性病實驗室檢測及質(zhì)量控制

1、性病實驗室檢測及質(zhì)量控制,《淋病診斷標(biāo)準（WS 268-2007）》《梅毒、淋病、生殖器皰疹、生殖道沙眼衣原體感染診療指南（2014）》《女性生殖道沙眼衣原體感染診治共識（2015）》《性病淋巴肉芽腫診斷（WS/T 237-2016）》《梅毒非特異性抗體檢測操作指南（WS/T 491-2016）》《生殖道沙眼衣原體感染診斷（WS/T 513-2016）》《尖銳濕疣診斷（WS/T 235-2016）》《生殖器皰疹診斷（WS/

2、T 236-2017）》《梅毒診斷（WS 273 — 2018）》,依據(jù),梅毒,梅毒,由梅毒螺旋體（TP）感染人體引起的具有復(fù)雜臨床表現(xiàn)的慢性感染性疾病，性接觸是最主要的傳播途徑，其次是母嬰傳播，少數(shù)也可通過輸血或間接方式傳播。臨床分期 一期梅毒 二期梅毒 三期（晚期）梅毒 隱性（潛伏）梅毒 胎傳（先天）梅毒,梅毒的自然病程,病原學(xué)血清學(xué),病原學(xué)血清學(xué),血清學(xué),血清學(xué)組織病理學(xué),梅毒實

3、驗室檢測,病原學(xué)檢測 暗視野顯微鏡檢查 鍍銀染色 核酸檢測 血清學(xué)檢測 梅毒非特異性抗體試驗（非梅毒螺旋體血清學(xué)試驗） 梅毒特異性抗體試驗（梅毒螺旋體血清學(xué)試驗）,,,直接檢測,間接檢測,病原學(xué)檢測 — 鏡檢,暗視野顯微鏡檢查,鍍銀染色檢查,臨床應(yīng)用,鏡檢用于早期（一、二期）梅毒的皮膚黏膜損害及淋巴結(jié)病變的檢測，能用于梅毒的早期診斷。試驗敏感性80%，陰性不能排除梅毒，應(yīng)同時進行血清學(xué)

4、試驗，謹慎用于口腔和直腸部位的檢查。核酸檢測適宜樣本為皮損部位組織液、淋巴穿刺液及腦脊液，在早期梅毒、神經(jīng)梅毒和先天梅毒等診斷中具有診斷價值。,核酸目前不作臨床常規(guī)項目開展,血清學(xué)檢測,梅毒非特異性抗體試驗（非梅毒螺旋體血清學(xué)試驗） 性病研究實驗室試驗（VDRL） 快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗（RPR） 甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST）梅毒特異性抗體試驗（梅毒螺旋體血清學(xué)試驗） 熒光梅毒

5、螺旋體抗體吸收試驗（FTA-ABS） 梅毒螺旋體免疫印跡試驗(TP-WB) 梅毒螺旋體血球凝集試驗（TPHA） 梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗（TPPA） 梅毒螺旋體抗體酶聯(lián)免疫試驗（TP-ELISA） 梅毒螺旋體快速診斷試驗（TP-RT） 梅毒螺旋體化學(xué)發(fā)光免疫分析法（TP-CLIA）,血清學(xué)檢測,梅毒非特異性抗體試驗（非梅毒螺旋體血清學(xué)試驗） 性病研究實驗室試驗（VD

6、RL） 快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗（RPR） 甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST）梅毒特異性抗體試驗（梅毒螺旋體血清學(xué)試驗） 熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗（FTA-ABS） 梅毒螺旋體免疫印跡試驗(TP-WB) 梅毒螺旋體血球凝集試驗（TPHA） 梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗（TPPA） 梅毒螺旋體抗體酶聯(lián)免疫試驗（TP-ELISA） 梅毒螺旋體快速診斷試驗

7、（TP-RT） 梅毒螺旋體化學(xué)發(fā)光免疫分析法（TP-CLIA）,梅毒非特異性抗體試驗原理,感染梅毒螺旋體后，被損害的宿主細胞及梅毒螺旋體本身釋放的類脂質(zhì)物質(zhì)，引起宿主產(chǎn)生IgA、IgM和IgG抗類脂質(zhì)抗體，這種抗體在體外與人工按一定比例配置的含心磷脂、卵磷脂和膽固醇的抗原溶液發(fā)生作用，產(chǎn)生絮狀凝集現(xiàn)象，不同反應(yīng)強度的凝集現(xiàn)象與抗體濃度成正相關(guān)，在一定程度上反映了梅毒感染的活動狀態(tài)。,VDRL試驗結(jié)果,肉眼,低倍鏡（陰性）,低倍

