細(xì)菌感染的診斷和治療

1、細(xì)菌感染的診斷和治療,第一節(jié) 細(xì)菌感染的診斷,標(biāo)本采集時(shí)應(yīng)注意無(wú)菌操作，盡量避免雜菌污染。根據(jù)不同疾病以及同一疾病不同時(shí)期采取不同標(biāo)本。應(yīng)在使用抗菌藥物前采集標(biāo)本，否則在培養(yǎng)時(shí)應(yīng)加入藥物拮抗劑。采集局部不得使用消毒劑。標(biāo)本必須新鮮，采集后盡快送檢。盡可能采集病變明顯部位的材料。送檢過(guò)程中要采取適當(dāng)?shù)谋４娣绞?。（冷藏、保溫、保濕、甘油緩沖液等）標(biāo)本做好標(biāo)記，寫明檢驗(yàn)?zāi)康?、?biāo)本種類等。,一 標(biāo)本的采集和送檢原則,二 病原菌的檢驗(yàn)程

2、序,（一）病原學(xué)診斷（二）病原菌成分檢測(cè)（三）血清學(xué)診斷,1.細(xì)菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察2.分離培養(yǎng)3.生化試驗(yàn)4.血清學(xué)試驗(yàn)5.動(dòng)物試驗(yàn)6.藥物敏感試驗(yàn),（一）病原學(xué)診斷,大小、形態(tài)、排列、染色、及其有無(wú)特殊結(jié)構(gòu)程序：涂片 染色 鏡檢 (1)不染色標(biāo)本的檢查 (2)染色標(biāo)本的檢查,,1.細(xì)菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)觀察,(1)不染色標(biāo)本的檢查,不染色標(biāo)本一般用于觀察細(xì)菌動(dòng)力及運(yùn)動(dòng)情況(因?yàn)椴蝗旧珮?biāo)本直

3、接在普通光學(xué)顯微鏡下，無(wú)色透明,不能清楚看到細(xì)菌的形態(tài)與結(jié)構(gòu)特征,主要靠細(xì)菌的折射率與周圍環(huán)境不同進(jìn)行觀察)。有鞭毛的細(xì)菌在鏡下呈活潑有方向的運(yùn)動(dòng)，無(wú)鞭毛的細(xì)菌則呈不規(guī)則布朗運(yùn)動(dòng)。 (不停地做無(wú)規(guī)則運(yùn)動(dòng)的現(xiàn)象),(2)染色標(biāo)本的檢查,無(wú)色透明,直接不易觀察其形態(tài)結(jié)構(gòu);染料帶電荷;細(xì)菌的等電點(diǎn)在pH2-5之間,通常帶負(fù)電;常用的染色,,單染法,復(fù)染法,特殊染色法,a.單染法,簡(jiǎn)單染色通常只用一種染色劑，使細(xì)菌整個(gè)細(xì)胞染上顏

4、色。常用染料:美藍(lán)、結(jié)晶紫或石碳酸復(fù)紅等堿性染料 因?yàn)榭床磺褰Y(jié)構(gòu)。所以只便于檢查細(xì)菌的形態(tài)、大小和排列方式等。不能觀察其特殊構(gòu)造和屬性鑒定.,b.復(fù)染色法,用兩種或兩種以上的染料染色的方法，稱為復(fù)染色法或鑒別染色法 ①革蘭氏染色法:最經(jīng)典的方法②抗酸染色：是檢查結(jié)核分枝桿菌和麻風(fēng)桿菌的重要方法。,①細(xì)菌的革蘭氏染色法,革蘭氏染色是細(xì)菌鑒定上一個(gè)最重要和廣泛應(yīng)用的方法。染色步驟: 初染-媒染-脫色-復(fù)染理論和實(shí)際意義

5、 分為G+和G-細(xì)菌 了解細(xì)菌的致病性 指導(dǎo)臨床用藥,②抗酸染色,抗酸染色原理:分枝桿菌細(xì)胞壁含脂質(zhì)較多,其中主要成分為分枝菌酸,此物具有抗酸性,染色時(shí)與石炭酸復(fù)紅結(jié)合牢固,能抵抗酸性乙醇的脫色作用,因此抗酸菌能保持復(fù)紅的顏色,達(dá)到染色目的。步驟:苯酚復(fù)紅染色,加溫促使菌體著色;3%鹽酸乙醇脫色;呂氏美藍(lán)復(fù)染,未脫色細(xì)菌呈紅色為抗酸性細(xì)菌,脫色經(jīng)復(fù)染呈藍(lán)色的細(xì)菌為非抗酸性細(xì)菌。 只要用于結(jié)核桿菌和麻風(fēng)桿菌,c.特殊染

