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1、紅細(xì)胞血型系統(tǒng),劉 峰華中科技大學(xué)同濟(jì)醫(yī)學(xué)院檢驗(yàn)系,目的要求與教學(xué)內(nèi)容,目的要求重點(diǎn)掌握 紅細(xì)胞血型系統(tǒng)概要、ABO及Rh血型系統(tǒng)基因、抗原、抗體的存在及特點(diǎn)。熟悉 ABO亞型分類及血型血清學(xué)特點(diǎn),分泌型與非分泌型,弱D亞型表現(xiàn)及臨床意義。了解 其他血型系統(tǒng)抗原與抗體及其臨床意義。,教學(xué)內(nèi)容紅細(xì)胞血型系統(tǒng)概要ABO血型系統(tǒng)Rh血型系統(tǒng)其他血型系統(tǒng),紅細(xì)胞血型抗原和抗體,,1900年,奧地利維也納大學(xué)助教 Lan
2、dsteiner第一個(gè)發(fā)現(xiàn)RBC血型,只發(fā)現(xiàn)人類RBC血型A、B、C三型,1930年獲得諾貝爾獎(jiǎng),并贏得了“血型之父”的美譽(yù)。1902年他的學(xué)生Decastello和Sturli又發(fā)現(xiàn)了AB型國(guó)際聯(lián)盟衛(wèi)生保健委員會(huì)將這4型正式命名為A、B、O、AB型,這就是現(xiàn)在人們熟知的RBC ABO血型系統(tǒng),血型是人類血液的主要特征之一,表達(dá)了血液各種成分的抗原的遺傳性狀。,紅細(xì)胞血型研究的百年歷史大致可分為三個(gè)階段:,? 1901年到1950年
3、,使用血型血清學(xué)方法發(fā)現(xiàn)和檢測(cè)各種血型抗原,闡明它們的遺傳特點(diǎn):Rh血型系統(tǒng) Levine和Stetson(1939年)、 Landsteiner和Wiener(1940年)Lutheran血型系統(tǒng) Callender等(1945年)Kell血型系統(tǒng)
4、 Coombs等(1946年)Lewis血型系統(tǒng) Mourant (1946年)Duffy血型系統(tǒng) Cutbush等(1950年)Kidd血型系統(tǒng) Allen等(1951年)MN血型和P血型系統(tǒng) Levine(1987年),? 60年代到70年代,研究血型抗原的生物化學(xué)本質(zhì)? 80年代始,血型的研究進(jìn)入以分子生物學(xué)
5、為基礎(chǔ)的新時(shí)代,逐步集中于: 闡明血型抗原的成分 遺傳多態(tài)性的分子基礎(chǔ) 血型基因的結(jié)構(gòu)和組織特異性表達(dá) 生物功能和演化等方面,紅細(xì)胞血型抗原的分類及統(tǒng)一命名,國(guó)際輸血協(xié)會(huì)(ISBT)成立了ISBT紅細(xì)胞表面抗原命名術(shù)語(yǔ)委員會(huì)(the ISBT Committee on Terminology for Red Cell Surface Antigens),規(guī)定了:血型抗原必須是用相應(yīng)抗體檢測(cè)到的紅
6、細(xì)胞表面抗原屬于遺傳性狀人類紅細(xì)胞血型抗原分成 血型系統(tǒng) (blood group systems) 血型集合 (blood group collections) 高、低二個(gè)抗原頻率組 (high and low incidence antigens) 更新至2009年2月,已將所發(fā)現(xiàn)的人類紅細(xì)胞的近260種血型抗原,分為30個(gè)血型系統(tǒng)、6個(gè)集合群和高(8個(gè)901 series )低(18個(gè)700
7、 series )兩個(gè)頻率組,,Updated August 2008,紅細(xì)胞血型抗原的生化結(jié)構(gòu),有二組基本類型:一組血型抗原決定簇:結(jié)合到蛋白或脂上的碳水化合物(多糖),決定抗原的特異性,該組抗原基因,編碼一個(gè)中間體分子,通常是酶,能轉(zhuǎn)移糖分子到蛋白或脂上而產(chǎn)生抗原特異性,屬于這一組的抗原有ABO、Lewis、Hh、P、Ii等一組是由蛋白的氨基酸序列所決定,由基因直接控制抗原的多態(tài)性,大多數(shù)的血型抗原屬于這組結(jié)構(gòu)類型,如Rh,,1
8、2,血型抗原的免疫原性,不同血型抗原的相對(duì)免疫原性如下:,13,抗原位點(diǎn)數(shù)、劑量效應(yīng)、位置效應(yīng),(一)抗原位點(diǎn)數(shù)取決于遺傳因素和抗原種類,紅細(xì)胞上抗原位點(diǎn)數(shù)影響其對(duì)相應(yīng)抗體的反應(yīng)強(qiáng)度。,14,(二)劑量效應(yīng)當(dāng)控制某血型抗原的基因?yàn)榧兒献訒r(shí),紅細(xì)胞上該抗原為雙劑量,雜合子時(shí)為單劑量。某些血型抗體只與純合子紅細(xì)胞發(fā)生反應(yīng),如Kidd系統(tǒng)抗體與純合子抗原紅細(xì)胞反應(yīng)較強(qiáng)的抗體被稱為具有“劑量效應(yīng)”,具有劑量效應(yīng)的血型系統(tǒng)包括Rh(D除外)