8、鏡（弱陽性）,低倍鏡（強陽性）,RPR與TRUST試驗結(jié)果,臨床應(yīng)用,輔助診斷 與活動性梅毒有關(guān)，是判斷“現(xiàn)癥感染”的指標(biāo)，結(jié)合梅毒特異性抗體檢測結(jié)果可確診梅毒。 VDRL 是診斷神經(jīng)梅毒的標(biāo)準方法。判斷先天梅毒的依據(jù)之一。療效監(jiān)測 抗體滴度變化可用于臨床療效判斷、判愈、復(fù)發(fā)及再感染的依據(jù)。,因抗原原料和生產(chǎn)工藝的不同，療效監(jiān)測時應(yīng)采用相同的方法和試劑品牌。,局限性,假陰性反應(yīng) 窗口期。假陽性反應(yīng) 真空采血管干擾。感染

9、性因素、非感染性因素、生理性因素（孕婦、老年人群）。,5－7%孕婦會出現(xiàn)一過性的RPR陽性。,導(dǎo)致梅毒非特異性抗體假陽性反應(yīng)的原因,局限性,血清固定部分患者經(jīng)過足量驅(qū)梅治療，梅毒非特異性抗體維持在相對恒定的低滴度狀態(tài)。3.8~15.2%一期梅毒、11.64~18.18%二期梅毒、27.41~40.5%潛伏梅毒。 前帶現(xiàn)象前帶現(xiàn)象是由于抗體濃度過高，導(dǎo)致抗原抗體反應(yīng)的比例失調(diào)，而出現(xiàn)可疑的反應(yīng)或陰性反應(yīng)，將血清樣本稀釋后即出現(xiàn)陽

10、性反應(yīng)。常見于早期梅毒（1 %～2 % 二期梅毒、0.5 %～1 % 一期梅毒）。賈-赫氏反應(yīng)（吉-海反應(yīng)）。,血清學(xué)檢測,梅毒非特異性抗體檢測（非梅毒螺旋體抗原血清試驗） 性病研究實驗室試驗（VDRL） 快速血漿反應(yīng)素環(huán)狀卡片試驗（RPR） 甲苯胺紅不加熱血清試驗（TRUST）梅毒特異性抗體試驗（梅毒螺旋體血清學(xué)試驗） 熒光梅毒螺旋體抗體吸收試驗（FTA-ABS） 梅毒螺旋體免

11、疫印跡試驗(TP-WB) 梅毒螺旋體血球凝集試驗（TPHA） 梅毒螺旋體明膠顆粒凝集試驗（TPPA） 梅毒螺旋體抗體酶聯(lián)免疫試驗（TP-ELISA） 梅毒螺旋體快速診斷試驗（TP-RT） 梅毒螺旋體化學(xué)發(fā)光免疫分析法（TP-CLIA）,梅毒特異性抗體試驗原理,臨床應(yīng)用和局限性,梅毒血清學(xué)試驗的結(jié)果解釋,梅毒特異性抗體試驗的生物學(xué)假陽性反應(yīng),梅毒血清學(xué)試驗的質(zhì)量控制,實驗環(huán)境技術(shù)人員儀

12、器設(shè)備試劑耗材樣本要求檢測項目檢測流程室內(nèi)質(zhì)控室間質(zhì)評檢驗報告,實驗環(huán)境,溫度 實驗室溫度應(yīng)控制在23-29℃；濕度 實驗室濕度控制在適當(dāng)范圍（50-70%）；,溫濕度對梅毒非特異性抗體檢測影響更大,保濕蓋,加濕盒,,技術(shù)人員,技術(shù)人員的上崗前培訓(xùn)，定期復(fù)訓(xùn)。開展科室內(nèi)部的二級培訓(xùn)。,儀器設(shè)備－水平旋轉(zhuǎn)儀/水平搖床,基本要求 水平狀態(tài)轉(zhuǎn)速符合100±2r/min（RPR/TRUST）、或180&