6、色,芽孢\(yùn)鞭毛\莢膜等特殊結(jié)構(gòu)的觀察大多需特殊染色熒光染色法,2.分離培養(yǎng),分離培養(yǎng)：所有標(biāo)本均應(yīng)作分離培養(yǎng)獲得純培養(yǎng)后進(jìn)一步鑒定. 培養(yǎng)后根據(jù)菌落的大小、形態(tài)、顏色、表面性狀、透明度和溶血性做出初步判斷。,3.生化試驗(yàn)：各種細(xì)菌所具有的酶不完全相同，對(duì)營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)的分解能力亦不一致，因而其代謝產(chǎn)物有別，藉此可對(duì)不同致病菌進(jìn)行鑒別（如腸道桿菌） 4.血清學(xué)試驗(yàn)：含特異抗體的免疫血清＋未知純種細(xì)菌進(jìn)行血清學(xué)實(shí)驗(yàn)，可確定致病菌的種和型。常

7、見有凝集試驗(yàn)、沉淀反應(yīng)等。5.動(dòng)物試驗(yàn)：主要用于分離、鑒定致病菌，測(cè)定菌株產(chǎn)毒性等。 常用動(dòng)物：小鼠、豚鼠、家兔 接種途徑：皮內(nèi)、皮下、腹腔、肌肉、靜脈等6.藥物敏感試驗(yàn)：測(cè)定標(biāo)本中致病菌對(duì)藥物的敏感程度。對(duì)指導(dǎo)臨床用藥及控制感染有重要意義。常用紙碟法和試管稀釋法。,1.抗原檢測(cè)：免疫學(xué)技術(shù)2.核酸檢測(cè) (1)核酸雜交技術(shù)： 分為固相和液相。有原位雜交、檢測(cè)DNA的Southern

8、印跡，檢測(cè)RNA的 Northern印跡 (2)PCR技術(shù)：快速、靈敏、特異性強(qiáng)。 (3)DNA指紋：染色體和質(zhì)粒指紋或圖譜分析 (4)其它成分的檢測(cè)：利用氣液相色譜法檢測(cè)細(xì)菌的代謝產(chǎn)物等。,（二）病原菌成分檢測(cè),（三)血清學(xué)診斷,用已知的細(xì)菌或其特異性抗原檢測(cè)患者體液中有無(wú)相應(yīng)特異性抗體和其效價(jià)的動(dòng)態(tài)變化，可作為某些傳染病的輔助診斷。主要適用于抗原性較強(qiáng)的致病菌和病程較長(zhǎng)的感染性疾病。常用有：直接凝集實(shí)驗(yàn)、沉淀

9、實(shí)驗(yàn)、補(bǔ)體結(jié)合實(shí)驗(yàn)、中和試驗(yàn)、ELISA等。,第三節(jié) 細(xì)菌感染的特異性防治,獲得性免疫的產(chǎn)生方式,一、人工主動(dòng)免疫 概念：人工主動(dòng)免疫是人為地將疫苗或類毒素接種于人體，使機(jī)體主動(dòng)產(chǎn)生特異性免疫力的過(guò)程。是一種防治微生物感染的措施，主要用于預(yù)防。常用的人工自動(dòng)免疫制劑有以下2種： (一) 疫苗 (二)類毒素,（一）疫苗 1 死疫苗： 用理化方法將免疫原性強(qiáng)的細(xì)菌殺死制成的。如百日咳、傷寒

10、、霍亂、斑疹傷寒、流行性腦膜炎、鉤端螺旋體病等 2 活疫苗： 用減度或無(wú)毒的病原體制成,如BCG、鼠疫和炭疽等的疫苗,活疫苗與死疫苗的比較 活疫苗 滅活疫苗 接種次數(shù) 1次 2-3次 接種量 小 較大 接種反應(yīng) 輕 重 免疫效果 較好,維持1-5年 差,維持0

11、.5-1年 毒力回升 有可能 不可能 安全性 有潛在危險(xiǎn)性 安全性好 疫苗穩(wěn)定性 相對(duì)不穩(wěn)定 相對(duì)穩(wěn)定 保存 不易保存 易保存,,,3 基因工程疫苗 將編碼有效抗原組分的目的基因插入適當(dāng)載體,形成重組DNA, 再導(dǎo)入宿主細(xì)胞, 目的基因隨重組DNA復(fù)制而復(fù)制, 隨宿主細(xì)胞分裂而擴(kuò)增, 使目的基因表達(dá)大量有效抗原成分, 由此制備的疫苗稱為基因

