止痢草油緩解運(yùn)輸應(yīng)激及改善豬肉質(zhì)的作用.pdf

1、養(yǎng)豬生產(chǎn)中運(yùn)輸應(yīng)激的發(fā)生，給豬肉屠宰、零售及相關(guān)產(chǎn)業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。運(yùn)輸應(yīng)激發(fā)生時，動物應(yīng)激激素指標(biāo)，各組織器官生理生化指標(biāo)、抗氧化指標(biāo)和腸道功能均發(fā)生顯著改變，肉質(zhì)的pH值、滴水損失和肉色等指標(biāo)也發(fā)生相應(yīng)變化。因此，我們推測，在運(yùn)輸應(yīng)激過程中，上述指標(biāo)和功能的變化存在必然的聯(lián)系，并對肉質(zhì)造成影響。植物提取物止痢草油具有抗氧化、抗菌和改善腸道功能等多種特性，在動物腸道及體內(nèi)均會發(fā)生作用，并影響機(jī)體生理代謝功能。此外，止痢草油(Ore

2、gano essential oils，OEO)還具有改善肉質(zhì)，延長肉品的貨架期的作用。本研究的目的是通過相應(yīng)試驗(yàn)研究探索止痢草油在運(yùn)輸應(yīng)激時改善肉質(zhì)的作用。
　　本研究由三部分試驗(yàn)構(gòu)成。首先模擬運(yùn)輸構(gòu)建大鼠運(yùn)輸應(yīng)激模型，確認(rèn)模擬運(yùn)輸能夠影響大鼠肌肉氧化狀態(tài)和形態(tài)特征，通過對應(yīng)激激素、抗氧化酶活和肌肉形態(tài)等指標(biāo)檢測，驗(yàn)證大鼠對運(yùn)輸應(yīng)激具有敏感性及重復(fù)性，明確模擬運(yùn)輸模型用于肌肉能量代謝和形態(tài)方面研究的可行性。然后，利用此模型研究止

3、痢草油對運(yùn)輸應(yīng)激大鼠血液應(yīng)激激素指標(biāo)，血液、腸道及肌肉抗氧化指標(biāo)，腸道炎性因子及肌肉能量代謝等指標(biāo)的影響，揭示止痢草油緩解大鼠肌肉損傷的機(jī)制。最后，將止痢草油應(yīng)用在育肥豬生產(chǎn)中，通過在育肥豬飼料中添加止痢草油，研究止痢草油對育肥豬生長性能的影響，并通過設(shè)定屠宰前不同的運(yùn)輸強(qiáng)度，研究止痢草油對宰前育肥豬血清、肌肉及肝臟抗氧化能力和肉質(zhì)相關(guān)指標(biāo)的影響，確定止痢草油對緩解運(yùn)輸應(yīng)激及改善肉質(zhì)的效果。主要結(jié)果如下:
　　1、運(yùn)輸應(yīng)激大鼠模型

4、用于肌肉狀態(tài)改變研究的可行性
　　選擇6周齡健康雄性SD大鼠，模型溫度設(shè)定35℃，搖床轉(zhuǎn)速60 r/min，持續(xù)搖擺2h。與對照組大鼠相比，模擬運(yùn)輸應(yīng)激大鼠血清中皮質(zhì)醇、去甲腎上腺素及促腎上腺皮質(zhì)激素釋放因子（Corticotropin releasing factor，CRF）水平極顯著升高(P＜0.01)，血清中脂質(zhì)過氧化產(chǎn)物丙二醛(Malondialdehyde，MDA)含量極顯著升高(P＜0.01)，而谷胱甘肽過氧化物酶(

5、Glutathione peroxidase，GSH-Px)的活性極顯著降低(P＜0.01)，過氧化氫酶(Catalase，CAT)的活性顯著降低(P＜0.05)。同時，模擬運(yùn)輸應(yīng)激大鼠肌肉中MDA含量極顯著升高(P＜0.01)，GSH-Px酶活性極顯著降低(P＜0.01)，CAT的活性顯著降低(P＜0.05)。肌肉組織中活性氧(Reactiveoxygen species，ROS)含量極顯著升高(P＜0.01)。從肌肉組織形態(tài)學(xué)觀察到