13、#177;2r/min（VDRL）的要求。 時間控制精度符合±1s/min的要求。 數(shù)字化電子控制部件可預(yù)設(shè)RPR/TRUST和VDRL試驗的固定反應(yīng)程序。 水平樣品托盤附有夾槽用于固定反應(yīng)板， 避免在旋轉(zhuǎn)時反應(yīng)板滑出水平旋轉(zhuǎn)儀。 不可使用旋鈕式調(diào)節(jié)裝置的水平旋轉(zhuǎn)儀。,儀器設(shè)備－水平旋轉(zhuǎn)儀/水平搖床,維護和校準 應(yīng)定期對水平旋轉(zhuǎn)儀進行保養(yǎng)和校準，保存相應(yīng)記錄。 可由生產(chǎn)廠商對水平旋轉(zhuǎn)儀的轉(zhuǎn)速和時間控制進行校

14、準，并出具報告。 可自行制定相應(yīng)的標(biāo)準化文件，進行日常維護。,基本要求專用抗原滴針的內(nèi)外壁宜經(jīng)硅涂層處理。用于血清和血漿樣品檢測時，專用抗原滴針每次滴出的抗原量是17μL，或符合59±1滴/mL的技術(shù)要求。維護保養(yǎng)當(dāng)日檢測完成后，宜用蒸餾水或去離子水沖洗針管。不要擦拭針頭，這樣會磨損硅涂層，可能影響滴加抗原的準確性。 每6個月更換專用滴管和針頭。,儀器設(shè)備－ 專用抗原滴針,試劑耗材－檢測試劑,基本要求選擇三證齊全

15、的試劑；根據(jù)臨床需求選擇合適的檢測方法和性能符合要求的試劑；規(guī)范試劑的采購、保存、使用和養(yǎng)護；,基本要求商品化試劑盒中的反應(yīng)板上有若干個直徑18mm的反應(yīng)圓圈。沿反應(yīng)圓圈內(nèi)側(cè)邊緣可呈凹面，防止旋轉(zhuǎn)時液體溢出。維護保養(yǎng)反應(yīng)板正面是樣品的反應(yīng)區(qū)，避免直接接觸和污染。 試劑盒打開后，紙質(zhì)反應(yīng)板應(yīng)保存在干燥的室溫下，不可置于冰箱保存。 紙質(zhì)反應(yīng)板表面覆蓋塑料涂層有適當(dāng)?shù)谋砻鎻埩?，如發(fā)生不能均勻地涂布樣品到整個圓圈，應(yīng)更換反應(yīng)板。

16、,試劑耗材－RPR/TRUST反應(yīng)板,血漿中非特異性抗體濃度高于血清，同一個患者血清與血漿的檢測結(jié)果不可直接比較。血漿或血清樣品在4h內(nèi)檢測，可置室溫存放；5個連續(xù)工作日內(nèi)檢測，分離樣品可置2℃～8℃存放；否則應(yīng)置-20℃或更低溫度保存。CSF樣品在4h內(nèi)檢測，可置室溫存放；5個連續(xù)工作日內(nèi)進行檢測，分離樣品可置2℃～8℃保存，不可凍存。,樣本要求,特異性抗體檢測TPPA/TPHA/TP-ELISA/TP-CLIA/TP-RT非

17、特異性抗體檢測RPR/TRUST復(fù)核試驗TPPA,檢測項目,皮膚性病門診 /急診/樣本量少的基層實驗室特異性試驗（TP-RT/TP-CLIA）與非特異性試驗（RPR/TRUST）同時做，異常結(jié)果時用另一種特異性試驗復(fù)核（TPPA）；入院檢查 /術(shù)前篩查/樣本量大的實驗室特異性試驗（TP-ELISA/TP-CLIA）陽性做非特異性試驗（RPR/TRUST）和滴度，異常結(jié)果時用另一種特異性試驗復(fù)核（TPPA）；,※ 異常結(jié)果指

18、非既往感染的單陽和或弱陽性※ 結(jié)果報告時需注明檢測方法,檢測流程,室內(nèi)質(zhì)控－質(zhì)控品,,梅毒非特異性抗體檢測（1:4-1:8為宜）RPR、TRUST：800mIU/ml（建議自配）；梅毒特異性抗體檢測（陰性和弱陽性）TPPA：80mIU/ml；TP-RT：12mIU/ml；ELISA/CLIA：（S/CO ＝2～4） 3mIU/ml、6mIU/ml 、12mIU/ml、21mIU/ml ；,室內(nèi)質(zhì)控－質(zhì)控頻率,工作日