9、、Kidd、Duffy、MNSs、Lutheran系統(tǒng)劑量效應(yīng)往往出現(xiàn)于共顯性基因的情況,在ABO血型系統(tǒng)中,AA和AO基因型之間、BB和BO基因型之間,產(chǎn)生的抗原強(qiáng)度無(wú)明顯差異,反映不出劑量效應(yīng),(三)位置效應(yīng)指基因之間的互相影響順式效應(yīng):發(fā)生在同一染色體的基因之間,如cDE基因復(fù)合物產(chǎn)生的E抗原量比cdE基因復(fù)合物產(chǎn)生的E抗原量要少,系受同一染色體上D基因的影響反式效應(yīng):發(fā)生在同源染色體上基因之間,如基因型為CDe/cde和
10、Cde/cDe時(shí),兩者表型相同,但后者產(chǎn)生的D抗原較前者弱,是一條染色體的C基因?qū)α硪粭l染色體上D基因的影響,16,復(fù)合抗原,有些基因復(fù)合體控制的相關(guān)表面結(jié)構(gòu)稱為復(fù)合抗原,能引起免疫應(yīng)答,產(chǎn)生復(fù)合抗體。如復(fù)合基因DCe的產(chǎn)物有C, D, e三種抗原活性,同時(shí)也有順式產(chǎn)物Ce的抗原活性,C、e基因不在同一條染色體上時(shí),不產(chǎn)生Ce復(fù)合抗原。同樣還有ce、cE、CE等。復(fù)合抗體只與復(fù)合抗原起反應(yīng),如抗Ce只與Ce復(fù)合抗原發(fā)生反應(yīng)。,紅細(xì)胞血型
11、抗體,抗體是免疫球蛋白的主體,是體液免疫反應(yīng)的主要效應(yīng)分子,它們能特異性地結(jié)合或識(shí)別入侵的病原體(抗原),是免疫防御系統(tǒng)的重要組成部分紅細(xì)胞血型抗體的另一主要功能是與紅細(xì)胞的表面抗原結(jié)合,通過(guò)補(bǔ)體作用,導(dǎo)致紅細(xì)胞破壞,產(chǎn)生血管內(nèi)或血管外溶血,紅細(xì)胞抗原和抗體反應(yīng)基礎(chǔ),紅細(xì)胞血型抗原和抗體在體外的試管反應(yīng)中,常見有以下的幾種形式:凝集反應(yīng)(agglutination)沉淀反應(yīng)(precipitation)溶血反應(yīng)(hemolys
12、is),影響紅細(xì)胞凝集反應(yīng)的因素,溫度 離子強(qiáng)度 pH 孵育時(shí)間 抗原抗體比例 紅細(xì)胞間距離 蛋白水解酶的作用 正電荷分子的作用,紅細(xì)胞凝集反應(yīng)中的特殊現(xiàn)象,緡錢狀凝集 肉眼下與紅細(xì)胞凝集無(wú)異,高倍鏡下,紅細(xì)胞形成錢幣疊層堆積狀 (MM,洗滌) 混合凝集現(xiàn)象 顯微鏡視野下標(biāo)本中存在兩群紅細(xì)胞,一部分凝集,另一部分不凝集(異型輸血或移植,RBC亞型檢
13、測(cè)[A3與抗A]),紅細(xì)胞血型學(xué)新技術(shù)的發(fā)展-分子生物學(xué)技術(shù)應(yīng)用,血凝反應(yīng)已在紅細(xì)胞血型血清學(xué)技術(shù)中應(yīng)用了100多年,但有時(shí)存在著檢測(cè)樣品的取材和定型血清的困難,以及只能鑒定血型抗原的表型,操作時(shí)干擾因素較多等問(wèn)題,在血型工作的研究和應(yīng)用上有很多限制性 分子基因定型技術(shù)有效地克服了血型血清學(xué)技術(shù)存在的問(wèn)題,對(duì)血型學(xué)的發(fā)展和應(yīng)用作出了巨大的貢獻(xiàn),目前研究和應(yīng)用較廣泛的以DNA為基礎(chǔ)的血型基因定型技術(shù)有PCR-RFLP(聚合酶鏈
14、反應(yīng)-限止性片段長(zhǎng)度多態(tài)性)PCR-SSP(聚合酶鏈反應(yīng)-序列特異性引物、PCR-SSOP(聚合酶鏈反應(yīng)-序列特異性寡核苷酸探針)SBT(DNA序列測(cè)定),血型基因定型技術(shù)已應(yīng)用于 疑難血型基因和抗原的鑒定 非侵入性的胎兒新生兒溶血病危險(xiǎn)性鑒定 輸血后供者血型等位基因的檢測(cè) 造血干細(xì)胞移植后移植標(biāo)記物的鑒定和追蹤 抗原陰性細(xì)胞供者的大規(guī)模篩選 親子鑒定、個(gè)體識(shí)別、人種研究等工作,ABO血型系統(tǒng),ABO血型系統(tǒng)有其它血
15、型系統(tǒng)所沒(méi)有的獨(dú)特的性質(zhì),表現(xiàn)在:,1、血清中常存在反應(yīng)強(qiáng)的抗體,而紅細(xì)胞上通常缺乏相應(yīng)的特異性抗原2、許多組織細(xì)胞上有規(guī)律地存在著A、B、H抗原,各種體液和分泌型分泌液中也存在著A、B、H物質(zhì) 這兩種獨(dú)有的性質(zhì),形成了不配合輸血的天然屏障,使ABO血型系統(tǒng)成為輸血醫(yī)學(xué)和器官移植中最重要的血型系統(tǒng),常見ABO血型分類,ABO血型分布情況,,ABO血型系統(tǒng)的抗原和抗體,ABO 血型抗原是由ABO 血型抗原基因編碼的特異性糖基轉(zhuǎn)移
