淋巴造血系統(tǒng)腫瘤檢測項目介紹

1、封面一（深色底）本案主題標題文字為28號方正蘭亭粗黑簡體你的部門名稱或本案引導標題2012年9月12日,淋巴造血系統(tǒng)腫瘤檢測項目介紹艾迪康醫(yī)學檢驗中心 實驗室 孫曉柏,血液腫瘤分類進程,,MICMFAB形態(tài)學診斷(Morphology)免疫學檢查(Immunology )細胞遺傳學檢查(Cytogenetics)分子遺傳學檢查(Molecular)WHY?主觀影響方法學限制,檢測方法,形

2、態(tài)學:細胞學：外周血、骨髓涂片，淋巴結(jié)穿刺組織學：骨髓活檢、淋巴結(jié)活檢、血凝塊免疫學：流式細胞術（FCM）免疫組織化學細胞遺傳學： 核型分析（染色體異常）、熒光原位雜交（FISH）分子遺傳學： 融合基因（RT-PCR\Q-PCR)/基因突變（DNA測序）,形態(tài)學,骨髓涂片看細胞、骨髓活檢看結(jié)構(gòu)，二者相互補充相互驗證不能相互替代。,長度 ≥ 1.5cm，血凝塊,免疫固定電泳免疫固定電泳對多發(fā)性骨髓瘤

3、、Waldenstrom巨球蛋白血癥、分泌型骨髓瘤、輕鏈病、重鏈病等研究有重大意義。常規(guī)檢測免疫球蛋白中常見的IgG,IgA,IgM,κ,λ,IgD和IgE概率極低，當檢測結(jié)果出現(xiàn)單獨輕鏈，不能排除是IgE和IgD結(jié)合輕鏈的可能，若需要確定是否為游離輕鏈，將進一步檢測。多發(fā)性骨髓瘤患者在治療后易出現(xiàn)輕鏈丟失，電泳圖譜與重鏈病圖譜相似，此類患者建議加做尿液的免疫固定電泳檢測是否存在游離輕鏈，以作進一步區(qū)分。,遺傳學,,分子生物學,

4、融合基因篩查,適用患者 本篩查項目主要用于篩查ALL、AML、CML、AMMOL、CMML、MDS等血液病病種可能出現(xiàn)的31種融合基因或癌基因，及其融合基因的110余種剪切變異情況。適合無法確定融合基因類別的初診患者，便于醫(yī)生對血液病患者進行分子標志物的確定，并進行后續(xù)微小殘留病灶的監(jiān)控。 本項目建議配合染色體核型分析一起檢測，以免由于染色體數(shù)目異?；驍y帶少見融合基因而造成漏診。,不同疾病篩查項目,ALL融

5、合基因篩查（18種）AML融合基因篩查（23種）APL融合基因篩查（3種）MLL融合基因篩查（11種）,APL的5種融合基因亞型,Chromosomal t (15;17) t (11;17) t (11;17) t (5;17) dup (17) aberration (q22;q21) (q23;q21)(q13;q21)(q3

6、5;q21) (q21.3q23)Frequency >95% 1~2% rare rarerareFusion gene PML-RARa PLZF-RARa NuMA-RARa NPM-RARaSTAT5b-RARa 100% 100% yes

7、 yes yes RARa-PML RARa-PLZF RARa-NuMA RARa-NPM RARa-STAT5b 60~70% 100%no yes noNuclear in 100 micro speckles localized

8、 in microspeckle sheet likemicrospecklelocalization which maybe microspeckles pattern aggregation pattern, maybe localized in be loca

9、lized cytoplasm in cytoplasmResponse toATRA good no, may respond goodyes no to ATRA+G

10、-CSFChemo good no, may respond to chemo/ATRAArsenic good, with no PLZF-RARa not known not known not known

11、 degradation of degradation PML-RARa,,,CML的三種融合基因亞型,BCR-ABL, a model of activation of protein tyrosine kinase (PTK) in leukemo-genesis: growth and surv

12、ival advantages,突變檢測項目,WHO 2008 新界定的突變,技術交叉,TCR和IgH重排項目有5-10%的患者無法通過常規(guī)方法辨別其淋巴系統(tǒng)的增生是惡性增生還是反應性增生。 正常淋巴細胞在成熟過程中重排是多克隆性的，但惡性腫瘤（＞98%）表現(xiàn)為單克隆性Ig和/或TCR基因重排。適用患者及適應癥：疑似淋巴瘤患者的良惡性鑒別診斷。淋系白血病患者的鑒別診斷及微小殘留跟蹤檢測。,免疫學,流式細胞術的應用目的,確定髓系和淋

13、巴系別，及細胞分化階段；鑒別反應性與克隆性淋巴細胞增生性疾??；確定髓系白血病各亞型（M0，M3，M6，M7）；對形態(tài)學分類不明/比例低的細胞進行定性（淋巴瘤-凝 血功能障礙或甲減等）；診斷急性混合細胞白血?。ù_診）；診斷微小殘留白血病或白血病浸潤；輔助MPD/MDS診斷；判斷白血病/淋巴瘤預后，指導治療。,微小殘留病變檢測,抗體選擇白血病/淋巴瘤免疫表型檢測（30CD）白血病/淋巴瘤免疫表型檢測（20

14、CD） 對于無法診斷或是臨床傾向不明的患者，確定細胞系別來源及分化程度，輔助分型，提供診斷以及治療依據(jù)。微小殘留病灶檢測（6CD） 有初診資料并且觀察到微小殘留跟蹤標記微小殘留病灶檢測（20CD） 無初診資料或病情有復發(fā)情況MDS免疫表型檢測（20CD）多發(fā)性骨髓瘤免疫表型檢測（14CD）,,,,MICM整合報告,,Pig-a基因的克隆性干細胞突變Glycosylphosphatidylinosi

15、tol anchor，GPI缺失部分缺失：Ⅱ型細胞全部缺失：Ⅲ型細胞,PNH克隆檢測,,檢測哪些細胞？紅細胞 中性粒細胞 單核細胞 淋巴細胞 血小板,FLAER氣單胞菌溶素（aerolysin）直接連接于GPI錨蛋白，GPI陰性的PNH細胞對aerolysin出現(xiàn)抵抗。利用這一特性，制備出了采用熒光素（如ALEXA-488）標記aerolysin的變異體（FLARE），通過流式細胞術或激光共聚焦等方法分析GPI陽

16、性或陰性細胞。,Michael J. Borowitz et al. Guidelines for the diagnosis and monitoring of paroxysmal nocturnal hemoglobinuria and related disorders by ?ow cytometry. Cytometry Part B 2010; 78B: 211–230.,,血液病質(zhì)量體系建設,與UCLA（加利福尼亞大學）