19、RPR、TRUST、TPPA、TP-RT、CLIA（管式）工作批次ELISA 、CLIA（板式）,室內(nèi)質(zhì)控－質(zhì)控規(guī)則,梅毒非特異性抗體檢測半定量：靶值 ±1個滴度范圍；梅毒特異性抗體檢測ELISA/CLIA：陰陽性與靶值結(jié)果一致，CV＜20%；TP－RT：陰陽性與靶值結(jié)果一致；,室間質(zhì)評－組織單位,國家衛(wèi)計委臨床檢驗中心梅毒特異性抗體和梅毒非特異性抗體（定性）；省臨床檢驗中心梅毒特異性抗體（術(shù)前四項飛行

20、檢查）；梅毒特異性抗體和梅毒非特異性抗體（半定量）；,檢測結(jié)果 TRUST：1:64陽性 TP-CLIA：陽性檢驗報告 甲苯胺紅不加熱血清試驗/梅毒非特異性抗體檢測（TRUST）：1:64陽性 梅毒特異性抗體檢測（CLIA）：陽性/陽性（S/CO）,檢驗報告－陽性報告示例一,原則：注明檢測方法如實報告。,檢測結(jié)果 RPR： 陰性 TP-ELISA：陰性檢驗報告

21、 快速血漿反應(yīng)素試驗/梅毒非特異性抗體檢測（RPR）：陰性 梅毒特異性抗體檢測（ELISA）：陰性,檢驗報告－陰性報告示例一,檢測結(jié)果 RPR： 陰性 TP-ELISA：陽性 TPPA：陰性檢驗報告 快速血漿反應(yīng)素試驗/梅毒非特異性抗體檢測（RPR）：陰性 梅毒特異性抗體檢測（ELISA）：陽性 梅毒特異性抗體檢測（TPPA）：陰性,,檢驗報告－陰性報告示例二,備

22、注欄：建議隨訪。,梅毒血清定值質(zhì)控品,,,注：TRUST（榮盛）；RT（新創(chuàng)）；ELISA（萬泰）；CLIA（羅氏）,,注明檢測方法提出隨訪建議,淋病,淋病,淋?。╣onorrhoea）是一種經(jīng)典的性傳播疾病 ， 由淋病奈瑟菌（淋球菌）感染所致，主要表現(xiàn)為泌尿生殖系統(tǒng)黏膜的化膿性炎癥。,約50％女性感染者無明顯癥狀,淋病奈瑟菌革蘭陰性雙球菌、呈腎型、凹面相對、成雙排列，可有莢膜和菌毛。營養(yǎng)要求高（濕潤，35－36℃，5% CO2，

23、pH 6.5－7.5）對外界抵抗力極弱（干燥環(huán)境存活1－2小時，50℃ 5分鐘殺滅，100℃即刻死亡）。,淋病奈瑟菌,樣本,淋球菌的易感細胞是柱狀上皮細胞。對其同一患者行多部位取材可增加檢出陽性率。男性取材前兩小時不應(yīng)排尿。避免使用對淋球菌生長有抑制作用的防腐劑和潤滑劑。,涂片革蘭染色淋球菌培養(yǎng)淋球菌核酸檢測淋球菌抗原檢測淋球菌快速檢測,實驗室診斷方法,涂片革蘭染色,原理淋病奈瑟菌感染者常有黃色膿性分泌物，取分泌物作涂

24、片，革蘭染色后，在顯微鏡下可見到多形核白細胞內(nèi)或周圍有革蘭染色陰性的雙球菌。注意事項只做描述性報告，注明“胞內(nèi)/胞外”，多形核白細胞和雜菌也應(yīng)報告。,男性淋菌性尿道炎的尿道標(biāo)本敏感性及特異性可高達95%～99%，具診斷價值。宮頸標(biāo)本、無癥狀男性尿拭子及取自直腸的涂片時敏感性僅40～70%。不推薦直接顯微鏡檢查診斷直腸和咽部，以及女性宮頸淋球菌感染。不能用于療后判愈。如果在多形核細胞外見到形態(tài)典型的革蘭陰性雙球菌，需做培養(yǎng)進行