16、酶催化合成的紅細(xì)胞膜表面的糖蛋白和糖脂ABO抗原決定簇共有5 種類型,由單糖經(jīng)轉(zhuǎn)移酶轉(zhuǎn)移到特定核心多糖鏈的末端生成,分別決定血型抗原基礎(chǔ)物質(zhì)、H 抗原、A抗原、A1 抗原以及B 抗原的抗原表型,29,L-巖藻糖,D-半乳糖,N-乙酰半乳糖胺,N-乙酰葡萄糖胺,ABO 抗原決定簇的主要載體是糖蛋白,而只有25 %左右的ABO 位點(diǎn)位于糖脂在5~6 周齡胚胎的紅細(xì)胞上可以檢測(cè)到ABO 抗原,但嬰兒一般在18 個(gè)月后才能充分表現(xiàn)抗原性
17、A和B抗原在某些組織早期發(fā)育中會(huì)消失,但有時(shí)重新出現(xiàn)在惡性腫瘤組織上,因此可以作為某些癌癥有用的預(yù)兆檢測(cè)因子,例如:在正常成人結(jié)腸組織中,A和B抗原是缺乏的,但是在結(jié)腸癌組織中A和B抗原重新表達(dá),ABO血型抗體的產(chǎn)生,在正常的情況下,每個(gè)個(gè)體可針對(duì)自己所缺乏的A、B和H抗原,自然地產(chǎn)生相對(duì)的特異性抗體嬰兒出生時(shí),通常沒(méi)有抗體,但是,由于自然界中的一些生物體(如細(xì)菌)的細(xì)胞表面上具有類似于A、B和H結(jié)構(gòu)的抗原,人體會(huì)在不自覺中被這
18、些外來(lái)抗原不斷地免疫,開始逐漸地產(chǎn)生了相應(yīng)的抗-A,抗-B和抗-A,B抗體,嬰兒在5~10歲時(shí),抗體的產(chǎn)生達(dá)到最高峰,然后隨年齡增長(zhǎng)而逐漸下降隨著年齡的增長(zhǎng),抗體效價(jià)反而降低,老年人的抗-A和抗-B 水平一般低于年青人,ABO血型抗體血清學(xué)特征,A型的抗-B和B型的抗-A主要是IgM類抗體,在室溫中反應(yīng)最強(qiáng)O型的抗-A,抗-B和抗-A,B通常是IgG類抗體,能與A和B型抗原凝集反應(yīng)由于IgG抗體容易通過(guò)胎盤,因此O型的母親容
19、易引起ABO-HDN。而A或B型母親所生的嬰兒較少發(fā)現(xiàn)ABO-HDN,B型個(gè)體的血清中含有的抗-A及抗-A1兩種抗體,B型個(gè)體的血清只能與A1及A2紅細(xì)胞凝集。用A2紅細(xì)胞吸收后的B型血清,只能與A1型紅細(xì)胞反應(yīng) 植物中的雙花扁豆植物凝集素( Dolichos Biflorus lectin),具有與抗-A1相似的凝集特異性,,,,ABO基因及其遺傳特點(diǎn),ABO基因的結(jié)構(gòu)圖(包括外顯子、內(nèi)含子) ABO各種等位基因的結(jié)
20、構(gòu)大多有高度的相似性,但由于點(diǎn)突變或缺失等原因,形成了ABO等位基因及各種亞型等位基因的差別,以及由它們轉(zhuǎn)錄產(chǎn)生的酶結(jié)構(gòu)上的差異,,,分子生物學(xué)以及其他領(lǐng)域的高新技術(shù),特別是分子克隆、PCR體外擴(kuò)增和DNA測(cè)序技術(shù),為紅細(xì)胞血型學(xué)的發(fā)展和應(yīng)用帶來(lái)了無(wú)限生機(jī)和前途 PCR分型技術(shù)的應(yīng)用,使ABO型別分析達(dá)到了更精細(xì)的水平,并因此發(fā)現(xiàn)了更多的ABO多態(tài)性。PCR-SSP和PCR-RFLP方法也在不斷的發(fā)展和改進(jìn)中,ABO的DNA分
21、型技術(shù)現(xiàn)已成為血清學(xué)方法的競(jìng)爭(zhēng)者和互補(bǔ)者,對(duì)小量含DNA的任何組織樣品,即可以用DNA分型技術(shù)對(duì)紅細(xì)胞抗原的基因型作鑒定,不受血清中自身抗體、不規(guī)則抗體以及疾病和假、弱凝集的影響 紅細(xì)胞血型學(xué)的基因研究,為保證輸血治療的安全和有效,作出了重大貢獻(xiàn),對(duì)于生命科學(xué)的發(fā)展有著無(wú)可估量的意義,ABO血型遺傳示意,分泌型和非分泌型ABO血型系統(tǒng)與Hh、Lewis血型系統(tǒng),ABO亞型簡(jiǎn)介,ABO亞型(ABO subgroups): ABO血
22、型抗原變異體的統(tǒng)稱,根據(jù)血型血清學(xué)試驗(yàn)所表現(xiàn)的抗原性強(qiáng)弱程度的分級(jí)量化等血清學(xué)特征,可鑒別出各種ABO亞型A抗原亞型最多:主要是A1(占80%)和A2亞型(占20%) ,其它的A亞型(A3、Am、Ax、Aint、Ael、Ay等)較少見或罕見B抗原的亞型比A亞型少,較常見的有B1、B3、Bm、Bx、Bel等亞型O型血型中,常把孟買型、類孟買型和一些H缺失型、Hm表型等歸類為H抗原的亞型,,Hosoi, E. (2008). &quo
