微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)microbiologyexperimentguidance

1、微生物學(xué)實(shí)驗(yàn),微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)課程要求,紀(jì) 律： 不遲到、不早退、不曠課、關(guān)閉手機(jī)考 核： 平時成績(40%) +實(shí)驗(yàn)報告（40%）+ 期末考試（20%） 平時成績包括：預(yù)習(xí)情況、考勤、課堂實(shí)驗(yàn)情況等。 學(xué) 時：24學(xué)時時間地點(diǎn)：3-14周（單），星期五 （5-8節(jié) ），8號樓204室,實(shí)驗(yàn)報告的書寫,1、不同的小實(shí)驗(yàn)分開寫；2、實(shí)驗(yàn)?zāi)康?、?shí)驗(yàn)原理、實(shí)驗(yàn)步驟、實(shí)

2、驗(yàn)結(jié)果、分析與討論、思考題；3、實(shí)驗(yàn)時間、指導(dǎo)老師需注明。4、實(shí)驗(yàn)報告在下周五前上交。,嚴(yán)格遵守實(shí)驗(yàn)室規(guī)章制度 嚴(yán)肅課堂紀(jì)律 不允許無故曠課、早退（1次） 遲到（3次） 不能做與實(shí)驗(yàn)無關(guān)的事,實(shí)驗(yàn)室安全和衛(wèi)生,安全實(shí)驗(yàn)室嚴(yán)禁吸煙。注意用水、防電和防火正確使用化學(xué)試劑和儀器,衛(wèi)生每次實(shí)驗(yàn)需留下一組同學(xué)值日，協(xié)助保持實(shí)驗(yàn)室清潔,1、了解培養(yǎng)基的概念、種類和用途，明確培養(yǎng)基的配制原理。2、學(xué)習(xí)掌握

3、培養(yǎng)基配制的一般方法和步驟。3、掌握高壓蒸汽滅菌的原理和方法步驟。,實(shí)驗(yàn)?zāi)康?一 培養(yǎng)基的配制,培養(yǎng)基(culture medium)——是指人工配制的、適合微生物生長繁殖或積累代謝產(chǎn)物的營養(yǎng)基質(zhì)。 自然界中微生物種類繁多，營養(yǎng)類型多樣，加之實(shí)驗(yàn)和研究目的不同，所以培養(yǎng)基的種類很多，不同種類的培養(yǎng)基一般都應(yīng)含有微生物生長所需的碳源、氮源、能源、無機(jī)鹽、生長因子和水六大營養(yǎng)要素，且各成分比例應(yīng)合適。 為了滿足微生物生長

4、繁殖或積累代謝產(chǎn)物的要求，還必須控制培養(yǎng)基合適的pH。,實(shí)驗(yàn)原理,常用凝固劑是瓊脂，固體培養(yǎng)基瓊脂加量通常為1.5%-2%；半固體培養(yǎng)基瓊脂加量為0.5%-0.8%。,實(shí)驗(yàn)原理 (continued),,常用培養(yǎng)基： 牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基廣泛用于細(xì)菌的培養(yǎng)；高氏一號培養(yǎng)基用于培養(yǎng)放線菌；麥芽汁培養(yǎng)基和豆芽汁培養(yǎng)基通常用于酵母菌的培養(yǎng)；馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基被廣泛用于培養(yǎng)霉菌。,牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基配方：,牛肉膏 3g

5、 1.5g蛋白胨 10g 5gNaCl 5g 2.5g瓊脂 15-20g 7.5-10g水 1000ml 500mlpH 7.4-7.6 7.4-7.6,5-6人一

6、組，每組 500ml ?斜面2支（每人），余裝三角瓶,1、稱量及溶化,2、調(diào)pH,3、加瓊脂、溶化、定容、（過濾）,4、分裝（每人2只試管）、加塞、包扎,5、滅菌,6、擺斜面,操作步驟,稱量與溶化：,,注意：1）牛肉膏的稱取：用玻璃棒蘸取適量牛肉膏，抹于稱量紙上，勿取過量，不足時，再蘸取少量，逐步添加；然后將牛肉膏連同稱量紙放入水中，稍等片刻牛肉膏即從稱量紙上脫落，用玻璃棒將紙撈出即可。,操作步驟 (continued),加瓊脂、溶化

7、、定容、（過濾）,? 瓊脂一般應(yīng)在調(diào)好了pH后加入，瓊脂的加入不會影響培養(yǎng)基的pH。? 瓊脂加入后應(yīng)煮沸數(shù)分鐘，以使其完全溶化，否則易出現(xiàn)分布不均，導(dǎo)致部分斜面不凝固或過軟，另外部分則瓊脂過多。 ? 加熱過程中因水分蒸發(fā)而可能使培養(yǎng)基體積減小，應(yīng)補(bǔ)充水分至所需量。,操作步驟 (continued),分裝：,1）裝量： 液體——試管高度的1/4左右 固體——試管高度的1/5 ，滅菌后擺斜面 半固體——一般為試

