體外診斷試劑臨床研究講義

1、體外診斷試劑的臨床研究,,體外診斷試劑的種類,化學(xué)或生化檢測(cè)試劑免疫學(xué)檢測(cè)試劑抗原檢測(cè)抗體檢測(cè)核酸檢測(cè)試劑核酸雜交技術(shù)核酸擴(kuò)增技術(shù)其他試劑,臨床研究的意義以及目的,臨床前樣品雖有代表性，但數(shù)量畢竟有限并不能完全代表臨床情況通過(guò)臨床試驗(yàn)對(duì)臨床前制定的各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行修正可以發(fā)現(xiàn)或預(yù)測(cè)在實(shí)際應(yīng)用中遇到的問(wèn)題，在說(shuō)明書中提醒用戶注意,臨床研究的基本要求,倫理考慮對(duì)研究對(duì)象保密臨床前研究結(jié)果,臨床研究的基本要求,倫理考慮

2、 應(yīng)考慮樣本的獲得以及對(duì)受試者的風(fēng)險(xiǎn)，如樣本涉及到羊水、組織切片等，需要提交倫理委員會(huì)審查意見(jiàn)及知情同意書。,對(duì)臨床研究單位以及人員的要求,從事相應(yīng)的工作具有相應(yīng)的技術(shù)人員有相應(yīng)的儀器設(shè)備 如果試劑對(duì)儀器無(wú)特殊要求，則應(yīng)選擇不同品牌或不同型號(hào)有不同專業(yè)人員參加至少兩家省級(jí)單位對(duì)實(shí)施實(shí)驗(yàn)單位的能力進(jìn)行評(píng)價(jià) 指綜合能力包括檢測(cè)能力、儀器設(shè)備和人員等,主要檢測(cè)盲樣，符合要求這方能參與,對(duì)照方法或試劑的要求

3、,新診斷試劑疾病癥狀以及臨床診斷相關(guān)試劑研究對(duì)象的追蹤隨訪疾病的判斷標(biāo)準(zhǔn)已有同類產(chǎn)品的試劑 可選擇同類試劑; 若評(píng)價(jià)試劑所用的原料為基因工程產(chǎn)品，應(yīng)用非基因工程 原料制備的試劑進(jìn)行評(píng)價(jià)；對(duì)結(jié)果不一致樣品的處理,臨床樣品的選擇,人群: 根據(jù)試劑的適應(yīng)癥選擇不同的人群樣品: 應(yīng)為自然人群，尚未用同類試劑進(jìn)行篩查過(guò)選擇不同地區(qū): 代表被測(cè)物的不同流行率，代表被測(cè)物的不同基因型或血清型疾病的時(shí)期: 樣品

4、的數(shù)量:,檢測(cè)方法,盲法平行檢測(cè)結(jié)果不一致樣品的進(jìn)一步分析,診斷試劑的臨床評(píng)價(jià)指標(biāo),靈敏度 （Sensitivity）：在陽(yáng)性樣品中檢出陽(yáng)性樣品的百分比特異性（Specificity）：在陰性樣品中檢出陰性樣品的百分比樣品分布 (eg. STDEV; ? ) Suitability of cut-off陰性預(yù)期值 (NPV)：若樣品沒(méi)有反應(yīng)，則不含檢測(cè)物的可能性陽(yáng)性預(yù)期值 (PPV)：若樣品有反應(yīng)，則含檢測(cè)物體的可能性

5、重復(fù)性（Reproducibility）準(zhǔn)確性（Accuracy) 精確性 (Precision）,靈敏度,定義：試劑的檢測(cè)限度方法：檢測(cè)一定數(shù)量的陰性樣品，計(jì)算均值和標(biāo)準(zhǔn)差 均值和標(biāo)準(zhǔn)差，臨界值等于均值加上2個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差意義：在臨界值以上的樣品有95%為真陽(yáng)性 臨界值的評(píng)估：檢測(cè)一系列正常人群、非正常人群和特殊人群對(duì)臨界值進(jìn)行核對(duì)表示方法：以量值表示（如ng，單位，CFU/ml，PFU/ml