23、t;Biological and clinical aspects of ABO blood group system." J Med Invest 55(3-4): 174-82.,A1 和 A2 亞型區(qū)別,A1型紅細(xì)胞平均有100萬(wàn)A抗原數(shù)/細(xì)胞A2型僅僅平均有25萬(wàn)A抗原數(shù)/細(xì)胞A1、A2亞型都存在的“A”抗原--- 2型A抗原A1型還有另外兩種抗原形式--- 3、4型A抗原,這兩種抗原在A2型上不存在,A1 和
24、 A2 亞型區(qū)別,各型紅細(xì)胞上H抗原數(shù)量:O > A2 > B > A2B > A1 > A1BA1、A2轉(zhuǎn)移酶(transferases)最佳PH值(酶此時(shí)具有最佳潛能和活性): 轉(zhuǎn)化A1和A1B時(shí)最佳PH為6.0 轉(zhuǎn)化A2和A2B時(shí)最佳PH為7.0,A1 和 A2 亞型鑒別,最簡(jiǎn)單的方法是使用具有與抗-A1相似的外源性凝集素雙花扁豆植物凝集素( Dolichos Biflorus le
25、ctin)未稀釋狀態(tài):雙花扁豆素可作為抗-A,可以和A1、A2都出現(xiàn)凝集。適當(dāng)稀釋:凝集素可以直接與A1、A1B紅細(xì)胞反應(yīng),而不與A2、A2B凝集,此時(shí)出現(xiàn)凝集的細(xì)胞為A1型,如果不出現(xiàn)凝集,則亞型主要為A2型(Aint也能和d. biflorus發(fā)生弱凝集現(xiàn)象),其它A亞型,A3型:很罕見的亞型(1/1000) 主要特征:與抗-A和抗-A,B均反應(yīng)呈現(xiàn)混合凝集現(xiàn)象Ax(Ao)型:更罕見的亞型(1/40,000)
26、 主要特征:A抗原十分弱,僅僅只能通過(guò)抗-A,B檢測(cè),通常其血清中存在的抗-A1。如果未用抗-A,B進(jìn)行檢測(cè),則Ax表型易被誤定為O型?! x表型的遺傳性不總是遵循孟德爾遺傳法則,近來(lái)研究提示不同的等位基因能導(dǎo)致該表型出現(xiàn),因此不同的突變能導(dǎo)致相同的亞型出現(xiàn),這意味著Ax 亞型具有不同的遺傳異質(zhì)性——不同的等位基因可導(dǎo)致相同的Ax亞型表達(dá)。,其它A亞型,Aint亞型(A1-A2 intermediate):與抗-A1反應(yīng)程度介于A
27、1~A2之間,與Ax具有類似性。Am亞型:更加罕見 主要特征:Am型紅細(xì)胞在常規(guī)試驗(yàn)中不與抗-A和抗-A,B反應(yīng),其血清中不存在抗-A1,A亞型鑒別,B亞型鑒別,ABO血型在輸血醫(yī)學(xué)上的意義,臨床輸血中必須要解決 ABO正反定型不一致帶來(lái)的不正確的ABO定型問(wèn)題亞型鑒定應(yīng)通過(guò)上表進(jìn)行綜合分析,必要時(shí)可以進(jìn)行基因分型,以防止帶來(lái)安全輸血隱患,ABO血型在移植醫(yī)學(xué)上的意義,不同血型的器官組織不能在移植中隨意使用,因?yàn)榭赡艽嬖诿?/p>
28、疫應(yīng)答導(dǎo)致的免疫排斥,降低移植物的存活。O型器官組織可以移植到其他ABO血型受者(屬于血液移植血型次側(cè)不合,要考慮風(fēng)險(xiǎn))A、B、AB型器官組織就應(yīng)遵循同型原則(屬于血液移植血型主側(cè)不合,要考慮更大風(fēng)險(xiǎn))A2亞型似乎是例外,A2型肝組織已經(jīng)成功地移植到O型受者,特殊的ABO亞型,1.B(A)型和A(B)型 B(A)表現(xiàn)型在抗-A 的BioClone (Ortho Diagnostic System)單克隆抗體混合物上市不久之后的1
29、985年被發(fā)現(xiàn),這種紅細(xì)胞與抗-A試劑發(fā)生類似B型的反應(yīng)。由于紅細(xì)胞表面除了產(chǎn)生B抗原外,還有少量的A抗原,血清中含有高活性的B型轉(zhuǎn)移酶,而B型轉(zhuǎn)移酶在某些條件下也能合成A型血型物質(zhì),因此被命名為B(A)。,特殊的ABO亞型,B(A)紅細(xì)胞為B遺傳型,其個(gè)體血清中含有抗-A。而AsubgroupB個(gè)體的血清中既不含有抗-A和抗-B,偶爾含有抗-A 。這種差異可以用于區(qū)分這些亞型。雖然B(A)基因是以Cis的方式遺傳,但血清學(xué)的差異可
30、以使其與Cis-AB區(qū)分。多數(shù)Cis-AB表現(xiàn)型為A B,而B(A)紅細(xì)胞除了含有B抗原外還有少量的A抗原。,特殊的ABO亞型,2.孟買型1952年Bhende等在印度孟買市中, 發(fā)現(xiàn)了三個(gè)男性的紅細(xì)胞是O型,但H抗原為陰性,所有人的血清中均具有抗-H,這類ABO亞型后來(lái)被稱為孟買型或Oh型孟買型的紅細(xì)胞與抗-H、抗-A、抗-B或抗-A,B都不凝集用紅細(xì)胞吸收和放散試驗(yàn)不能從孟買型紅細(xì)胞上檢出H、A或B抗原,孟買型紅細(xì)胞通常是Le
31、(a+b-),但也可是Le(a-b-)孟買型的個(gè)體不分泌Leb,唾液中沒(méi)有H、A和B抗原,可以有Lea抗原,但沒(méi)有Leb抗原血清中可含有抗-H、抗-A和抗-B H基因的等位基因h是隱性的抑制基因,孟買型是h因子的純合子hh,因此孟買型的個(gè)體不能編碼H糖基轉(zhuǎn)移酶,不能產(chǎn)生H抗原根據(jù)所獲得的H、A和B基因存在的結(jié)果,孟買型可分為OhO、OhA、OhB和OhAB表型,特殊的ABO亞型,3. 類孟買型(Bombay-like phen
