疫苗基礎(chǔ)知識(shí)與疫苗研制

1、疫苗基礎(chǔ)知識(shí)與疫苗研制,寧波榮安生物藥業(yè)有限公司樂(lè)威,生物制品概念,是以微生物、細(xì)胞、動(dòng)物或人源組織和體液等為原料，應(yīng)用傳統(tǒng)技術(shù)或現(xiàn)代生物技術(shù)制成，用于人類疾病的預(yù)防、治療和診斷。,人用生物制品,細(xì)菌類疫苗（包括類毒素）病毒類疫苗抗毒素及抗血清血液制品細(xì)胞因子生長(zhǎng)因子酶體內(nèi)及體外診斷用品其它生物活性制劑，如變態(tài)反應(yīng)原、抗原抗體復(fù)合物、免疫調(diào)節(jié)劑、微生態(tài)制劑等。,疫苗基礎(chǔ)知識(shí),疫苗（Vaccine）一詞與天花疫苗（牛痘

2、苗）有關(guān)，拉丁文 “vacc”是“?！钡囊馑?。,疫苗基礎(chǔ)知識(shí),與疫苗有關(guān)的三位偉大的科學(xué)家：琴納、巴斯德、科赫。,琴納的貢獻(xiàn),發(fā)明了牛痘疫苗預(yù)防天花,18世紀(jì)50％的兒童活不到10歲，其中40％死于天花。每一塊大陸都曾有數(shù)百萬(wàn)人死于天花。,1979年10月26日世界衛(wèi)生組織宣布：天花已從地球上被徹底消滅。,巴斯德的貢獻(xiàn),發(fā)明了減毒疫苗發(fā)明了狂犬疫苗,巴斯德讓當(dāng)時(shí)被瘋狗咬傷的人的發(fā)病率由20％下降到1％。,科赫的貢獻(xiàn),發(fā)現(xiàn)炭疽桿菌

3、確定傳染病是由微生物引起的,疫苗的作用,預(yù)防疾病流行,如果沒(méi)有疫苗，這世界將會(huì)怎樣……,人口：可能不到10億；平均壽命：可能只有40～45歲；社會(huì)發(fā)展和科學(xué)進(jìn)步速率至少降低一半；每年都會(huì)有各種各樣的疾病流行帶走數(shù)百萬(wàn)甚至上千萬(wàn)人的生命，就好像每年都在進(jìn)行世界大戰(zhàn)，人人生活在死亡的恐懼之中；,治療性疫苗，如腫瘤疫苗、結(jié)核疫苗。,疫苗基礎(chǔ)知識(shí),疫苗不全是預(yù)防性的,疫苗分類,滅活疫苗（細(xì)菌、病毒、立克次體及類毒素）減毒活疫苗（卡介苗、

4、麻疹減毒活疫苗）組分疫苗（流感亞單位疫苗）基因工程疫苗（乙型肝炎疫苗）血清（白喉毒素、破傷風(fēng)毒素）,滅活疫苗,減毒活疫苗,方法：將病原微生物（細(xì)菌或病毒）在人工培育的條件下，促使產(chǎn)生定向變異，使其極大程度地喪失致病性，但仍保留一定的剩余毒力、免疫原性及繁殖能力。細(xì)菌性如：卡介苗（BCG）、炭疽、鼠疫等。病毒性如：麻疹（Mv）、脊髓灰質(zhì)炎（OPV）、流行性腮腺炎、風(fēng)疹、甲型肝炎、黃熱病等。,滅活疫苗和活疫苗比較,疫苗使用基本原則

5、,正確選擇使用疫苗；高素質(zhì)的免疫接種人員；嚴(yán)格掌握免疫程序；認(rèn)真選擇接種對(duì)象；正確掌握禁忌癥；保證冷鏈要求；認(rèn)真檢查使用疫苗。,疫苗接種方法,皮上劃痕法；（炭疽、鼠疫）皮內(nèi)接種法；（卡介苗）皮下接種法；肌肉注射法；靜脈注射法；（抗蛇毒血清、肉毒抗毒素）口服法；（OPV糖丸）無(wú)針注射法；噴鼻法和氣霧噴入法。,疫苗免疫程序的內(nèi)容,免疫初始年齡；必須接種的次數(shù)；針次之間恰當(dāng)?shù)拈g隔時(shí)間；是否需要加強(qiáng)免疫；聯(lián)合免

