以作為淋球菌的鑒定依據(jù)之一。2、方法特點(diǎn)：敏感性 81~100%。 特異性 100%,淋球菌培養(yǎng),培養(yǎng)條件 ： 35 ℃ ～36℃，含5%～10% CO2，濕潤（70%濕度）的環(huán)境。CO2環(huán)境可由CO2培養(yǎng)箱、CO2

15、產(chǎn)氣袋及燭缸提供。使用燭缸時(shí)，應(yīng)使用白色、無芳香味的無毒性蠟燭。在燭缸底部放些浸水棉球以保持一定的濕度。培養(yǎng)時(shí)間：24~48小時(shí),淋球菌的初步鑒定,初步鑒定淋球菌的依據(jù)菌落特征氧化酶試驗(yàn)革蘭染色,淋球菌培養(yǎng)的臨床意義,培養(yǎng)法為診斷淋病的金標(biāo)準(zhǔn).用于女性感染者、亞臨床感染者、以及來自直腸和咽部的感染的確診試驗(yàn)。,生殖道沙眼衣原體感染,常用生殖道衣原體感染檢測方法,抗原檢測 酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)（ELISA） 免疫層析快速檢測

16、核酸檢測,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn),原理：與衣原體特異性單克隆抗體形成抗原抗體復(fù)合物，通過酶聯(lián)顯色反應(yīng)檢測衣原體抗原。方法特點(diǎn) 敏感性：79－97％ 特異性: 97－99％試驗(yàn)結(jié)果陰性時(shí)，不能完全排除沙眼衣原體感染，有可能是沙眼衣原體數(shù)量不足或標(biāo)本采集不當(dāng)?shù)木壒?結(jié)果判讀客觀性強(qiáng)，適宜于大樣本沙眼衣原體感染的檢測。在沙眼衣原體高流行率的人群臨床和健康體檢；低流行率（小于5%）的人群中應(yīng)用時(shí)，結(jié)果解釋應(yīng)慎重。,酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)

17、臨床意義,抗原快速檢測,原理：利用免疫層析法原理，采用膠體金標(biāo)記的沙眼衣原體抗體濾紙條或卡，快速檢測標(biāo)本中的沙眼衣原體抗原。方法特點(diǎn)簡易，方便，快速，尤其適用于基層單位標(biāo)本中需要足夠數(shù)量的沙眼衣原體抗原，否則有假陰性結(jié)果,抗原快速檢測臨床意義,該方法主要適用于女性患者宮頸標(biāo)本的檢測，敏感性較低。該法快速、簡便，無需特殊儀器，因此，較適合基層實(shí)驗(yàn)室開展。,核酸擴(kuò)增檢測,原理：核酸擴(kuò)增技術(shù)是通過擴(kuò)增沙眼衣原體的多拷貝基因（如隱蔽性質(zhì)

18、粒、染色體和RNA）檢測病原體。方法： 包括聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）、連接酶鏈反應(yīng)（LCR）、等溫鏈置換擴(kuò)增技術(shù)（SDA）、轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)擴(kuò)增技術(shù)（TMA）等。目前國內(nèi)廣泛使用的有實(shí)時(shí)熒光PCR。,核酸擴(kuò)增檢測臨床意義,核酸擴(kuò)增檢測具有很高的敏感性和特異性，世界衛(wèi)生組織已推薦為擴(kuò)大的生殖道沙眼衣原體感染實(shí)驗(yàn)室診斷的“金標(biāo)準(zhǔn)”。核酸擴(kuò)增檢測不僅可用于宮頸、尿道標(biāo)本中沙眼衣原體的檢測，也可用于男女性尿液標(biāo)本的檢測。 開展核酸檢測的實(shí)驗(yàn)室

19、應(yīng)通過有關(guān)部門考核取得開展臨床核酸檢測技術(shù)資格證。,方法評(píng)價(jià),核酸檢測 是目前為止最好的檢測方法－但存在檢測敏感性上的局限性ELISA抗原檢測 嚴(yán)格按操作說明進(jìn)行操作－是非常好的檢測方法高通量，自動(dòng)化快速抗原檢測 操作時(shí)間短，單人份操作，但敏感性極低,性病實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量控制,內(nèi)部質(zhì)量控制外部質(zhì)量控制,1. 有實(shí)驗(yàn)室負(fù)責(zé)人，實(shí)驗(yàn)人員分工明確2. 實(shí)驗(yàn)室人員應(yīng)該定期參加培訓(xùn)、進(jìn)修或?qū)I(yè)研討會(huì)3. 有實(shí)驗(yàn)室

20、各項(xiàng)管理制度4. 制定常規(guī)實(shí)驗(yàn)室標(biāo)準(zhǔn)操作程序（SOP）,性病實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理,性病實(shí)驗(yàn)室的質(zhì)量管理,1．儀器、設(shè)備 實(shí)驗(yàn)室所有使用儀器應(yīng)有使用、保養(yǎng)及維修記錄有溫控的儀器需每天記錄溫度2．培養(yǎng)基及試劑 ⑴ 嚴(yán)格按配方及技術(shù)要求配制培養(yǎng)基及試劑 ⑵ 對(duì)配制的培養(yǎng)基及試劑應(yīng)有質(zhì)檢 ⑶ 購買的試劑盒應(yīng)為經(jīng)國家有關(guān)部門檢驗(yàn) 合格的產(chǎn)品（附有關(guān)證明） ⑷ 所有培養(yǎng)基及試劑的保存都應(yīng)符合要求,,性病實(shí)驗(yàn)室質(zhì)