32、otype) Levine等在捷克人中發(fā)現(xiàn)了類似孟買型的紅細(xì)胞亞型,紅細(xì)胞上沒(méi)有H抗原,但可以有少量A或B抗原,血清中有抗-H,這種紅細(xì)胞亞型被稱為類孟買型。紅細(xì)胞表面上有少量A抗原的,標(biāo)記為Ah,有少量B抗原的,標(biāo)記為Bh,有AB抗原的標(biāo)記為ABh。在與抗-A血清反應(yīng)時(shí),Ah紅細(xì)胞上的弱A抗原的凝集情況類似于A2或Ax。在與抗-B血清反應(yīng)時(shí),Bh細(xì)胞能顯示有弱B抗原。,類孟買型的紅細(xì)胞上不能檢出H抗原,唾液中有些個(gè)體有ABH物質(zhì)
33、。血清中含有抗-H,Ah個(gè)體的血清中還含抗-B,但沒(méi)有抗-A。Bh個(gè)體的血清中沒(méi)有抗-B,但含有抗-A。類孟買型或孟買型因其血型的特殊性,在臨床輸血時(shí)常常難以尋找相容的血源, 因此關(guān)于H抗原缺失型的分子生物學(xué)、遺傳學(xué)和統(tǒng)計(jì)學(xué)的研究具有重要的意義。,副孟買型(Para-Bombay phenotype):紅細(xì)胞表面上表達(dá)弱的A和B抗原但無(wú)H抗原,在其唾液中也完全缺少H抗原類孟買型(Bombay-like phenotype):紅細(xì)胞上
34、缺少或有弱的AB抗原表達(dá),而在唾液中有些個(gè)體有ABH物質(zhì),但也有些個(gè)體沒(méi)有ABH物質(zhì)孟買型被定義為非分泌型H抗原缺乏,而類孟買型的定義尚有爭(zhēng)議,以前一直定義為分泌型H抗原缺失,目前又有人將類孟買型分為兩類: 分泌型H抗原缺失(常見) 分泌型H抗原缺失且?guī)в猩倭縃抗原轉(zhuǎn)移酶活性,,特殊的ABO亞型,4.CiS-AB型(順式AB型)1964年SeyFried發(fā)現(xiàn),在一個(gè)波蘭人家庭,丈夫是O型,妻子是A2B型,
35、妻子的母親是O型,他們有2個(gè)孩子是A2B,顯然,該妻子的一條染色體上有A2B基因。其后,Yamaguchi等報(bào)道了1例顯示弱A和弱B抗原的A2B3的表現(xiàn)型,家系研究表明A2 和B3基因是通過(guò)一條染色體遺傳,這種基因構(gòu)型就被稱為Cis-AB。1966年,Yamaguchi等發(fā)現(xiàn)一個(gè)家庭,父親是O型,母親是A2B3 ,3個(gè)孩子是A2B3 ,是以Cis方式遺傳的。,Cis-AB最主要特征:家族成員的特殊遺傳方式 A型和B型基因位于
36、一條染色體上,2個(gè)基因能同時(shí)遺傳給后代 通過(guò)酶學(xué)分析研究這種構(gòu)型的原因:可能是兩條相鄰染色體發(fā)生不均衡的基因交換,導(dǎo)致A基因和B基因都在一條染色體上基因突變引起產(chǎn)生一種同時(shí)具有A和B酶活性的酶,Cis-AB細(xì)胞上的A抗原雖然經(jīng)常被認(rèn)為是A2,但A抗原強(qiáng)度強(qiáng)于A2B,弱于A1BCis-AB細(xì)胞幾乎無(wú)例外地表達(dá)弱的B抗原性(與免疫性A 型血清反應(yīng)較強(qiáng),而與自然發(fā)生的人血清抗-B弱凝集或不凝集)Cis-AB細(xì)胞有很強(qiáng)的H抗原性,
37、程度上與A2細(xì)胞基本相同,但高于正常的A2B細(xì)胞唾液中存在正常的A物質(zhì)、弱的B物質(zhì)和強(qiáng)的H物質(zhì),,Recently, the nucleotide sequence of the coding region in the last two coding exons of ABO genes from cisAB individuals was determined .,,The first substitution is identi
38、cal to that previously found in the A2 allele, corresponding to the cisAB (A2B3) allele encoding a glycosyltransferase that is capable of synthesizing both A and B antigens.,,cisAB is a very rare phenotype and hasthree
39、blood types, cisA2B3 (A2B3 /O ), cisA2B (A2B3 /B ), cisA1B3 (A2B3 /A1).Detecting this AB variant is very important, especially in blood transfusion and in dissolving a problem of paternity in the ABO blood group system.