6、疫的問(wèn)題。,疫苗常見(jiàn)不良反應(yīng),一般反應(yīng)：包括局部反應(yīng)和全身反應(yīng)。 局部反應(yīng)：紅暈、腫脹、疼痛。 全身反應(yīng)：發(fā)熱、頭暈、乏力。異常反應(yīng)：包括非特異性反應(yīng)、精神性反應(yīng)和變態(tài)反應(yīng) 非特異性：化膿。 精神性：暈厥、急性休克。 變態(tài)反應(yīng)：皮疹、過(guò)敏性紫癜、血管神經(jīng)性水腫。,中國(guó)微生物毒力分級(jí),一類：傳染性強(qiáng)，實(shí)驗(yàn)室感染機(jī)會(huì)多，感染后易發(fā)病，發(fā)病后癥狀重，危及生命，缺乏有效防治措施。如鼠疫桿菌、霍亂弧菌、天

7、花病毒、埃波拉病毒。二類：實(shí)驗(yàn)室感染機(jī)會(huì)多，癥狀重，危及生命，不易治療。如炭疽芽孢菌、肉毒梭菌、狂犬病毒、出血熱病毒、登革熱病毒、甲型和乙型肝炎病毒。,中國(guó)微生物毒力分級(jí),三類：僅具一般危害，能控制感染，可有效預(yù)防。如肺炎鏈球菌、百日咳桿菌、破傷風(fēng)梭菌、乙型腦炎病毒、麻疹病毒、風(fēng)疹病毒、狂犬病固定毒。四類：低致病性或經(jīng)人工減毒。如鼠疫、霍亂、麻疹病毒、流行性乙型腦炎、病毒性肝炎。,狂犬病毒街毒和固定毒,街毒：自然條件下可使人或動(dòng)物致

8、死。固定毒：街毒在試驗(yàn)動(dòng)物中傳代，使其致病性減弱，仍保持免疫原性。狂犬病毒街毒為二類病原微生物，固定毒為三類病原微生物。生產(chǎn)用狂犬病毒毒株為狂犬病毒固定毒。,疫苗研制的一般程序,分離病原體并進(jìn)行鑒定；研究機(jī)體免疫反應(yīng)，確定免疫原；致病微生物體外培養(yǎng)研究；根據(jù)需要，研制滅活疫苗或減毒活疫苗，也可以提取有效抗原成分，制成亞單位疫苗；制訂質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，包括檢定方法研究。,人用狂犬病疫苗工藝流程,細(xì)胞復(fù)蘇,,細(xì)胞傳代,,接種病毒,,多

9、次收獲病毒液,,超濾濃縮,,滅活,,,柱層析,離心,,病毒收獲液檢定,病毒滅活檢驗(yàn),配制,,分裝,,包裝,純化液檢定,半成品檢定,成品檢定,中國(guó)狂犬病疫苗發(fā)展簡(jiǎn)史,1980年以前：羊腦疫苗1980年～1995年：原代地鼠腎細(xì)胞疫苗（鋁佐劑）1995年～2000年：濃縮原代地鼠腎細(xì)胞疫苗（鋁佐劑）2000年～2005年：原代地鼠腎細(xì)胞純化疫苗和Vero細(xì)胞純化疫苗（鋁佐劑）2005年至今：原代地鼠腎細(xì)胞純化疫苗和Vero細(xì)胞純化疫

