CUMULATIVE EFFECT OF ELECTRO-ACUPUNCTURE ON VISCERAL PAIN AND SPINAL p38MAPK AND C-FOS EXPRESSION IN GOATS WITH VISCERAL HYPERS.pdf

1、內臟超敏(VH)是人和動物胃腸道疾病的一個重要特征。它通常是指內臟痛覺過敏（對傷害性刺激的反應增強），或/和觸敏痛（對非傷害性刺激產(chǎn)生疼痛反應），并伴有腸道運動改變以及腸黏液分泌物增加。內臟疼痛常伴隨內臟超敏發(fā)生。VH或者內臟疼痛對日常生活有相當大的負面影響，會造成巨大的經(jīng)濟負擔，并且對全球醫(yī)療體系帶來巨大的壓力。相對于其它腸段，小腸長度更長并且蠕動性更強，所以更容易發(fā)生炎性疾病，引起內臟疼痛和痛覺過敏。在腸道，小腸是臨床疾病最易發(fā)生的

2、部位。VH因病理發(fā)生尚不完全清楚，其治療仍是個難題。多數(shù)研究采用結腸炎模型研究VH。然而，這個模型不適合研究小腸炎癥（例如回腸炎）誘發(fā)VH的確切機制，因為它的位置，持續(xù)時間和中樞調節(jié)機制都不相同。因此，需要采用動物小腸炎性模型來研究小腸炎癥誘發(fā)VH和疼痛的機制，并評估其治療效果。
　　越來越多的證據(jù)表明p38MAPK信號通路在介導炎癥、疼痛的形成和維持方面有重要作用。然而，尚不清楚脊髓p38MAPK信號通路的激活是否可以促進VH的

3、形成。目前臨床上治療疼痛管理主要包括幾類藥物的組合應用，例如阿片類藥物、抗抑郁藥、抗痙攣/抗驚厥藥、或非甾體類抗炎藥。長期服用這些藥物有明顯的副作用，包括鎮(zhèn)痛不全、上癮、耐受、疲勞以及腸胃功能和心血管毒性。探索一種安全、有效的抗炎和鎮(zhèn)痛的治療方案和低風險的補充療法非常必要。針灸，古代的中國藝術，在各種疼痛疾病治療方面應用了3000多年。現(xiàn)在，電針(EA)是將電流通過針刺針應用到穴位，使針灸具有高療效、低風險的特征，因此而風靡全球。c-F

4、os被認為是神經(jīng)元激活的標志，因此被用于標記中樞神經(jīng)系統(tǒng)與外周感受相關的神經(jīng)元激活。一些研究表明，電針對內臟痛和VH有效。其他一些研究表明可以通過下調p38MAPK抑制炎癥和神經(jīng)性疼痛。然而，EA是否可以通過調節(jié)p38MAPK來改變內臟痛或VH尚不清楚。本實驗采用TNBS誘導回腸炎，并采用行為變化評分評估山羊內臟疼痛強度。在此基礎上，對回腸炎山羊進行連續(xù)電針，研究EA的累積鎮(zhèn)痛效果，以及EA對脊髓p38MAPK和c-Fos蛋白表達的影響

5、。
　　1.通過牽引回腸炎山羊的回盲腸韌帶觸發(fā)內臟痛
　　目的:通過牽引TNBS誘導的回腸炎山羊的回盲腸韌帶來量化內臟痛的強度。
　　方法:36頭雄性山羊，體重為20.05±2.1kg，隨機平均分成TNBS組(18頭)和生理鹽水對照組（18頭）。將30mg的2，4，6-三硝基苯磺酸（TNBS）溶解于30％的乙醇，通過開腹手術注射到回腸壁建立回腸炎模型。于對照組山羊，將等量的生理鹽水替代TNBS溶液，注射到回腸壁上。于3

6、、7和14天觀察牽拉回盲腸韌帶（2、4和6牛頓）引起的行為反應。于第3、7和14天行為測試后，隨即每組取6頭山羊，進行開腹手術，切除部分回腸。評估回腸病理組織變化，并用ELISA檢測過氧化物酶、IL-1β、IL-6和TNF-α的濃度。
　　結果:與生理鹽水對照組相比，TNBS組山羊，在第3天和第7天眼觀病理變化積分、肥大細胞計數(shù)、髓過氧化物酶和腫瘤壞死因子濃度均顯著增加，第3天到第14天顯微病理學變化積分、白介素-1β以及白介素6

7、濃度均增加。TNBS組山羊行為變化隨著牽引力增加而明顯，并與顯微病理學變化及細胞因子水平變化一致。因此，牽引力與疼痛行為反應呈正相關。
　　結論:在回腸炎山羊回盲腸韌帶施加牽引力，引起了顯著、穩(wěn)定和可重現(xiàn)的回腸源性疼痛。該模型有助于評估新藥控制內臟痛的效果，并研究其機理。
　　2.電針累計效應對p38MAPK和c-Fos在內臟超敏山羊脊髓背角表達的影響
　　目的:研究多次電針對山羊回腸炎誘導的內臟超敏及脊髓p38MAP

8、K和c-Fos激活的影響。
　　方法:30只試驗山羊被隨機分成:生理鹽水組(n=9)、假針組(n=6)、2，4，6-三硝基苯磺酸(TNBS)組(n=9)和TNBS+EA組(n=6)。經(jīng)開腹暴露山羊回腸，于假針組、TNBS組及TNBS+EA組山羊回腸壁注射TNBS溶液(30mgTNBS溶解于1.2mL40％乙醇中)誘導內臟痛。生理鹽水組山羊以同樣的方式注射等體積生理鹽水以替代TNBS溶液。于第7天，取Saline組和TNBS組山羊3

9、只，經(jīng)剖腹暴露回腸，切除部分腸道以評估炎癥。于7、10、13、16、19和22天應用電針雙側“足三里”穴(ST36)30min（連續(xù)波60Hz，強度3mA）。以內臟運動對結直腸擴張(CRD)刺激（強度20、40、60、80和100mmHg），采用肌電圖(EMG)記錄內臟運動反應（VMR），評估內臟超敏。于第22天，試驗山羊施實安樂死，采用western blotting檢測第11胸椎脊髓段(T11) p38和c-Fos蛋白表達，RT-q

10、PCR檢測p38和c-Fos的mRNA水平。同時，每頭山羊取距近回盲交接處15cm的6cm回盲腸段，用于組織病理學檢測。一
　　結果:實驗結果表明與對照組相比TNBS組的VMR顯著升高(P＜0.01)，并且脊髓p38MAPK和c-Fos蛋白和基因表達也顯著性升高(P＜0.01)。相比之下，TNBS+EA組的山羊在20、40、60、80和100mmHg的CRD刺激下VMR顯著降低。雙側足三里穴位重復EA可以降低山羊回腸壁注射TNBS