40、,特殊的ABO亞型,5. 獲得性B(acquired B) 1959年Cameron等報(bào)道了獲得性B:在A型的病人中發(fā)現(xiàn)了不是自己遺傳產(chǎn)生的B抗原,血清中有抗-B,但這抗-B不與自身紅細(xì)胞的抗原反應(yīng)。分泌型個(gè)體的分泌液中有A和H抗原但沒(méi)有B抗原。獲得性B抗原:不是由病人自己遺傳而得的B抗原,特殊的ABO亞型,獲得性B抗原只出現(xiàn)在A型紅細(xì)胞上,減弱了A抗原的抗原性獲得性B通常發(fā)生在胃腸道疾病和有細(xì)菌感染的腫瘤病人中,細(xì)菌的脫乙酰基
41、轉(zhuǎn)移酶使A抗原的N-乙?;肴樘寝D(zhuǎn)化成半乳糖胺,類似于B抗原的決定簇,使之與抗-B反應(yīng)在正常的血清pH條件下,獲得性B的紅細(xì)胞能與抗-B發(fā)生凝集在低于pH6.0的酸性條件下,半乳糖胺的NH2變成NH3基,無(wú)法與抗-B反應(yīng),因此凝集消失,Rh血型系統(tǒng),一、Rh 血型系統(tǒng)概述,Rh血型系統(tǒng)是人類血型系統(tǒng)最復(fù)雜的一種,目前已經(jīng)有明確45個(gè)抗原。 發(fā)現(xiàn)史:Levine和Stetson于1939年在一例HDN的胎兒母親的血清中,發(fā)現(xiàn)
42、了一種抗體,當(dāng)她輸入ABO同型丈夫的血液后,產(chǎn)生了嚴(yán)重的HTR。經(jīng)試驗(yàn)證實(shí),該抗體能凝集約80%的ABO配合的供體血液,,1940年Landsteiner和Wiener以恒河猴(rhesus monkeys)的紅細(xì)胞免疫家兔和豚鼠,發(fā)現(xiàn)產(chǎn)生的抗體能凝集猴紅細(xì)胞以及大約85%的供體紅細(xì)胞。他們把被這種抗恒河猴抗體凝集的紅細(xì)胞稱為Rh陽(yáng)性,其余15%不凝集的紅細(xì)胞稱為Rh陰性。,Wiener和Peters在1940年指出,可在輸過(guò)A
43、BO血型相容的人的血清中發(fā)現(xiàn)抗Rh抗體Levine等又發(fā)現(xiàn)胎母之間的Rh血型不合,能引起新生兒溶血病。 后來(lái)證明了家兔抗rhesus 的血清與人的抗Rh血清并不相同,但人們始終稱人的抗體為抗Rh,為尊重Landsteiner和Wiener的發(fā)現(xiàn),將家兔抗rhesus抗體稱為抗LW,在臨床輸血醫(yī)學(xué)上,除了ABO血型系統(tǒng)外,Rh血型系統(tǒng)是最重要的血型系統(tǒng)之一。Rh血型系統(tǒng)主要的抗原有: D, C, E, c, e。Rh抗原顯示劑
44、量效應(yīng)(D除外),純合子比雜合子反應(yīng)強(qiáng)。臨床上稱Rh陽(yáng)性和陰性僅考慮了D(或Rho)的存在或缺失,Rh血型命名法,由于Rh血型系統(tǒng)的復(fù)雜性,歷史上存在三種命名法,Rh haplotypes,二、Rh血型抗原多態(tài)性的基因結(jié)構(gòu)和分子生物學(xué)特征,三、RhD抗原的變異體、分子基礎(chǔ),RhD血型的抗原存在大量的變異體,由不同的等位基因所編碼,包括: 各種弱D表型(weak D type) 部分D表型(partial D type)
45、Del等RHD 等位基因在分子結(jié)構(gòu)、表型和臨床意義之間沒(méi)有絕對(duì)的一致性,,This wide degree of D antigen variability has confounded some serological approaches-for example it is extremely difficult to characterise partial D and D-elute phenotypes by serolo
46、gy alone, as a very large panel of monoclonal anti-D representing each of the different anti-epD (D-epitope) specificities would be required, over 50 of which have been described.,Partial D,因?yàn)镽hD是多跨膜蛋白,只有部分蛋白片段暴露在紅細(xì)胞表面。當(dāng)
47、氨基酸替代物位于細(xì)胞外環(huán)時(shí),部分D表型可以出現(xiàn)。部分D表型可以因RHD編碼的單核苷酸錯(cuò)義突變引起,但更多的是RHD-CE-D 雜交等位基因引起。這種雜交蛋白可以和正常RhD蛋白一樣在細(xì)胞膜上穩(wěn)定,但是缺少部分D抗原表位。,部分D亞型:D 分類 (DII 到 DVII) DIII、DIV、DV 和 DVI 通常由RHD-CE-D 雜交等位基因產(chǎn)生 部分D表型具有重要臨床意義 攜帶者受到正常D抗原免疫可能產(chǎn)生抗-D
48、,,DVI:最常見的 partial D亞型之一, 外顯子 1-3 和 7-10 是 RHD 序列, 但外顯子4-6 是RHCE序列。,,,Weak D(Du),如果氨基酸替代物位于RhD蛋白跨膜區(qū)或者細(xì)胞內(nèi)片段時(shí),interfere with the assembly or efficient insertion of the RHD protein,可能產(chǎn)生弱D表型D抗原只是表達(dá)量減少,質(zhì)通常保留不變?nèi)酰臄y帶者通常不會(huì)產(chǎn)生抗-
49、D弱D型15、弱D型4.2、DAR型、弱D型7的攜帶者可能會(huì)產(chǎn)生抗-D,Du 表型的臨床意義供者血液必須要進(jìn)行Du 檢測(cè),以確保Rh陰性患者能使用全部為Rh陰性血液成分與制品受者血液也要進(jìn)行Du 檢測(cè),一般輸血時(shí)盡量采用Rh陰性血液成分與制品 因?yàn)橐恍┎糠諨 或 Du 型, 其攜帶者能被正常D抗原免疫而產(chǎn)生抗-D產(chǎn)科病人要常規(guī)檢測(cè)Du 表型,因?yàn)镈u陽(yáng)性胎兒可能出現(xiàn)嚴(yán)重的HDN,DEL,DEL(Del)表達(dá)非
