體外診斷試劑臨床研究講義

1、體外診斷試劑的臨床研究,,體外診斷試劑的種類,化學(xué)或生化檢測試劑免疫學(xué)檢測試劑抗原檢測抗體檢測核酸檢測試劑核酸雜交技術(shù)核酸擴(kuò)增技術(shù)其他試劑,臨床研究的意義以及目的,臨床前樣品雖有代表性，但數(shù)量畢竟有限并不能完全代表臨床情況通過臨床試驗(yàn)對臨床前制定的各項(xiàng)指標(biāo)進(jìn)行修正可以發(fā)現(xiàn)或預(yù)測在實(shí)際應(yīng)用中遇到的問題，在說明書中提醒用戶注意,臨床研究的基本要求,倫理考慮對研究對象保密臨床前研究結(jié)果,臨床研究的基本要求,倫理考慮

2、 應(yīng)考慮樣本的獲得以及對受試者的風(fēng)險(xiǎn)，如樣本涉及到羊水、組織切片等，需要提交倫理委員會(huì)審查意見及知情同意書。,對臨床研究單位以及人員的要求,從事相應(yīng)的工作具有相應(yīng)的技術(shù)人員有相應(yīng)的儀器設(shè)備 如果試劑對儀器無特殊要求，則應(yīng)選擇不同品牌或不同型號(hào)有不同專業(yè)人員參加至少兩家省級(jí)單位對實(shí)施實(shí)驗(yàn)單位的能力進(jìn)行評價(jià) 指綜合能力包括檢測能力、儀器設(shè)備和人員等,主要檢測盲樣，符合要求這方能參與,對照方法或試劑的要求

3、,新診斷試劑疾病癥狀以及臨床診斷相關(guān)試劑研究對象的追蹤隨訪疾病的判斷標(biāo)準(zhǔn)已有同類產(chǎn)品的試劑 可選擇同類試劑; 若評價(jià)試劑所用的原料為基因工程產(chǎn)品，應(yīng)用非基因工程 原料制備的試劑進(jìn)行評價(jià)；對結(jié)果不一致樣品的處理,臨床樣品的選擇,人群: 根據(jù)試劑的適應(yīng)癥選擇不同的人群樣品: 應(yīng)為自然人群，尚未用同類試劑進(jìn)行篩查過選擇不同地區(qū): 代表被測物的不同流行率，代表被測物的不同基因型或血清型疾病的時(shí)期: 樣品

4、的數(shù)量:,檢測方法,盲法平行檢測結(jié)果不一致樣品的進(jìn)一步分析,診斷試劑的臨床評價(jià)指標(biāo),靈敏度 （Sensitivity）：在陽性樣品中檢出陽性樣品的百分比特異性（Specificity）：在陰性樣品中檢出陰性樣品的百分比樣品分布 (eg. STDEV; ? ) Suitability of cut-off陰性預(yù)期值 (NPV)：若樣品沒有反應(yīng)，則不含檢測物的可能性陽性預(yù)期值 (PPV)：若樣品有反應(yīng)，則含檢測物體的可能性

5、重復(fù)性（Reproducibility）準(zhǔn)確性（Accuracy) 精確性 (Precision）,靈敏度,定義：試劑的檢測限度方法：檢測一定數(shù)量的陰性樣品，計(jì)算均值和標(biāo)準(zhǔn)差 均值和標(biāo)準(zhǔn)差，臨界值等于均值加上2個(gè)標(biāo)準(zhǔn)差意義：在臨界值以上的樣品有95%為真陽性 臨界值的評估：檢測一系列正常人群、非正常人群和特殊人群對臨界值進(jìn)行核對表示方法：以量值表示（如ng，單位，CFU/ml，PFU/ml