12、工程疫苗 如把HBsAg基因插入酵母細(xì)胞中，成功表達(dá)并制備HBsAg疫苗,4 亞單位疫苗 利用帶有細(xì)菌保護(hù)性免疫原的組分制成的疫苗。如肺炎鏈球菌莢膜多糖疫苗、鉤端螺旋體外膜蛋白疫苗等。 5 核酸疫苗或稱DNA疫苗、基因疫苗 是將能編碼引起保護(hù)性免疫應(yīng)答的病原體免疫原基因片段和質(zhì)粒載體直接注射入宿主體以表達(dá)目的免疫原，進(jìn)而產(chǎn)生特異性體液免疫和細(xì)胞免疫的新型疫苗,6 治療疫苗 慢性復(fù)發(fā)性感染患者可

13、注射病原體疫苗以增強(qiáng)其免疫應(yīng)答，顯示不同程度的療效。疫苗與藥物起協(xié)同作用，促進(jìn)康復(fù)，目前這一新領(lǐng)域正處于研究中。,（二）類毒素（toxoid）,類毒素是外毒素經(jīng)0.3-0.4%甲醛處理后，失去毒性仍保持抗原性的生物制品加入適量的磷酸鋁或氫氧化鋁等制成精制的類毒素在體內(nèi)吸收緩慢免疫效果較好。如白喉類毒素、破傷風(fēng)類毒素等,二、人工被動(dòng)免疫 人工被動(dòng)免疫：輸入含有特異性抗體免疫血清或制備好的免疫細(xì)胞，使機(jī)體立即獲得免疫力的過(guò)程，稱人

14、工被動(dòng)免疫 可用于某些急性傳染病的應(yīng)急預(yù)防和治療，但維持時(shí)間短。常用的人工被動(dòng)免疫制劑有： （一） 抗毒素 （二）抗菌血清 （三）胎盤丙種球蛋白和血清丙種球蛋白,三 其他免疫制劑 目前臨床常用的有以下幾種： ﹡干擾素 主要為INF-γ通過(guò)產(chǎn)生炎癥反應(yīng)和活化Mφ增強(qiáng)機(jī)體對(duì)胞內(nèi)寄生抗染的能力 ﹡IL-2 能刺激T細(xì)胞增殖 增強(qiáng)細(xì)胞免疫功能 ﹡集落刺激因子LAK細(xì)胞等 這些細(xì)胞免疫制劑在抗菌免

15、疫中應(yīng)用不多。主要試用于一些病毒性疾病和腫瘤,人工自動(dòng)免疫和人工被動(dòng)免疫的比較 區(qū)別要點(diǎn) 人工主動(dòng)免疫 人工被動(dòng)免疫 免疫物質(zhì) 抗原 抗體或細(xì)胞因子 接種次數(shù) 1-3次 1次 免疫出現(xiàn)時(shí)間 慢 2-4周 快 立即 免疫持續(xù)時(shí)間 長(zhǎng) 數(shù)月-數(shù)年 短 2-3周 主要用途 預(yù)防

16、 治療或緊急預(yù)防,四 生物制劑的使用及注意事項(xiàng) （一）接種對(duì)象： 根據(jù)發(fā)病的年齡、職業(yè)、流行地區(qū)確立接種對(duì)象 （二）接種途徑： 死疫苗、類毒素接種量大，常用皮下注射； 活疫苗接種量小，常用皮膚劃痕、皮內(nèi)注射、 口服及噴霧等； 丙種球蛋白、動(dòng)物血清和抗毒素采用肌肉注射,（三）接種劑量、次數(shù)及間隔時(shí)間 死疫苗接種劑量大，常分2-3次注射，間隔時(shí)間隨免疫力建立情況而定，傷寒疫苗產(chǎn)生免

17、疫力快，間隔7-10天，類毒素吸收較慢，間隔3-4周。一般需1-2年后再接種一次 （四）接種反應(yīng)及預(yù)防接種禁忌癥 1.一般反應(yīng)： 2.異常反應(yīng)： 3.應(yīng)用生物制品的禁忌癥,五、細(xì)菌感染的治療,（一）抗菌藥物種類 1、抗生素（antibiotics) 2、化學(xué)合成藥物（二）抗菌藥物作用機(jī)制 1、影響細(xì)胞壁合成 2、影響細(xì)胞膜功能 3、