50、常弱的D抗原,最先僅能由洗脫技術(shù)(elution)檢測(cè)抗原減弱,比弱D表型更顯著歐洲人群中DEL很罕見東亞地區(qū)D陰性血供者接近30%屬于DEL攜帶者隨著DEL供血者的臨床意義和基因分型方法的研究, 有關(guān)于DEL亞型正進(jìn)一步深入,RhD陽(yáng)性和陰性單倍體,Rh陰性分子機(jī)制,RHD基因去除,出現(xiàn)雜交的Rhesus box:導(dǎo)致在大多數(shù)種族人群中出現(xiàn)D陰性單倍體RHD pseudogene( RHDψ) 和RHD-CE-D 雜交基因
51、Cdes:非洲相當(dāng)一部分人群的原因罕見原因:其他類型RHD-CE-D 雜交基因的隱匿機(jī)制,以及無(wú)義或移碼突變 通過(guò)血清學(xué)實(shí)驗(yàn)有時(shí)在鑒別D陰性和DEL表型很困難,通過(guò)分子技術(shù)可以很明確鑒定等位基因從而避免誤檢。,Rhnull,Rh蛋白不屬于糖基化蛋白R(shí)h蛋白與另一種紅細(xì)胞表面糖蛋白緊密相關(guān),即Rh相關(guān)糖蛋白(RhAG)編碼RhAG的基因位于6號(hào)染色體上,與RHD和RHCE有高度的相似性RhAG是形成Rh抗原的必要條件,
52、RHAG基因如產(chǎn)生突變,形成了無(wú)活性的RHAG基因,在純合子狀態(tài)時(shí),將產(chǎn)生罕見的Rhnull表型Rh系統(tǒng)的所有抗原均不能表達(dá),RhCE variants,C,c,E和e的部分抗原也有報(bào)道,類似部分D抗原,例如部分C抗原攜帶者可能經(jīng)免疫刺激而產(chǎn)生抗-C。因?yàn)橹T如此類的部分抗原攜帶者比部分D抗原更少見,而且其免疫原性更弱,因此臨床重要性也并不是很大。一些長(zhǎng)期的血清學(xué)難題可以被分子方法解決,例如通過(guò)抗體工程技術(shù)發(fā)展更加優(yōu)良的血清學(xué)試劑。
53、,Certain weak D individuals have made anti-D when transfused with D-positive blood, including weak D types 4.2, 11 and 15, and therefore these individuals should ideally receive D-negative blood. However the common weak
54、Ds (type 1, 2, 3 and 41) do not appear to be prone to D immunisation . In fact, the Rh D protein weak D type 4.2 is identical in predicted primary amino acid sequence to the partial D DAR, so strictly should not be consi
55、dered a weak D phenotype.,Because of such a fuzzy distinction between partial and weak D phenotypes, it has been argued that the term D variant be used instead, with each phenotype considered individually on the merits o
56、f its clinical ability to cause alloimmunisation (if transfused) or be alloimmunised by normal D positive blood (if a patient) (Daniels et al, 2007).,,四、Rh血型系統(tǒng)的抗體,Rh抗體的免疫球蛋白性質(zhì) 大部份Rh抗體屬IgG,與鹽水懸浮的Rh陽(yáng)性紅細(xì)胞(—D—細(xì)胞例外)不起凝集反應(yīng)改
57、變方法或試驗(yàn)條件:如用高分子介質(zhì)(如牛白蛋白),酶試驗(yàn)或間接抗球蛋白試驗(yàn)可以檢測(cè)抗原抗體的凝集反應(yīng)。,Rh抗體的產(chǎn)生 主要通過(guò)輸血或妊娠免疫產(chǎn)生一般在初次免疫后2~6個(gè)月內(nèi)出現(xiàn)對(duì)Rh(D)初次免疫的人,經(jīng)再次免疫后,在三周內(nèi)抗體濃度可達(dá)最高峰大約1/3的Rh陰性的人,受Rh陽(yáng)性抗原免疫后,不產(chǎn)生抗-D,非補(bǔ)體結(jié)合性 大多數(shù)Rh抗體不能結(jié)合補(bǔ)體,因?yàn)檠a(bǔ)體連鎖反應(yīng)的激發(fā),至少要求二個(gè)IgG分子連接于鄰近的紅細(xì)胞上。由于R
58、h抗原在紅細(xì)胞膜上相距很遠(yuǎn),不能讓IgG分子相互合作,因此不能引起補(bǔ)體結(jié)合。 (extravascular rather than intravascular RBC destruction)但是也有補(bǔ)體結(jié)合Rh抗體的報(bào)導(dǎo),五、Rh抗體的臨床意義,受血者血漿中如含有Rh抗體,在輸入含相應(yīng)抗原的血液后,將引起嚴(yán)重的溶血性輸血反應(yīng)IgG類的Rh抗體,由于能通過(guò)胎盤,從而破壞胎兒相應(yīng)抗原的紅細(xì)胞,引起HDN當(dāng)少量的Rh陽(yáng)性紅細(xì)胞進(jìn)入受