25、確認。,臨床應(yīng)用,淋球菌涂片只能確診男性淋菌性尿道炎,男性尿道分泌物涂片,結(jié)果報告及臨床處置（一）,實驗室：“白細胞3+”“細胞內(nèi)外找到革蘭陰性雙球菌”臨床：結(jié)合流行病學(xué)史和臨床表現(xiàn)診斷淋菌性尿道炎,男性尿道分泌物涂片,結(jié)果報告及臨床處置（二）,實驗室：“白細胞3+”“細胞外找到革蘭陰性雙球菌”臨床：進一步做淋球菌培養(yǎng)或核酸檢測確診。,女性宮頸分泌物涂片,結(jié)果報告及臨床處置（三）,實驗室：“細胞內(nèi)找到革蘭陰性雙

26、球菌”“白細胞3+”“雜菌2+”臨床：進一步做淋球菌培養(yǎng)或核酸檢測確診。,淋球菌培養(yǎng),原理淋球菌可在營養(yǎng)豐富的培養(yǎng)基上及合適的環(huán)境下生長成有一定特征的菌落，鑒定后如為淋病奈瑟菌可作為淋病診斷的主要依據(jù)。,培養(yǎng)基,應(yīng)使用營養(yǎng)豐富的選擇性培養(yǎng)基,VCNT選擇添加劑：萬古霉素、多粘菌素、三甲氧芐胺嘧啶和制霉菌素。,培養(yǎng)基,,培養(yǎng)基,TM,MTM,淋球菌培養(yǎng),培養(yǎng)基應(yīng)使用營養(yǎng)豐富的選擇性培養(yǎng)基（TM/改良TM）標(biāo)本接種取材盡

27、早接種，如要轉(zhuǎn)運需接種到運送培養(yǎng)基中。應(yīng)盡快接種于事先預(yù)溫的培養(yǎng)基中。培養(yǎng)環(huán)境35－36℃、5%－10%CO2、濕潤（濕度70%）,菌落特征,生長24h時直徑大約為0.5－1mm，呈圓形、凸起、 濕潤、光滑、半透明或灰白色菌落，通常有黏性。培養(yǎng)48h后菌落直徑可達3mm，邊緣平滑或呈鋸齒狀，表面粗糙。培養(yǎng)24h后檢查平皿，此時沒有菌生長的平皿應(yīng)繼續(xù)培養(yǎng)至48h，仍無菌生長才可丟棄，作為淋球菌培養(yǎng)陰性的報告。,鏡下形態(tài),挑取菌落

28、革蘭染色后鏡檢油鏡下可見革蘭陰性、腎形、凹面相對、成雙排列，部分呈單球、四聯(lián)或八疊形。超過48小時的菌落，淋球菌會出現(xiàn)自溶現(xiàn)象。,氧化酶試驗,原理淋球菌具有氧化酶，能將氧化酶試劑氧化成醌類化合物，出現(xiàn)顏色反應(yīng)。鹽酸二甲基對苯二胺（紫紅色），鹽酸四甲基對苯二胺（紫蘭色）即為陽性反應(yīng)。注意事項試劑應(yīng)新鮮配置，避光冷藏保存。氧化酶試驗非特異性反應(yīng)，所有奈瑟菌屬細菌及許多其他細菌，包括多數(shù)弧菌、布氏菌屬、綠膿桿菌及嗜血桿菌屬等氧化酶

29、反應(yīng)亦呈陽性。如氧化酶陰性，一般可排除淋球菌。氧化酶試劑對細菌有毒性，可迅速殺死淋球菌，需保留菌株時不要將試劑滴于菌落上。,糖發(fā)酵試驗,原理利用淋球菌僅發(fā)酵葡萄糖，不發(fā)酵其他糖類的生物學(xué)特性。注意事項用于試驗的糖類純度要高，至少為分析純級。菌懸液濃度要足夠高。 待測菌應(yīng)為純培養(yǎng)物，不能用選擇性培養(yǎng)基上的初代分離菌，避免因雜菌污染導(dǎo)致假陽性。應(yīng)用18-24h培養(yǎng)物，超過48h淋 球菌過老自溶會導(dǎo)致假陰性反應(yīng)。,糖發(fā)

30、酵試驗,臨床應(yīng)用選擇性培養(yǎng)基上分離出的氧化酶陽性、革蘭陰性的雙球菌，若糖發(fā)酵試驗陽性可確定為淋球菌。糖發(fā)酵試驗的特異性為99－100%，某些淋球菌菌株反應(yīng)弱，可呈現(xiàn)陰性葡萄糖反應(yīng)，需用另外的試驗加以鑒定。麥芽糖陰性的腦膜炎球菌也會被誤鑒定為淋球菌。,淋球菌培養(yǎng)臨床應(yīng)用,世界衛(wèi)生組織推薦診斷淋病的金標(biāo)準，特異性100%，敏感性81-100%；可發(fā)現(xiàn)無癥狀淋球菌感染患者；可用于進一步做藥敏試驗；可用于治療后的判愈試驗，淋球菌培養(yǎng)

