紅細胞血型血清學技術(shù)

1、紅細胞血型血清學技術(shù),,,標本鹽水介質(zhì)凝集試驗酶處理細胞的凝集試驗抗球蛋白試驗聚凝胺的應(yīng)用抗體效價滴定吸收放散試驗?zāi)种圃囼?標本,,（一）標本采集1．紅細胞標本,采集方法：針刺耳垂或指尖，直接用生理鹽水配成紅細胞懸液待用。靜脈采血，用抗凝劑（ACD、CPD、Na-EDTA等）抗凝。直接從血凝塊（血柱）中洗脫游離的紅細胞。,（一）標本采集1．紅細胞標本,★特殊情況：用于抗球蛋試驗（Coomb’s試驗）的

2、標本要抗凝，否則，補體C3b、C4b容易致敏紅細胞造成抗球蛋試驗（Coomb’s試驗）假陽性。存在有受Ca2+抑制的自身抗體時，不宜用抗凝血液作為紅細胞抗原標本。,（一）標本采集2．血清標本,采集方法： 取靜脈血注入干燥試管內(nèi)，放置37℃水浴中，凝固后用玻璃棒攪動血塊，使之與試管壁剝離，然后放置4℃冰箱過夜，離心分離血清。 必要時，當血液凝固后即可離心分離血清。,（一）標本采集2．血清標本,★需注意的問題

3、：血清如需于4℃冰箱保存，需加疊氮鈉（NaN3）防腐，疊氮鈉（NaN3）終濃度0.1%。血清如用于制備試劑（如抗A、抗B標準血清）要經(jīng)過56℃滅活補體后才能使用。一般實驗避免使用血漿，防止纖維蛋白的干擾。,（二）紅細胞懸液的配制用于血型鑒定、配血等的紅細胞至少要用大量生理鹽水洗一次，其目的是通過洗滌可以去除紅細胞表面的下列物質(zhì)：,1)少量的血漿蛋白；如纖維蛋白原等；2)已溶解紅細胞的基質(zhì)；他們有競爭抗體的作用。,3)可溶性

4、的抑制物質(zhì)，如A、B、H、Lewis 等血型物質(zhì)；4)抗凝劑；他們有抗補體作用。,★紅細胞懸液的常用濃度,壓積紅細胞1滴加8滴生理鹽水所配成的懸液約為10%，按此比例配制其他所需濃度的紅細胞懸液。2%的紅細胞懸液一般用于滴定抗體效價。5%的紅細胞懸液一般用于血型鑒定、配血試驗、及抗球蛋白試驗等大多數(shù)血型血清學試驗。10%的紅細胞懸液一般用于測定抗體的親和力試驗。,★（三）標本的保存,1．血清標本沒有稀釋過的血清如加有防

5、腐劑可在4℃冰箱保存數(shù)月；在-20℃以下可保存數(shù)年而其抗體活性基本不變。用白蛋白或無抗體活性的AB型血清作稀釋劑稀釋血清后保存，效果和上述相同。用生理鹽水稀釋過的血清只限當天使用，不能保存。用大分子物質(zhì)做稀釋介質(zhì)，其對抗體活性不起保護作用。,,2．紅細胞標本一般試驗用的在4℃冰箱保存下的凝血標本要在5天內(nèi)使用，以不溶血為準。ACD保存液或其它特制的保存液可保存紅細胞3周。鹽水配制的紅細胞懸液只能當天使用，不宜保存。

6、應(yīng)注意的問題： 用作交叉配血的供血者、病人標本（血清、細胞）要放4℃冰箱保存1周，以便在出現(xiàn)輸血反應(yīng)時可備查。 各種保存的紅細胞在使用前都要用鹽水洗一次以上。,,鹽水介質(zhì)凝集試驗,,原 理,鹽水介質(zhì)中紅細胞上的抗原決定簇與相應(yīng)抗體分子上的抗原結(jié)合部位結(jié)合，交叉連結(jié)形成肉眼可見的凝集塊。,★用 途：,鹽水介質(zhì)凝集試驗用于IgM抗體的檢出、鑒定、鹽水配血試驗。鹽水抗體鑒定的血型抗原，如ABO、MN、P等血型系統(tǒng)的