8、管高度的1/3，滅菌后垂直放置,操作步驟 (continued),分裝：,2）分裝裝置：,操作步驟 (continued),3）注意： 分裝過程中注意不要使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上，以免沾污棉塞而引起污染；若不慎沾在了管口，可用濕紗布揩凈。,,,棉塞制作方法：,加塞：棉塞 或 硅膠塞 作用：防止外界微生物進(jìn)入培養(yǎng)基內(nèi)造成污染，并保證有良好的通氣性能。,包扎：,◇加塞后，試管通常每7支一起，包上一層牛皮紙或兩層報紙，用線繩扎緊

9、。三角瓶加塞后也用牛皮紙包扎?！笠曰罱Y(jié)形式扎緊，以便使用時容易解開?！笥糜浱柟P注明培養(yǎng)基名稱、配制日期、配制人或?qū)嶒?yàn)組。,操作步驟 (continued),滅菌時包牛皮紙,滅菌：,◇ 培養(yǎng)基滅菌一般采用壓力蒸汽滅菌◇ 通常滅菌條件為1.05kg/cm2, 121.3℃滅菌20分鐘；含糖量高的培養(yǎng)基，如馬丁氏培養(yǎng)基則為0.56kg/cm2,112.6℃滅菌30分鐘?！?操作步驟詳見下一課件,操作步驟 (continued),擺斜面

10、：,◇ 成扎擺放，不需將每支試管單獨(dú)擺放◇ 最好待培養(yǎng)基冷至60℃時擺斜面，以免形成大量冷凝水,無菌檢查：,將滅菌的培養(yǎng)基放在37℃溫箱中培養(yǎng)24-48小時，以檢查滅菌是否徹底。,思 考 題,（1）培養(yǎng)基配好后，為什么必須立即滅菌? 如何檢查滅菌后的培養(yǎng)基是無菌的?（2） 在配制培養(yǎng)基的操作過程中應(yīng)注意些什么問題? 為什么?,消 毒 與 滅 菌干熱滅菌、高壓蒸汽滅菌、過濾除菌、紫外線滅菌,,加熱法,干熱法濕熱法,火焰

11、燒灼熱空氣滅菌,壓力蒸汽滅菌間歇滅菌煮沸滅菌巴斯德消毒,,,,實(shí)驗(yàn)原理,1、了解掌握常用消毒、滅菌方法的原理。2、學(xué)習(xí)掌握干熱滅菌、壓力蒸汽滅菌、過濾除、菌紫外線滅菌操作步驟。,實(shí)驗(yàn)?zāi)康?濾膜過濾器的濾膜是一種多孔纖維素，孔徑一般為0.45um，過濾時，液體和小分子物質(zhì)通過，細(xì)菌被截流在濾膜上。,過濾除菌—— 許多材料，如血清、糖溶液等，用一般加熱消毒滅菌方法，均會被熱破壞，應(yīng)采用過濾除菌。 應(yīng)用最廣的過濾器有

12、蔡氏(Seitz)過濾器和膜過濾器。,干熱滅菌,電烤箱,實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及實(shí)驗(yàn)步驟 1、干熱滅菌 2、壓力蒸汽滅菌,干熱滅菌,1、裝入待滅菌物品2、升溫 接通電源，加熱升溫至160-170℃。3、恒溫 保持160-170℃ 2小時。4、降溫 切斷電源，自然降溫。5、開箱取物 待烤箱溫度降到70℃以下以后，方可打開箱門，取出物品。箱內(nèi)溫度高于70℃，切勿自行打開箱門，以免玻

13、璃器皿炸裂。,實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及實(shí)驗(yàn)步驟 (continued),紫外線滅菌—— 紫外線波長在200-300 nm，具有殺菌作用，其中以265-266 nm殺菌力最強(qiáng)。 無菌室或無菌接種箱空氣可用紫外線燈照射滅菌。,實(shí)驗(yàn)原理 (continued),實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及實(shí)驗(yàn)步驟 (continued),壓力蒸汽滅菌,壓力蒸汽滅菌,1、檢查水位，放入物品。,2、加蓋、擰緊 對稱用力3、加熱升溫 4、排冷空氣 等壓力

14、升至0.5kg/cm2時，打開排氣閥，排凈冷空氣。5、升溫、保壓 等鍋內(nèi)壓力升至所需數(shù)值（通常為1.03kg/cm2），保持壓力20-30分鐘。6、降壓、取物,實(shí)驗(yàn)內(nèi)容及實(shí)驗(yàn)步驟 (continued),思 考 題,（1） 高壓蒸氣滅菌開始之前，為什么要將鍋內(nèi)冷空氣徘盡？滅菌完畢后。 “0”時才能打開排氣閥，開蓋取物?（2）在使用高壓蒸氣滅菌鍋滅菌時，怎樣杜絕一切不安全的因素?（3） 黑曲霉的孢子與芽孢桿菌的芽孢對熱的抗