31、法判愈應(yīng)在治療結(jié)束5日后進行，對于取自泌尿生殖道的標(biāo)本，在選擇性培養(yǎng)基上分離出氧化酶陽性的革蘭陰性雙球菌，一般可診斷為淋球菌，準確性98%。對于菌落形態(tài)不典型的分離株，泌尿生殖道以外部位的標(biāo)本，來自低危人群（如兒童）的分離株，涉及醫(yī)療法律案例的分離株，應(yīng)對培養(yǎng)的菌株經(jīng)糖發(fā)酵等確證試驗進一步鑒定。,對女性淋病、直腸、咽部淋球菌感染的診斷應(yīng)做培養(yǎng),不依賴活的病原體存在，有極高的敏感性和特異性；下列情況有明顯優(yōu)勢： 慢性淋病、

32、非典型感染、女性隱性感染 使用抗生素之后 某些直腸、咽拭子樣本 尿液等非侵入性樣本,淋球菌核酸檢測,用于臨床判愈應(yīng)在治療結(jié)束三周后進行,簡便、快速；敏感性有賴于采樣質(zhì)量；特異性低，檢測陽性需進一步采用培養(yǎng)或核酸檢測進行確診；,抗原檢測,目前國外沒有商品化抗原檢測試劑,快速檢測,,主要基于氧化酶和觸酶試驗原理，特異性不足。,涂片革蘭染色淋球菌培養(yǎng)淋球菌核酸檢測淋球菌抗原檢測 ——有待完善，陽性標(biāo)本需

33、確證。淋球菌快速檢測（氧化酶、觸酶）——特異性存在問題，不建議。,實驗室診斷方法,涂片革蘭染色淋球菌培養(yǎng)淋球菌核酸檢測淋球菌抗原檢測 ——有待完善，陽性標(biāo)本需確證。淋球菌快速檢測（氧化酶、觸酶）——特異性存在問題，不建議。,實驗室診斷方法,生殖道沙眼衣原體感染,定義,由沙眼衣原體引起的以生殖道部位炎癥為主要表現(xiàn)的性傳播疾病，包括無癥狀沙眼衣原體感染者和患者兩類。無癥狀感染者 無臨床表現(xiàn)，僅實驗室檢查陽性?；颊?

34、 生殖道癥狀體征，且實驗室檢查陽性。,沙眼衣原體所致疾病,70%的女性和50%的男性為無癥狀感染； 導(dǎo)致不育和女性異位妊娠的重要因素；,衣原體的生物學(xué)特征,原核細胞型微生物，比病毒大但比細菌小，光學(xué)顯微鏡可見；有細胞壁結(jié)構(gòu)，革蘭染色陰性，對多種抗生素敏感；具有DNA和RNA兩種遺傳物質(zhì)；不能產(chǎn)生ATP，嚴格細胞內(nèi)寄生，依靠宿主細胞提供能量；有獨特發(fā)育周期：原體（EB）、始體/網(wǎng)狀體（RB）；,衣原體的生活周期,不規(guī)范使用抗生

35、素，營養(yǎng)物質(zhì)缺乏（色氨酸、鐵元素），病毒感染（HSV2型等）易透發(fā)體積變大、形態(tài)異常、停止分裂、活性降低的畸形網(wǎng)狀體及體積變小的包涵體（異型包涵體）導(dǎo)致沙眼衣原體持續(xù)感染狀態(tài)。,根據(jù)沙眼衣原體主要外膜蛋白抗原表位氨基酸序列差異分為19個血清型。,沙眼衣原體的分型,實驗室檢測方法,顯微鏡檢查抗原檢測（免疫層析試驗、酶聯(lián)免疫法、直接免疫熒光法）培養(yǎng)法核酸檢測抗體檢測,實驗室檢測方法－顯微鏡檢查,原理：沙眼衣原體在宿主細胞中增殖，形