7、抗原。,例外情況：,在鹽水介質(zhì)中，凝集是IgM抗體的行為。ABO血型系統(tǒng)中的A、B抗原位點多，當IgG抗A、抗B的濃度足夠大時，在鹽水介質(zhì)里也能與相應(yīng)的紅細胞發(fā)生凝集反應(yīng)。,鹽水介質(zhì)凝集試驗,(一)方法 常用的方法有平板法和試管法。,鹽水介質(zhì)凝集試驗（二）、立即離心法：,用 途： 鹽水法鑒定血型和交叉配血時，多采用立即離心(immediate spin)法。正確的操作是紅細胞懸液加到血清中后立即離心并觀察結(jié)果。,★延遲立即

8、離心的后果： 反應(yīng)時間過長而延誤立即離心的時間對ABO血型系統(tǒng)的抗體檢出影響較大。如果在室溫放置2分鐘后離心，可能使3+～4+的凝集減弱為0～1+，并伴有溶血現(xiàn)象。如果在室溫放置5分鐘后離心，原有的凝集可能消失，并有溶血。有的標本在延遲離心后，本來應(yīng)有的凝集會變?yōu)榧炔荒膊蝗苎?，因而難以發(fā)現(xiàn)ABO血型的不配合，這多數(shù)發(fā)生在O型人的血清抗體與A型、B型或AB型紅細胞反應(yīng)的試驗中，發(fā)生率為2%～3%。,★發(fā)生上述現(xiàn)象的原因：

9、 反應(yīng)強的抗A、抗B和抗原強度強的A、B抗原作用時，補體C1在有Ca2+存在的條件下，固定到紅細胞膜上，妨礙了紅細胞的凝集，進一步可能引起溶血。,,★解決方法：血清與紅細胞混合后立即離心用血漿或滅活的血清做試驗。用EDTA鹽水配制紅細胞懸液，以消除這種現(xiàn)象。稀釋血清后再做試驗可消除這 種現(xiàn)象，因而也稱這種現(xiàn)象為前帶現(xiàn)象,（三）、試驗結(jié)果的判讀和記錄,判讀結(jié)果前應(yīng)預(yù)先設(shè)計好記錄冊，在記錄冊上標記好細胞樣本和

10、血清樣本的位置。一定要一邊觀察，一邊記錄結(jié)果，不能事后記錄。常用的記錄符號及所示的凝集強度如下:,（三）、試驗結(jié)果的判讀和記錄,4+：一個大凝集塊，背景透明，無游離細胞。3+：:數(shù)個大凝集塊，背景透明，無游離細胞。2+：許多小凝集塊，肉眼可見，大小均勻，背景基本透明，有游離細胞。1+：很小的凝集塊，肉眼可見，背景不透明，游離細胞較多，常要用顯微鏡觀察。W+：:微小凝集塊，肉眼很難看清，背景渾濁，要用顯微鏡觀察。O：無凝集，無

11、溶血，全部是游離細胞，要用顯微鏡觀察。PH：部分溶血。H：完全溶血。,（四）緡錢狀凝集的處理,概 念：在鹽水介質(zhì)的凝集試驗中，常見到緡錢狀凝集現(xiàn)象，也稱串錢狀凝集，這是一種假凝集，由紅細胞形成的這種假凝集就象許多硬錢幣堆積在一起。,★緡錢狀凝集的特點：,1在顯微鏡下紅細胞膜完整；2細胞間界限清晰地成緡錢串聚集；3緡錢狀假凝集反應(yīng)不不受溫度影響；,4 室溫與37℃結(jié)果一樣；5這種紅細胞的直接抗人球蛋白試驗（Coomb

12、’s試驗）呈陰性反應(yīng)。,★ （四）緡錢狀凝集的處理,造成紅細胞緡錢狀凝集的原因： 多種原因可以引起紅細胞緡錢狀凝集，有內(nèi)因和外因。,,內(nèi)在因素： 某些疾病致血漿球蛋白異常時，如高球蛋白血癥、巨球蛋白血癥時會出現(xiàn)緡錢狀凝集。外在因素：病人在使用大分子右旋糖酐和羥乙基淀粉溶液作血容量擴張劑時，也可以產(chǎn)生緡錢狀凝集。用玻片法試驗時，如溫度過高、時間過長，也容易發(fā)生這種假凝集，因為玻片接觸面大，液體的蒸發(fā)面也大，致