6、，拷貝數(shù)等）；以稀釋度表示,影響靈敏度的因素,特殊疾病 有一些特殊的病人，其代謝異?？赡苡绊憳?biāo)志物的檢測干擾物質(zhì)或抑制物質(zhì) 可以來自與病人（藥物）；也可來自于樣品的處理過程（反復(fù)凍融，溶血等）；或樣品本身存在抑制物等樣品基因型和血清型的影響 有些被測物存在多種基因型或血清型，若原材料沒有廣譜性，則可影響靈敏度試劑的灰區(qū)： 對特殊的試劑要制定灰區(qū)，如FDA要求HCV抗體試劑臨界值以上均為灰區(qū)，

7、對灰區(qū)樣品要加倍重試,特異性,定義：主要指假陽性的檢出情況評價(jià)方法：主要是通過檢測部分樣品，或特殊樣品尤其是性質(zhì)相近的標(biāo)志物（如不同基因型或血清型樣品），分析出現(xiàn)假陽性的情況；而且分析時(shí)要注意在不同量時(shí)的特異性,造成非特異性的因素,原料：主要純度不夠，原料本身存在非特異反應(yīng) 物質(zhì)反應(yīng)模式：如孵育時(shí)間縮短非特異反應(yīng)可提高 3-4倍，非常短時(shí)可高達(dá)10倍樣品中的干擾物質(zhì)：病人本身：如自身免疫性

8、疾?。ǜ呙庖咔虻鞍籽Y等），黃疸類、溶血類和高脂類病人病人使用特殊藥物樣品處理過程：如不同抗凝劑，不同試管，某些 化學(xué)或去污劑以及樣品反復(fù)凍融等因素,核酸檢測中造成非特異性的因素,交叉反應(yīng)：主要是引物序列與被測物中序列存在一定程度的同源性樣品之間的污染：氣溶膠中含有目的微生物，對照的污染等擴(kuò)增產(chǎn)物的污染：擴(kuò)增產(chǎn)物聚集在器皿、臺(tái)面、設(shè)備以及通風(fēng)設(shè)施上等造成污染,污染的處理,酶的滅活（UNG） 主要用于滅活產(chǎn)物光化學(xué)處理 用可溶

9、性psoralen的衍生物處理，在用長紫外照射 即可滅活產(chǎn)物、也可減少樣品的污染化學(xué)處理方法 用于表面的處理 10%次氯酸鈉 紫外照射物理的: 專用移液器、一次性試管架、紫外燈、PCR工作罩、濾芯吸嘴。,精確性(Precision),作用：評價(jià)試劑的隨機(jī)誤差通過重復(fù)檢測某一或某些特定樣品并分析其一致性，通常以變異系數(shù)或相對標(biāo)準(zhǔn)誤來表示樣品的要求：最好應(yīng)含有高、中、低三類每一類樣品至少檢測4次，實(shí)際上檢測10次或10次以

10、上,準(zhǔn)確性（accuracy),主要評價(jià)試劑的系統(tǒng)誤差，反映樣品的檢測值和真實(shí)值的一致性表示方法： 偏差（%）=（檢測值-真實(shí)值）X100/真實(shí)值評價(jià)方法： 1.在某一樣品中加上已知量的檢測物重復(fù)檢測，計(jì)算檢測值與預(yù)期值的偏差 2.檢測已知量的參考品，計(jì)算檢測量與標(biāo)化量的偏差,定量范圍,定義：能夠給出準(zhǔn)確量值的范圍建立的方法：主要對系列稀釋樣品的反復(fù)檢測 制定的定量曲

11、線：線性或非線性要求：對定量范圍的上限和下限樣品進(jìn)行檢測 時(shí)，其精確性仍能符合要求,重復(fù)性（Reproducibility）,不同實(shí)驗(yàn)次數(shù)之間（Run-run）不同實(shí)驗(yàn)室之間（Site-site）不同實(shí)驗(yàn)人員之間（Operator-operator）不同時(shí)間之間（Day-day）特殊情況下的重復(fù)性,定量試劑的特殊要求,樣品所含被測物的量應(yīng)該分散應(yīng)含有在最高和最低檢測限的樣品與參比試劑的檢測結(jié)果