36、成包涵體，姬姆薩染色后，鏡下可見藍紫色包涵體。眼部感染：敏感性95％ 男性尿道：敏感性15％ 宮頸感染：敏感性41％,不適合泌尿生殖道標(biāo)本的檢測，主要用于新生兒結(jié)膜刮片診斷新生兒眼結(jié)膜炎。,快速免疫層析法（屬特異性抗原LPS）酶聯(lián)免疫法（屬特異性抗原LPS）直接免疫熒光法（種特異性抗原MOMP）,實驗室檢測方法－抗原檢測,抗原檢測,目前酶聯(lián)免疫法和直接免疫熒光法無CFDA注冊試劑,快速免疫層析法（屬特異性抗原LPS）

37、酶聯(lián)免疫法（屬特異性抗原LPS）直接免疫熒光法（種特異性抗原MOMP）,實驗室檢測方法－抗原檢測,敏感性普遍不高，易造成漏檢； 低危人群結(jié)果謹慎解釋；,實驗室檢測方法－ 抗原檢測,,原理：通過細胞培養(yǎng)（McCoy、Hela229、BHK-21）為沙眼衣原體提供適宜生長條件，沙眼衣原體的原體吸附、侵入宿主細胞發(fā)育成始體并增殖成包涵體，染色后鏡檢，碘染色見包涵體，熒光單抗染色見原體。,實驗室檢測方法－培養(yǎng)法,實驗室檢測方法－培養(yǎng)

38、法,臨床應(yīng)用特異性100%，診斷和鑒定沙眼衣原體感染的“金標(biāo)準”方法；主要用于沙眼衣原體感染的確證、方法學(xué)評價和科研。局限性對實驗室及技術(shù)要求高；敏感性70～90%，陰性不能排除沙眼 衣原體感染；,實驗室檢測方法－核酸檢測,原理：通過擴增沙眼衣原體的特異性基因來檢測病原體，靶基因主要有隱蔽性質(zhì)粒、主要外膜蛋白基因（omp1）、16S rRNA。每個衣原體只有一個omp1基因，特異性高。每個衣原體有7 ～10個

39、拷貝的隱蔽性質(zhì)粒，敏感性好。16S rRNA的數(shù)量與衣原體的繁殖及活躍程度相關(guān)。主要方法：聚合酶鏈反應(yīng)（PCR）連接酶鏈反應(yīng)（LCR）鏈置換擴增技術(shù)（SDA）轉(zhuǎn)錄介導(dǎo)擴增技術(shù)（TMA）實時熒光PCR（real-time PCR）,臨床應(yīng)用：敏感性90 ～ 97％，特異性99～100％ ；被世界衛(wèi)生組織譽為擴大的生殖道沙眼衣原體感染實驗室診斷的“金標(biāo)準”；局限性：實驗室條件和技術(shù)要求高；靶部位發(fā)生變異或缺失，易導(dǎo)致

40、假陰性結(jié)果，應(yīng)以兩處基因序列為靶部位；,實驗室檢測方法－核酸檢測,國際上核酸檢測試劑的引物及擴增方法,,核酸檢測,抗體產(chǎn)生時間較晚，滴度較低；高危人群因重復(fù)感染有較高的基礎(chǔ)抗體；對診斷無并發(fā)癥的生殖道感染價值不大，但在輸卵管炎或盆腔炎性疾病時血清抗體可明顯升高，但無法證明與生殖道沙眼衣原體感染直接相關(guān)；新生兒衣原體肺炎中沙眼衣原體IgM抗體滴度升高有診斷意義；抗體滴度升高，結(jié)合臨床表現(xiàn)對性病淋巴肉芽腫有診斷意義，但此病在我國罕見

41、。,抗體檢測,沙眼衣原體實驗室檢測現(xiàn)狀,顯微鏡檢查抗原檢測（免疫層析試驗、酶聯(lián)免疫法、直接免疫熒光法）培養(yǎng)法核酸檢測抗體檢測,適用于新生兒衣原體性結(jié)膜炎,無CFDA注冊試劑,技術(shù)要求高，費時,生殖道感染意義不大,沙眼衣原體實驗室檢測現(xiàn)狀,顯微鏡檢查抗原檢測（免疫層析試驗、酶聯(lián)免疫法、直接免疫熒光法）培養(yǎng)法核酸檢測抗體檢測,沙眼衣原體實驗室檢測策略,臨床癥狀典型患者/高危人群（女性）→抗原檢測（免疫層析試驗）、核酸檢測無