13、使血清容易濃縮。,★緡錢狀凝集的解決方法：,實驗中遇到緡錢狀凝集時，可將血清適當稀釋后進行實驗。在顯微鏡下觀察到緡錢狀凝集時，加1滴生理鹽水到反應(yīng)物并混勻，通常可以消除這種假凝集。做試管法實驗時如發(fā)現(xiàn)緡錢狀凝集，可將試管離心，去上清液，瀝干，再加2滴生理鹽水重新懸浮紅細胞觀察結(jié)果（這種方法稱為鹽水置換法），假凝集會消失，真凝集不會消失，嚴重的可重復(fù)一次。緡錢狀形成不影響間接抗球蛋白試驗。,,酶處理細胞的凝集試驗,,★(一)、原理

14、,紅細胞表面有豐富的唾液酸，帶有負電荷，是紅細胞互相排斥的原因。蛋白水解酶能消化破壞這種唾液酸，減少紅細胞表面的負電荷。膠?；瑒用嫔系腪eta電勢減小，紅細胞的間距縮短，IgG抗體分子能與有相應(yīng)抗原的紅細胞產(chǎn)生凝集。酶法能顯著增強Rh和Kidd系統(tǒng)的抗原抗體反應(yīng)，但蛋白酶能破壞M、N、S、s、Fya和Fyb抗原，酶法不適用這些抗原的檢測。,★(二)、常用酶的種類,常用的酶有菠蘿酶、木瓜酶、胰酶、無花果酶等。國內(nèi)用得較多的是菠蘿酶和木瓜酶

15、。注意事項：在配制酶溶液時要注意防護，有少數(shù)人對菠蘿酶、木瓜酶和無花果酶有過敏反應(yīng)，酶對組織有損傷作用，特別是無花果酶。各種酶粉都容易潮解，要注意密封，宜在4℃保存。,(三)、操作方法,1．一期法酶試驗 一期法通常也稱為直接酶法，菠蘿酶和木瓜酶都適用于一期法。在已標記好的試管中加2滴血清和1滴5%的紅細胞鹽水懸液，再加1滴酶溶液，37℃孵育15分鐘，離心1分鐘，觀察結(jié)果；或37℃孵育30分鐘后直接觀察結(jié)果。一期法不如二期法敏

16、感，但操作簡單，用于抗體篩選和鑒定、Rh定型、交叉配血等比較方便。試驗系統(tǒng)通常要設(shè)陰性對照、陽性對照和自身對照。,,2．二期法酶試驗 二期法也稱為間接酶法。木瓜酶和無花果酶適用于二期法。二期法分兩步完成。 第一步是酶處理紅細胞：在1份洗滌壓積的紅細胞中加2份木瓜酶溶液，37℃孵育30分鐘，用大量pH7.4的PBS洗滌3次，用生理鹽水配成5%的懸液備用。第二步是在己標記好的試管中加受檢血清2滴，再加1滴酶處理過的紅

17、細胞懸液，37℃孵育15～30分鐘觀察結(jié)果，凝集和溶血皆屬于陽性。如沒有反應(yīng)可轉(zhuǎn)入抗球蛋白試驗。二期法也要設(shè)立與一期法相同的對照系統(tǒng)。一般用于抗體篩選和抗體鑒定試驗。,(四)、酶處理紅細胞凝集素,一般概念： ★ 有一些抗體能和胰酶、木瓜酶、菠蘿酶等酶處理的細胞發(fā)生凝集，但不與未處理的細胞反應(yīng)，其原因尚不完全清楚，可能是酶處理后某些抗原部位得以暴露，且不同的酶暴露的部位不完全相同。對于這類與酶處理紅細胞才發(fā)生凝集的抗體稱為酶處理細胞

18、凝集素。,酶處理細胞凝集素有以下幾個特點：,1抗球蛋白法試驗沒有反應(yīng)；或反應(yīng)微弱；常表現(xiàn)為自身凝集或全凝集；2可以和其他酶處理的細胞發(fā)生交叉反應(yīng)；3也可能不發(fā)生交叉反應(yīng)；4偶而有型特異性；,5多表現(xiàn)為Rh血型系統(tǒng)抗體特異性；6也可能表現(xiàn)為同種異體抗體特異性；7一些Rh系統(tǒng)的抗體，尤其是抗E和抗C與木瓜酶處理的細胞反應(yīng)強；8通常不引起輸血反應(yīng)。,,抗球蛋白試驗,,★（一）、概 念：,抗球蛋白試驗（antigl