59、血者循環(huán)時(shí),可用人Rh免疫球蛋白來(lái)防止Rh陽(yáng)性紅細(xì)胞的初次免疫,其它血型系統(tǒng),一、Lewis血型系統(tǒng),1946首次發(fā)現(xiàn)主要抗原:Lea(LE1) 和 Leb(LE2)其他抗原: Lec、 Led 、Lex(LE3)常見表型:Le(a+b-)、 Le(a-b+)、Le(a-b-)Le(a+b+) 在成人中很罕見 ,但在年幼嬰兒略為多見,Lewis 系統(tǒng)不同于其它血型系統(tǒng)在紅細(xì)胞成熟過(guò)程中,Lewis 抗原不直接整合到細(xì)胞膜上
60、Lewis 抗原由組織細(xì)胞產(chǎn)生,最初在血漿和體液中存在紅細(xì)胞通過(guò)從其外環(huán)境血漿中吸附而獲得 Lewis抗原,Lewis表型 不僅由Lele基因座的基因控制,也由 Hh 和Sese 基因控制: Lea的存在受FUT3基因控制,Leb的存在受FUT2和FUT3基因共同控制。 紅細(xì)胞上表達(dá)的 Lewis 抗原量 與 ABO表型抗原表達(dá)量相當(dāng)。,,Lewis 表現(xiàn)型 和ABH 分泌物,Lewis 表型和 分布頻率,Lewis 血型系
61、統(tǒng)抗體,抗- Lea 非常常見的抗體,通常是自然產(chǎn)生 ( 不需要經(jīng)輸血或妊娠刺激)自然產(chǎn)生通常為IgM 類,但也可以部分或完全是IgG型最佳反應(yīng)條件多數(shù)為室溫, 但在37℃也可具有一定活性酶處理紅細(xì)胞能提高其反應(yīng)性和溶血活性,Lewis 血型系統(tǒng)抗體,抗- Leb 類似 抗- Lea, 通常為 IgM類 室溫條件下具有凝集反應(yīng)性, 能結(jié)合補(bǔ)體酶處理紅細(xì)胞能提高抗- Leb 的反應(yīng)活性,Lewis 血型系統(tǒng)抗體的臨床意義,
62、HDNLewis抗體一般與HDN不相關(guān) 原因:多數(shù)抗-Lea和抗-Leb為IgM類,不能通過(guò)胎盤Lewis 抗原 在胎兒紅細(xì)胞上表達(dá)很少,即便Lewis抗體為 IgG類,通過(guò)胎盤,也不會(huì)引起胎兒紅細(xì)胞破壞,Lewis血型系統(tǒng)抗體的臨床意義,HTR(hemolytic transfusion reaction)一般與HTR不相關(guān)抗-Lea 和 抗-Leb一般僅在室溫時(shí)具有活性如果Lewis 抗體體外證實(shí)具有溶血活性或在抗
63、球蛋白參與下具有活性,應(yīng)考慮它具有提高輸注紅細(xì)胞清除的能力運(yùn)用常規(guī)37℃相容性實(shí)驗(yàn)(compatibility test)以選擇適當(dāng)?shù)墓┱哐航o具有潛在危險(xiǎn)的Lewis抗體的患者使用,二、MNSs血型系統(tǒng),1927年,Landsteiner和Levine 用人紅細(xì)胞免疫家兔,獲得了兔抗人紅細(xì)胞血清,可以鑒定紅細(xì)胞抗原,從而發(fā)現(xiàn)了M和N抗原,相應(yīng)的特異性抗體被稱為抗-M和抗-N。由于MN血型是用免疫(immune)的血清檢出,因此取M
64、和N兩個(gè)字母作為MN血型的符號(hào)M和N基因等顯性等位基因,所以構(gòu)成M+N-、M+N+、M-N+三種表型,1947年Walsh和Montgomery在一位新生兒溶血病患兒的母親血清里發(fā)現(xiàn)了抗-S抗體1951年Levine等找到了抗-S抗體研究證明了MN座位和Ss座位密切連鎖,組成了基因復(fù)合體,在親子傳遞過(guò)程中一起分離,S為顯性,s為隱性,MNSs為一復(fù)合的血型系統(tǒng),可有10種基因型,MNSs血型系統(tǒng)的常見表型,,MNSs血型系統(tǒng)生化
65、特征,MN抗原決定簇在血型糖蛋白A(GPA)上,抗原特異性取決于第l和第5位置上的氨基酸: M抗原分別是絲氨酸和甘氨酸 N抗原是亮氨酸和谷氨酸Ss抗原特異性由血型糖蛋白B(GPB)決定: S抗原是蛋氨酸 s抗原是蘇氨酸,GYPE --緊密相關(guān)基因,與GYPB 序列相似,也可以表達(dá)S 和s抗原。,MNS血型系統(tǒng)的分子生物學(xué)特點(diǎn),,MNS血型系統(tǒng)中的大
66、量變異體是GYPA和GYPB座位間基因交換重組的產(chǎn)物。,MNSs血型系抗原特點(diǎn),43個(gè)抗原組成主要抗原:M、 N、 S、 s蛋白水解酶作用 M 和 N 抗原位點(diǎn)可以被蛋白水解酶破壞,如木瓜酶、菠蘿酶,胰肽酶 S和 s 抗原不會(huì)被破壞,經(jīng)酶處理后能穩(wěn)定存在,MNSs血型系抗體特點(diǎn),抗-M 可以為 IgM 或 IgG (冷反應(yīng)性),很少在 37℃具有活性抗-N 幾乎都是 IgM這兩者能同時(shí)存在,似乎為 “自然產(chǎn)生
67、” 抗體抗-S和 抗-s通常是IgG, 通常可以由紅細(xì)胞免疫而產(chǎn)生,MNSs血型系統(tǒng)抗體的臨床意義,抗-M 僅在罕見病例中引起HTR 和 HDN 抗-N 幾乎沒(méi)有什么臨床意義抗-S和 抗-s 能引起 HTR 和 HDN,119,MNS系統(tǒng)的其它抗原抗體,MNS系統(tǒng)還有許多低頻抗原和一些高頻抗原Mia (MNS7)Mur (MNS10):該抗原在白人和非洲人中很少見,但中國(guó)人7%,泰國(guó)人10%。中國(guó)香港和臺(tái)灣報(bào)道,抗Mu
68、r是除了抗A、抗B以外的最常見的血型抗體。抗Mur可引起嚴(yán)重HTR及HDN東南亞地區(qū)的抗體篩選細(xì)胞必須包括Mur抗原,120,三、P 血型系統(tǒng),1. 1927年Landsteiner和Levine用人的紅細(xì)胞免疫家兔后,得到了抗P血清,發(fā)現(xiàn)了P抗原 Landsteiner 將此抗原命名為P, 之后,由于此系統(tǒng)復(fù)雜性的逐步展現(xiàn),其命名發(fā)生改變Landsteiner命名的P 抗原現(xiàn)在被命名為P1, 而P現(xiàn)在指的是大多數(shù)人類紅細(xì)胞上都
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