42、癥狀感染者篩查/低危人群 →核酸檢測,生殖器皰疹,生殖器皰疹,由單純皰疹病毒感染生殖器與肛門及其周圍部位皮膚黏膜，以疼痛性水皰及淺表潰瘍?yōu)橹饕卣鞯囊环N慢性復(fù)發(fā)性性傳播疾病。 初發(fā)性生殖器皰疹 原發(fā)感染初發(fā)性生殖器皰疹（單純皰疹病毒首次感染臨床癥狀首次發(fā)作。） 非原發(fā)感染初發(fā)性生殖器皰疹（既往有單純皰疹病毒感染，再次感染另一型別后臨床癥狀首次發(fā)作。）復(fù)發(fā)性生殖器皰疹 生殖器皰疹臨床癥狀首次發(fā)作消退后再次

43、發(fā)作。（單純皰疹病毒2型感染的復(fù)發(fā)頻率高于1型。）,診斷報告標(biāo)準,臨床診斷病例 符合臨床表現(xiàn) 有或無流行病學(xué)史及抗體檢測確診病例 符合臨床診斷病例 符合實驗室檢查任一項（病毒培養(yǎng)/抗原檢測/核酸檢測）,單純皰疹病毒（HSV）,皰疹病毒科、皰疹病毒亞科、單純病毒屬的雙鏈DNA病毒，核殼由脂質(zhì)糖蛋白包裹，具有嗜神經(jīng)組織特性。 根據(jù)單純皰疹病毒包膜糖蛋白G（gG）的抗原性不同分為HSV-1和HSV-2兩種

44、血清型，其基因組同源序列約為50%。HSV-2主要侵犯生殖器與肛門及其周圍部位，HSV 1主要侵犯面部，也可侵犯生殖器與肛門及其周圍部位。,病原學(xué)檢測 病毒培養(yǎng)（傳統(tǒng)“金標(biāo)準”） 抗原檢測（DFA、IFA、ELISA） 核酸檢測 血清學(xué)檢測 HSV-2型抗體檢測（ELISA）,生殖器皰疹的實驗室診斷方法,病原學(xué)檢測 病毒培養(yǎng)（傳統(tǒng)“金標(biāo)準”） 抗原檢測（DFA、IFA、ELI

45、SA） 核酸檢測 血清學(xué)檢測 HSV-2型抗體檢測（ELISA）,生殖器皰疹的實驗室診斷方法,單純皰疹病毒核酸檢測,具有高的敏感性和特異性；實驗室要求高；臨床應(yīng)用廣泛，可分型，檢測HSV-2居多；檢測潰瘍、皰液或生殖道分泌物等樣本，適用于癥狀明顯的現(xiàn)癥患者。,單純皰疹病毒抗體檢測,目前實驗室最常用的方法；可區(qū)分HSV-1和HSV-2感染，可分別測定IgM和IgG抗體；診斷疑似患者或非皰疹期感染者；

46、輔助診斷生殖器皰疹，應(yīng)結(jié)合流行病學(xué)史臨床表現(xiàn)綜合判斷；具有典型臨床表現(xiàn)者，HSV-2型特異性血清抗體檢測陽性，有診斷價值。 型特異性抗體的檢測可用于區(qū)分初發(fā)性生殖器皰疹是原發(fā)感染還是非原發(fā)感染；,試劑質(zhì)量參差不齊,單純皰疹病毒抗體檢測的臨床應(yīng)用,生殖器皰疹的實驗室檢測策略,有皮損（現(xiàn)癥者或活動期） 病毒培養(yǎng) 抗原檢測（DFA、IFA、ELISA） 核酸檢測無皮損（既往感染或亞臨床感染篩查） 抗體檢測

47、（ELISA ）,尖銳濕疣,尖銳濕疣是由人乳頭瘤病毒（HPV）感染引起的皮膚粘膜良性增生性性傳播疾病，主要侵犯生殖器、會陰和肛門等部位。,尖銳濕疣,一種微小的DNA病毒，病毒顆粒是立體對稱的20面體，由72個殼微粒組成，宿主細胞為人類皮膚粘膜的鱗狀上皮細胞。HPV分型的主要依據(jù)是高度保守的L1ORF基因中的291-bp片段的序列，目前發(fā)現(xiàn)的有201個基因型 。70%的宮頸癌為HPV16/18感染，90%的生殖器疣為HPV6/11感染