19、obulin test，AGT）又稱Coombs試驗，是檢查IgG抗體的一種很好的方法。將抗球蛋白血清（antiglobulin serum，AGS）加入己致敏的紅細胞鹽水懸液中，紅細胞表面的抗體球蛋白（使其致敏的IgG抗體）與抗球蛋白血清中的抗體發(fā)生特異性反應(yīng)，使紅細胞發(fā)生凝集?？骨虻鞍籽宄丝梢詼y定紅細胞上IgG抗體外，還可以測定IgM和IgA，也可以測補體組分（C3、C4）。所謂廣譜AGS即包括抗IgG和抗C3。抗球蛋白試

20、驗分為直接抗球蛋白試驗和間接抗球蛋白試驗。,,抗球蛋白試驗,,（二）、抗球蛋白試劑：,試劑來源簡介：用人體免球蛋白免疫家兔獲得。產(chǎn)量少，純度低，屬廣譜抗人球蛋白試劑。用雜交瘤技術(shù)制備單克隆抗球蛋白試劑。產(chǎn)量大，純度高，針對性強，多為單特異性抗球蛋白試劑，如抗IgG、?？笴3等，單克隆的廣譜抗人球蛋白試劑為抗IgG、抗C3的混合物。,,多特異性（廣譜）抗球蛋白試劑組成：試劑中含有抗IgG和抗C3d.。用途：主要用于配血試驗、抗體篩

21、選、抗體鑒定以及直接抗球蛋白試驗（DAT），如溶血性輸血反應(yīng)原因調(diào)查、新生兒溶血病檢查、自身免疫性溶液血性貧血（AIHA）的檢查等。,,單特異性抗球蛋白試劑試劑種類：有抗IgG、抗IgM、抗IgA、抗C3、抗C4。實際應(yīng)用以抗IgG、抗C3為主。用 途： 1、用于配血試驗、抗體檢出和鑒定。 2、對多特異性（廣譜）抗球蛋白試驗陽性結(jié)果進行分型。用抗IgG、抗C3可分出IgG、IgG+C3、C3三個型。,,I

22、gM抗體分子在紅細胞洗滌過程中容易解離，但同時致敏的補體能牢固地結(jié)合在紅細胞上而不易解離。因為抗IgM抗體總是結(jié)合補體，因此，通過用抗C3測定紅細胞上是否結(jié)合有補體，則可間接證明紅細胞上是否有IgM抗體包被。冷抗體引起的自身免疫性溶血性貧血一般是補體型的?？笽gM在抗球蛋白試驗中作用不大。,（三）、方 法,抗球蛋白試驗分為直接抗球蛋白試驗和間接抗球蛋白試驗。,（一）、直接抗球蛋白試驗,★概 念： 直接抗球蛋白試驗是檢查體內(nèi)致敏紅細胞

23、的一種方法，用 途： 用于檢查紅細胞是否已被不完全抗體所致敏。如新生兒溶血病（胎兒紅細胞被母親血型抗體致敏）、溶血性輸血反應(yīng)（輸入的不相合紅細胞被病人不完全抗體致敏）、自身免疫性溶血性貧血（病人紅細胞被自身抗體致敏）以及藥物誘導產(chǎn)生的自身抗體（由甲基多巴類藥物，青霉素等所致）。.,直接抗球蛋白試驗（1）操作方法,1．取受檢查紅細胞，以生理鹽水洗滌3次，配成3%紅細胞鹽水懸液。2．取上述受檢者紅細胞鹽水懸液1滴，滴入試管，

24、加抗球蛋白血清1滴，混勻。3．陽性對照：不完全抗D血清致敏的3%D陽性紅細胞懸液1滴，加抗球蛋白血清1滴，混勻。.4．陰性對照：正常人3%D陽性紅細胞懸液1滴加抗球蛋白血清1滴，混勻。5．受檢者以及陽性，陰性對照管同時離心，觀察結(jié)果。,直接抗球蛋白試驗（2）結(jié)果判定,如陽性對照管凝集，陰性對照管不凝集，受檢紅細胞凝集者為陽性，不凝集者為陰性。,直接抗球蛋白試驗（3）注意事項,1)標本采取后立即進行試驗，延遲試驗或中途停止可使抗體