10、苗（無(wú)佐劑）,中國(guó)狂犬病疫苗發(fā)展,安全性,有效性,組織疫苗,細(xì)胞疫苗,純化疫苗,,,1.3IU/劑,2.5IU/劑,4.0IU/劑,,,,無(wú)防腐劑疫苗,,凍干疫苗,現(xiàn)代生物技術(shù)在狂犬病疫苗生產(chǎn)中的應(yīng)用,生物反應(yīng)器細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)膜過(guò)濾技術(shù)膜超濾技術(shù)層析技術(shù)冷凍干燥技術(shù),地鼠腎細(xì)胞疫苗和Vero細(xì)胞疫苗,原代細(xì)胞和傳代細(xì)胞,原代細(xì)胞培養(yǎng)指從體內(nèi)組織取出細(xì)胞摹擬體內(nèi)出現(xiàn)環(huán)境，在無(wú)菌、適當(dāng)溫度及酸堿度和一定營(yíng)養(yǎng)條件下，使其生長(zhǎng)繁殖，并維持

11、其結(jié)構(gòu)和功能 。傳代細(xì)胞系指來(lái)源于腫瘤細(xì)胞或細(xì)胞株傳代過(guò)程中變異的細(xì)胞系 。,細(xì)胞庫(kù),通過(guò)培養(yǎng)細(xì)胞用以生產(chǎn)連續(xù)多批制品的細(xì)胞系統(tǒng)，這些細(xì)胞經(jīng)充分鑒定并證明無(wú)外源因子。細(xì)胞庫(kù)包括原始細(xì)胞庫(kù)、主細(xì)胞庫(kù)和工作細(xì)胞庫(kù)三級(jí)。工作細(xì)胞庫(kù)：由有限傳代水平的主細(xì)胞庫(kù)制備而來(lái)的均一性細(xì)胞懸液，分裝適宜體積于多個(gè)容器中，凍存于－130℃或以下用于生產(chǎn)。,毒種種子批,包括原始種子批、主種子批和工作種子批的已驗(yàn)明其來(lái)源、歷史和生物學(xué)特性并經(jīng)臨床研究證明其安

12、全性和免疫原性的病毒株懸液，該懸液應(yīng)為單一批，以確保其組成均一，并經(jīng)充分鑒定。工作種子批：按國(guó)務(wù)院藥品監(jiān)督管理部門批準(zhǔn)的方法，從主種子批傳代而得到的活病毒均一懸液，等量分裝貯存用于生產(chǎn)疫苗。,三級(jí)庫(kù)管理的必要性,避免混淆保證種子細(xì)胞和毒種的穩(wěn)定性保證生產(chǎn)均一性，減小批間差,Vero細(xì)胞培養(yǎng)方式,靜止培養(yǎng)（克氏瓶）轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng)懸浮培養(yǎng)（載體）,Vero細(xì)胞轉(zhuǎn)瓶傳代,消化液：胰蛋白酶和（或）EDTA傳代比例：1：3～1：6消化時(shí)間

13、：細(xì)胞狀況、消化液濃度、消化液pH值、消化溫度培養(yǎng)液：含8～10％新生牛血清的MEM，pH7.2培養(yǎng)液量：～1500ml/15L瓶培養(yǎng)溫度：37℃,狂犬病毒,子彈狀長(zhǎng)180nm、直徑75nm最大特點(diǎn)之一就是嗜神經(jīng)組織性 G蛋白是其主要表面抗原,病毒接種及收獲,維持液：含0.1％人血白蛋白的MEM，pH7.6培養(yǎng)溫度：33～35℃病毒收獲液檢測(cè)指標(biāo)：無(wú)菌檢查、支原體檢查、病毒滴度,定溫室轉(zhuǎn)瓶培養(yǎng),中間品冷庫(kù),澄清及超濾濃縮

14、,澄清采用不同孔徑的微孔濾膜澄清的目的是降低生物負(fù)荷，去除細(xì)胞碎片等影響超濾過(guò)程的雜質(zhì)，部分去除Vero細(xì)胞蛋白及DNA。超濾采用100K～500K濾膜超濾的目的是濃縮狂犬病毒，降低收獲液體積，去除小分子無(wú)效蛋白，減輕后期處理體積及蛋白壓力。,超濾原理,超濾是一種加壓膜分離技術(shù)，即在一定的壓力下，使小分子溶質(zhì)和溶劑穿過(guò)一定孔徑的特制的薄膜，而使大分子溶質(zhì)不能透過(guò)，留在膜的一邊，從而使大分子物質(zhì)得到了部分的純化。,超濾原理,凝膠過(guò)濾