6、，拷貝數(shù)等）；以稀釋度表示,影響靈敏度的因素,特殊疾病 有一些特殊的病人，其代謝異?？赡苡绊憳?biāo)志物的檢測(cè)干擾物質(zhì)或抑制物質(zhì) 可以來(lái)自與病人（藥物）；也可來(lái)自于樣品的處理過(guò)程（反復(fù)凍融，溶血等）；或樣品本身存在抑制物等樣品基因型和血清型的影響 有些被測(cè)物存在多種基因型或血清型，若原材料沒(méi)有廣譜性，則可影響靈敏度試劑的灰區(qū)： 對(duì)特殊的試劑要制定灰區(qū)，如FDA要求HCV抗體試劑臨界值以上均為灰區(qū)，

7、對(duì)灰區(qū)樣品要加倍重試,特異性,定義：主要指假陽(yáng)性的檢出情況評(píng)價(jià)方法：主要是通過(guò)檢測(cè)部分樣品，或特殊樣品尤其是性質(zhì)相近的標(biāo)志物（如不同基因型或血清型樣品），分析出現(xiàn)假陽(yáng)性的情況；而且分析時(shí)要注意在不同量時(shí)的特異性,造成非特異性的因素,原料：主要純度不夠，原料本身存在非特異反應(yīng) 物質(zhì)反應(yīng)模式：如孵育時(shí)間縮短非特異反應(yīng)可提高 3-4倍，非常短時(shí)可高達(dá)10倍樣品中的干擾物質(zhì)：病人本身：如自身免疫性

8、疾?。ǜ呙庖咔虻鞍籽Y等），黃疸類、溶血類和高脂類病人病人使用特殊藥物樣品處理過(guò)程：如不同抗凝劑，不同試管，某些 化學(xué)或去污劑以及樣品反復(fù)凍融等因素,核酸檢測(cè)中造成非特異性的因素,交叉反應(yīng)：主要是引物序列與被測(cè)物中序列存在一定程度的同源性樣品之間的污染：氣溶膠中含有目的微生物，對(duì)照的污染等擴(kuò)增產(chǎn)物的污染：擴(kuò)增產(chǎn)物聚集在器皿、臺(tái)面、設(shè)備以及通風(fēng)設(shè)施上等造成污染,污染的處理,酶的滅活（UNG） 主要用于滅活產(chǎn)物光化學(xué)處理 用可溶

9、性psoralen的衍生物處理，在用長(zhǎng)紫外照射 即可滅活產(chǎn)物、也可減少樣品的污染化學(xué)處理方法 用于表面的處理 10%次氯酸鈉 紫外照射物理的: 專用移液器、一次性試管架、紫外燈、PCR工作罩、濾芯吸嘴。,精確性(Precision),作用：評(píng)價(jià)試劑的隨機(jī)誤差通過(guò)重復(fù)檢測(cè)某一或某些特定樣品并分析其一致性，通常以變異系數(shù)或相對(duì)標(biāo)準(zhǔn)誤來(lái)表示樣品的要求：最好應(yīng)含有高、中、低三類每一類樣品至少檢測(cè)4次，實(shí)際上檢測(cè)10次或10次以

10、上,準(zhǔn)確性（accuracy),主要評(píng)價(jià)試劑的系統(tǒng)誤差，反映樣品的檢測(cè)值和真實(shí)值的一致性表示方法： 偏差（%）=（檢測(cè)值-真實(shí)值）X100/真實(shí)值評(píng)價(jià)方法： 1.在某一樣品中加上已知量的檢測(cè)物重復(fù)檢測(cè)，計(jì)算檢測(cè)值與預(yù)期值的偏差 2.檢測(cè)已知量的參考品，計(jì)算檢測(cè)量與標(biāo)化量的偏差,定量范圍,定義：能夠給出準(zhǔn)確量值的范圍建立的方法：主要對(duì)系列稀釋樣品的反復(fù)檢測(cè) 制定的定量曲

11、線：線性或非線性要求：對(duì)定量范圍的上限和下限樣品進(jìn)行檢測(cè) 時(shí)，其精確性仍能符合要求,重復(fù)性（Reproducibility）,不同實(shí)驗(yàn)次數(shù)之間（Run-run）不同實(shí)驗(yàn)室之間（Site-site）不同實(shí)驗(yàn)人員之間（Operator-operator）不同時(shí)間之間（Day-day）特殊情況下的重復(fù)性,定量試劑的特殊要求,樣品所含被測(cè)物的量應(yīng)該分散應(yīng)含有在最高和最低檢測(cè)限的樣品與參比試劑的檢測(cè)結(jié)果