25、從細胞上解離，造成假陰性結(jié)果。2)抗球蛋白血清應(yīng)按說明書使用最適稀釋度，否則，可產(chǎn)生前帶和后帶反應(yīng)，而誤為陰性結(jié)果。,3)受檢紅細胞一定要用鹽水洗滌3次，除去紅細胞懸液中混雜的血清蛋白，以防止假陰性結(jié)果。4)如果要了解體內(nèi)致敏紅細胞的免疫球蛋白類型，可分別以抗IgG、抗IgM或抗C3單價抗球蛋白清進行分型試驗。,直接抗球蛋白試驗·注意事項,5)紅細胞上吸附抗體太少，或Coomb’s陰性的自身免疫性溶血性貧血，其直接

26、抗球蛋白試驗可呈假陰性反應(yīng)。,6)全凝集或冷疑集血液標本及含有Wharton膠（華通氏膠）的臍血標本，且洗滌不充分；血液標本中有很多網(wǎng)織紅細胞，且抗球蛋白血清中含有抗運鐵蛋白時，都可使紅細胞產(chǎn)生凝集（假陽性結(jié)果）。,（二）、間接抗球蛋白試驗,★概 念 它是一種檢測血清中不完全血型抗體的方法。即用已知抗原紅細胞測定受檢血清中相應(yīng)的不完全抗體，或用已知抗體的抗血清測定受檢紅細胞上相應(yīng)抗原。,間接抗球蛋白試驗,用 途：常用于血型鑒定，

27、抗體的檢出和鑒定，輸血前交叉配血試驗以及其它的特殊研究。（1）操作方法1．取試管3支，標明受檢管，陽性對照及陰性對照。2．按下表將各反應(yīng)物加入相應(yīng)試管內(nèi)。,間接抗人球蛋白試驗（1）操作步驟,反應(yīng)物： 受檢管，陽性對照管，陰性對照管； 血清（已知或受檢），2滴2-5%紅細胞懸液（已知或受檢），1滴不完全抗D血清，2滴AB型血清，2滴5%D陽性紅細胞懸液1滴。37℃水浴60min，洗滌3次。每管各加最適稀釋

28、度抗球蛋白血清1滴，混勻，離心，觀察結(jié)果。,間接抗人球蛋白試驗（2）結(jié)果判定,陽性對照管凝集，陰性對照管不凝集，受檢管出現(xiàn)凝集者為陽性，受檢管不出現(xiàn)凝集者為陰性。效價滴定 如果受檢者血清中檢出IgG抗體，可將受檢者血清以鹽水做倍量稀釋后，按上法進行測定。,間接抗人球蛋白試驗（3）、注意事項,紅細胞洗滌應(yīng)迅速，一開始洗滌就不應(yīng)中途停止。洗滌用鹽水要足量并用力沖入管底，使壓積于管底的紅細胞松離。切勿用手指堵住管口，顛倒混勻，以防污染來自

29、皮膚的蛋白。離心速度和時間十分重要，應(yīng)按規(guī)定進行。如果檢查的抗體為補體依賴抗體，則必需加入新鮮AB型血清，抗球蛋白血清中也應(yīng)含有抗C3。,間接抗人球蛋白試驗（四）、試劑對照細胞的制備,在直接和間接抗球蛋白試驗中，陰性結(jié)果都要用IgG抗體致敏的試劑對照紅細胞檢查證實。,間接抗人球蛋白試驗（四）、試劑對照細胞的制備,1、IgG致敏的試劑對照紅細胞 等量的IgG抗D+O型Rh(+)紅細胞于37℃水浴30分鐘，用大量的生理鹽水

30、洗滌3次后再用鹽水懸浮成5%的紅細胞即可。。,間接抗人球蛋白試驗（四）、試劑對照細胞的制備,2、補體致敏的試劑對照紅細胞 20ml10%的蔗糖溶液+4～6滴新鮮血液，或加2滴洗滌過的壓積紅細胞和4滴AB型新鮮血清，37℃水浴15分鐘，用大量的生理鹽水洗滌3次后再用鹽水懸浮成5%的紅細胞即可。,間接抗人球蛋白試驗,★（五）、增強抗球蛋白試驗的方法目的：加快抗體致敏速度或增強敏感性。1．酶 法：2．低離子介質(zhì)法：

