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1、肌酐和血糖的測定,,小組成員:羅鋼 駱旭陽 周浩宇 董思博,實驗一 血糖的測定,血糖及血糖水平的概念:,血糖:指血液中的單糖:葡萄糖,血糖水平:血漿中葡萄糖濃度,血糖總維持在恒定水平: 3.9~6.7mmol/L,調(diào)節(jié)血糖水平的激素:胰島素、胰高血糖素、糖皮質(zhì)激素和腎上腺素。血糖水平異常:⑴高血糖
2、及糖尿??;⑵低血糖,臨床:血糖檢測是目前診斷糖代謝異常相關(guān)疾病的主要依據(jù)??蒲校涸诖x疾病的研究中,常測定血糖。在某些藥物的研究中,也涉及血糖的測定。,測定血糖的意義,,測定方法,無機(jī)化學(xué)法: Folin-Wu法,有機(jī)化學(xué)法:鄰甲苯胺法,酶法:葡萄糖氧化酶法,血糖測定的常用方法,葡萄糖氧化酶-過氧化物酶法原理,(1)葡萄糖+O2+H2O,,(2)H2O2+4-氨基安替吡啉+苯酚,葡萄糖酸+H2O2,葡萄糖氧化酶(GOD),H2O +紅
3、色醌式物質(zhì),,過氧化物酶(POD),,,Trinder反應(yīng),505nm,光吸收法測定,,相對血糖濃度,補(bǔ)充實驗,測2-3名同學(xué)早餐后和空腹血糖的水平,并比較二者之間的區(qū)別。使用怡成JPS-5型血糖儀。,其他常用血糖測定方法介紹,葡萄糖氧化酶-過氧化物酶比色法Folin-Wu法鄰-甲苯胺法,原理 葡萄糖在和堿性銅試劑混合加熱后,可使 Cu2+還原成Cu+ ,后者與磷鉬酸試劑作用生成藍(lán)色的鉬藍(lán)。通過比色法測定藍(lán)色化合物,計算
4、出血糖的含量。評價 穩(wěn)定、準(zhǔn)確、但對葡萄糖無特異性,受血中非糖還 原物質(zhì)的影響??崭拐Q菂⒖贾?4.4~6.7mmol/L或80-120mg/dL,Folin-Wu法,其他常用血糖測定方法介紹,葡萄糖氧化酶-過氧化物酶比色法Folin-Wu法鄰-甲苯胺法,原理 葡萄糖在冰醋酸中加熱脫水后,與鄰-甲苯胺縮合產(chǎn)生藍(lán)綠色的席弗(Schiff)堿,顏色的深淺與葡萄糖含量成正比,可通過比色法測得血糖含量。
5、評價 結(jié)果較可靠、但鄰-甲苯胺須蒸餾后使用,有毒性??崭拐Q菂⒖贾?3.9~6.1mmol/L或70-110mg/dL,鄰-甲苯胺法,,葡萄糖氧化酶法:該法特異性高,反應(yīng)條件溫和,能反映血中葡萄糖的真實含量,且已推廣出試劑盒,廣泛應(yīng)用與臨床。 Folin-Wu法:該法對葡萄糖無特異性,一切還原物質(zhì)均可產(chǎn)生同樣的反應(yīng)。雖血液中葡萄糖為主要還原物質(zhì),但仍存在其他非糖還原物質(zhì),故該法其參考值較其他方法略高。鄰-
6、甲苯胺法:該法涉及強(qiáng)酸、加熱等反應(yīng)條件,不便于大規(guī)模檢測,且使用的試劑具有毒性,臨床和科研上已很少采用。,實驗二 肌酐的測定,肌酐的測定實驗原理 肌酐與苦味酸反應(yīng)生成紅色復(fù)合物,在510nm處有特異性吸收。這種復(fù)合物的生成速率與肌酐含量成正比。實驗?zāi)康?1,掌握肌酐測定原理 2,熟悉肌酐測定的方法 3,比較男女性的肌酐含量差異實驗材料 試管,R1氫氧化鈉,R2苦味酸,標(biāo)準(zhǔn)液肌酐(400umol/L),血清
7、標(biāo)本要求 采取同學(xué)的新鮮血液,抽血前空腹。樣品管1選取男性血液,樣品二選取女性血液,充分混合,37°c水浴9分鐘上機(jī)測定,0.5cm光徑比色杯在510nm波長下比色,正常參考范圍34~140umol/L數(shù)據(jù)處理C(待)XA(標(biāo))=C(標(biāo))A(待)預(yù)測結(jié)果樣品1和樣品2都在正常范圍內(nèi),男性體內(nèi)肌酐含量數(shù)值大于女性臨床意義 血肌酐就是反映腎小球功能的最可靠指標(biāo)。血肌酐正常范圍:男 53~106微摩/升(0.
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