豬圓環(huán)病毒Ⅱ型核酸疫苗的研制與初步應(yīng)用.pdf_第1頁(yè)
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1、豬Ⅱ型圓環(huán)病毒(PCV2)是引起斷奶仔豬多系統(tǒng)衰竭綜合征(postweaningmultisystemic wasting syndrome, PMWS)的主要病原體。PCV2基因組含有11個(gè)ORF, ORF1相對(duì)保守，主要編碼病毒的復(fù)制蛋白，而ORF2相對(duì)變異較大，是主要的免疫原性基因，能誘導(dǎo)中和抗體的產(chǎn)生。本論文根據(jù)GenBank發(fā)表的PCV2序列設(shè)計(jì)一對(duì)引物，從本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的pEGFP-ORF2質(zhì)粒中提取模版擴(kuò)增PCV-2 ORF

2、2全基因，并以pcDNA3.1(+)為真核表達(dá)載體，構(gòu)建豬圓環(huán)病毒核酸疫苗。將構(gòu)建好的pcDNA3.1(+)-ORF2制成核酸疫苗，按100μg/只腿部肌肉注射免疫Balb/c小白鼠，同時(shí)設(shè)pcDNA3.1(+)空載體，PCV2全毒和PBS為對(duì)照，共免疫2次，間隔2周。分別于首免后第0d、7d、14d、21d和28d采血，用ELISA法檢測(cè)抗體，采用淋巴細(xì)胞增殖試驗(yàn)(MTT法)和流式細(xì)胞儀對(duì)小鼠的細(xì)胞免疫進(jìn)行檢測(cè)。經(jīng)檢測(cè)免疫小鼠的CD3

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