31、3．牛白蛋白法：4．聚乙二醇（PEG）法：,,聚凝胺的應(yīng)用,,★（一）、原 理,聚凝胺（polybrene），一種高價陽離子季胺鹽多聚物，溶解后能產(chǎn)生很多正電荷，可中和紅細胞表面的負電荷，使紅細胞之間距離減少，能引起正常紅細胞可逆性的非特異性凝集。如果是抗體致敏的紅細胞被聚凝胺凝集，則凝集不可逆。在檢測抗體活性的聚凝胺試驗中紅細胞和血清首先在低離子介質(zhì)中孵育，促進抗體與紅細胞結(jié)合，然后加入聚凝胺使細胞聚集。離心后，聚集的細胞不再懸

32、浮，加入重新懸浮液，聚凝胺的聚集作用可通過加入枸櫞酸鈉而中和，使正常紅細胞的聚集解散，而抗體引起的凝集仍存在。,聚凝胺試驗原理,（二）試劑和材料,1．低離子介質(zhì)（LIM）2．聚凝胺3．重新懸浮液（枸櫞酸三鈉）,（三）操作方法,1．在試管中加2滴受檢血清或試劑血清，1滴2%～5%受檢紅細胞或試劑紅細胞，混勻。2．加LIM溶液0.6ml，混合均勻，室溫孵育1min。3．加2滴0.05%聚凝胺溶液，混合后靜置15s。4．1

33、300g/min，離心15s，傾去上清液。不再懸浮細胞。5．輕輕搖動試管，目測細胞有無凝集，如無凝集，必須重做。6．加入2滴重新懸浮液，并輕輕混合，觀察結(jié)果。,（四）結(jié)果判定,如凝集散開，則為聚凝胺引起的非特異性凝集，為陰性反應(yīng)；如.凝集不散開，則為抗原抗體結(jié)合的特異性反應(yīng)，為陽性反應(yīng)，如肉眼觀察凝集強度弱，可進一步在顯微鏡下觀察有無凝集。,（五）注意事項,1．可以用含ETDA之血漿代替血清。2．當重新懸浮液加入后，應(yīng)盡快觀察

34、結(jié)果（不可超過3min，以免反應(yīng)消失）。3．0.05%聚凝胺溶液若放在玻璃瓶太久會變?nèi)?，所以必須保存在塑料瓶中?．聚凝胺是一種抗肝素藥物，所以使用含肝素之標本，要加稍多之聚凝胺來中和肝素。,,抗體效價滴定,,（一）、概 念、注意事項,★將血清在稀釋液中連續(xù)倍比稀釋后，與特定抗原的紅細胞在特定的反應(yīng)介質(zhì)中進行凝集反應(yīng)，通常以肉眼觀察到的最后一個“1+”的凝集管作為判斷反應(yīng)終點，終點管血清的稀釋倍數(shù)的倒數(shù)則為該抗體的效價，或稱為滴度。

35、,,注意點： 效價滴定屬半定量試驗，間接推測抗體濃度有一定實用價值，但用它來測定抗體含量是不準確的。因為： 這種效價只表示結(jié)合到紅細胞上抗體的量。只是親合力大的抗體結(jié)合到紅細胞上。 終點觀察方法不同，數(shù)據(jù)結(jié)果也不同。 （肉眼、顯微鏡）所用的指示紅細胞的抗原性強弱不同結(jié)果也有差異。 人為誤差大。操作者手法和環(huán)境溫度等都會影響結(jié)果。,,★根據(jù)抗體的血清學行為性質(zhì)而選用不同的效價測定

36、方法。如抗體分子屬IgM性質(zhì)（如抗A、抗B、抗M等）則用鹽水介質(zhì)法；抗體分子屬IgG性質(zhì)則選用檢測不完全抗的方法，如酶法、抗球蛋白法、聚凝胺法等。,,★(二)、IgM與IgG抗體分子的區(qū)別(見免疫血液學基礎(chǔ)),2．巰基化學試劑滅活I(lǐng)gM分子的原理：,IgM分子由5個輻射狀排列的亞單位組成，亞基間以二硫鍵相連。亞基間的二硫鍵比亞基內(nèi)的鏈間及鏈內(nèi)二硫鍵容易被巰基化學試劑破壞，經(jīng)巰基化學試劑（2-Me、DTT等）處理后，19S的IgM分子成為

37、與IgG和IgA單體一樣的7S分子，使IgM抗體失去原來的血清學性質(zhì)，失去其與相應(yīng)紅細胞凝集的能力。IgG抗體分子則不被巰基化學試劑滅活，保持與相應(yīng)紅細胞致敏的血清學特性。IgA抗體分子可部分被滅活（7S單體不受影響，9S及11S多聚體被滅活）。,小 結(jié)★,2-巰基乙醇簡稱為2-Me；二硫蘇糖醇簡稱為DTT。它們都有滅活I(lǐng)gM抗體的能力?？笰、抗B抗體一般為IgG+IgM混合型。IgG和IgM型抗體具有相同特異性。其中的IgG型抗體對

38、新生兒溶血病有臨床意義，因IgM抗體能在鹽水介質(zhì)中凝集紅細胞而掩蓋了IgG抗體的凝集，所以在檢測IgG抗體前必須將起干擾作用的IgM抗體破壞，常用的方法是巰基化學試劑處理法。,,吸收放散試驗,,吸收試驗,本試驗用以間接證明紅細胞上的血型抗原及其強度，常用于ABO亞型的鑒定，全凝集紅細胞的定型以及某種原因引起紅細胞血型抗原減弱時的定型等。當受檢細胞加入已知效價的抗A及抗B血清后，若紅細胞上有相應(yīng)的抗原，便吸收血清中的抗體，使抗體活性減弱或

39、消失。再以已知抗原的紅細胞來滴定抗體效價，比較吸收前后抗血清中抗體的效價，便可證明受檢紅細胞上有無相應(yīng)抗原以及強度。間接判定受檢紅細胞的血型及其亞型的種類。,,吸收試驗也用于自身抗體的吸收、一份血清中幾種特異性抗體的分離及鑒定、低濃度抗體的濃縮等。,放散試驗,紅細胞上的抗原與血清中的抗體在適合條件下發(fā)生凝集或致敏。這種結(jié)合是可逆的，如果改變某些物理條件，抗體又可從結(jié)合的細胞上放散出，再以相應(yīng)紅細胞鑒定放散液內(nèi)抗體的種類，并測定其強度。用

40、以判定待檢紅細胞上抗原的型別。這種方法常用于ABO亞型的鑒定，全凝集或多凝集紅細胞的定型，類B的鑒定以及新生兒溶血病的診斷等。放散試驗的方法很多，ABO血型，IgM抗體以熱放散法為常用。Rh血型，IgG抗體以乙醚放散法為常用。,,凝集抑制試驗,,,★概 念：抗體能與有相應(yīng)抗原的紅細胞發(fā)生特異性凝集反應(yīng)，體液中的可溶性抗原物質(zhì)能與該抗體發(fā)生特異的中和反應(yīng)，抑制抗體凝集紅細胞的作用。用這種可溶性物質(zhì)來抑制抗體與紅細胞凝集作用的試驗，稱為

41、凝集抑制試驗。,,★用 途：常用于HAB血型物質(zhì)或Lewis分泌狀態(tài)的檢查。幫助ABO亞型的確定。特殊情況下（如紅細胞標本完全溶血）ABO血型鑒定。,(一) 唾液HAB血型物質(zhì)測定原理,HAB血型物質(zhì)除存在于人紅細胞上，也存在于某些人的分泌液中，含有血型物質(zhì)者稱為分泌型，約占80%，反之稱為非分泌型約占20%。A型分泌型人唾液中含有A型物質(zhì)，B型分泌型人唾液中含有B型物質(zhì)，O型分泌型人唾液中含有H型物質(zhì)，AB型分泌型人唾液中含有

42、A及B型物質(zhì)。H型物質(zhì)在A、B、O及AB四型分泌型唾液中均存在，但以O(shè)型人含量最多。,(續(xù)) 唾液HAB血型物質(zhì)測定原理,唾液中HAB血型物質(zhì)為半抗原，是糖蛋白，能特異性地與相應(yīng)抗體結(jié)合，從而抑制抗體與相應(yīng)紅細胞發(fā)生凝集。所以，利用抑制凝集試驗，可測定唾液中HAB血型物質(zhì)，它有助于ABO亞型的分類及其特殊情況下血型鑒定。,（二）試劑和材料,1．唾液的留取 2．2%A、B和O型紅細胞鹽水懸液。3．最適稀釋度抗血清的制備。4．抗H血