6、，肌肉纖維有明顯的斷裂、破碎現(xiàn)象，說明肌肉形態(tài)已經(jīng)發(fā)生損傷。這些結(jié)果表明:模擬運(yùn)輸應(yīng)激大鼠已發(fā)生明顯的應(yīng)激反應(yīng)，此模型可以用于研究影響肌肉狀態(tài)的因素。
　　2、止痢草油對運(yùn)輸應(yīng)激大鼠肌肉狀態(tài)的影響及機(jī)制的研究
　　利用模擬運(yùn)輸應(yīng)激大鼠模型，采用雙因素試驗(yàn)設(shè)計(jì)。選擇6周齡健康雄性SD大鼠36只，隨機(jī)分為4組，每組9只。試驗(yàn)分組如下，非應(yīng)激組、應(yīng)激組、非應(yīng)激組+OEO(灌服5mg/t.bw)和應(yīng)激組+OEO(灌服5mg/t.bw

7、)。試驗(yàn)期為20 d，記錄每天的采食量和試驗(yàn)?zāi)┲亍Ｔ囼?yàn)結(jié)束后，采集血樣、肌肉和空腸等樣品。檢測應(yīng)激激素指標(biāo)、生理生化指標(biāo)、機(jī)體抗氧化指標(biāo)、肌肉形態(tài)學(xué)指標(biāo)和腸道免疫等指標(biāo)，研究了止痢草油對大鼠肌肉狀態(tài)的影響及機(jī)制。結(jié)果表明:盡管添加止痢草油不能顯著提高大鼠日增重，但可以降低料重比(P＜0.05)。與非應(yīng)激組相比，運(yùn)輸應(yīng)激極顯著提高了大鼠血清中的皮質(zhì)醇、去甲腎上腺素、CRF、乳酸脫氫酶(Lactatedehydrogenase，LDH)、肌

8、酸激酶(Creatine kinase，CK)、IL-6、TNFα、ROS、MDA和CAT的水平(P＜0.01)。與未灌服止痢草油組相比，灌服止痢草油可以極顯著降低血清中皮質(zhì)醇、去甲腎上腺素、CRF、LDH、IL-6、TNFα, ROS、MDA和GSH-Px等的水平(P＜0.01)。此外，皮質(zhì)醇、去甲腎上腺素、CRF、MDA、GSH-Px和SOD存在顯著的交互作用（運(yùn)輸×OEO，P＜0.05）。與應(yīng)激組相比，灌服止痢草油可以顯著提高宰后

9、0h及48 h肌肉中SOD酶活性(P＜0.05);極顯著降低0h及48 h肌肉MDA和乳酸濃度（P＜0.05）;極顯著升高0h及48 h肌肉糖原濃度(P＜0.01)。此外，灌服止痢草油可以提高顯著提高腸道SOD與GSH-Px酶活性(P＜0.01)，顯著降低MDA含量(P＜0.05)。肌肉切片結(jié)果顯示，灌服止痢草油后，肌肉形態(tài)結(jié)構(gòu)更完整，解剖后內(nèi)臟組織無充血、脹氣現(xiàn)象。這些結(jié)果顯示，(1)止痢草油通過提高腸道抗氧化能力，降低炎性因子的產(chǎn)生

10、，從而降低糖皮質(zhì)激素的水平，調(diào)節(jié)肌肉能量代謝，減少糖無氧酵解及乳酸的產(chǎn)生，防止pH值快速下降;(2)止痢草油通過提高機(jī)體抗氧化酶的活性，減少體內(nèi)自由基的產(chǎn)生;(3)止痢草油由于自身具有抗氧化能力，在體內(nèi)代謝過程中，能夠淬滅自由基，減少氧化產(chǎn)物的產(chǎn)生，從而減少對肌肉的損傷。
　　3、止痢草油對肥育豬生產(chǎn)性能的影響及對肉質(zhì)的干預(yù)作用
　　選擇日齡為150±3d、體重78±5 kg、公母各半的杜長大商品豬288頭，隨機(jī)分成3組，每

11、組96頭，分別飼養(yǎng)在6個欄里面（16頭/欄）進(jìn)行飼喂和管理。分別飼喂基礎(chǔ)日糧或添加200mg/kg維生素E、500mg/kg的止痢草油產(chǎn)品(含OEO5％)的日糧30d。記錄初始重、末重和采食量等數(shù)據(jù)。飼喂結(jié)束后，每組挑選出60頭體重接近，共計(jì)180頭豬，根據(jù)模擬運(yùn)輸應(yīng)激條件，進(jìn)行高密度（252 kg/m2）長時間(5h)或低密度（168 kg/m2）短時間運(yùn)輸(1 h)運(yùn)送至屠宰場進(jìn)行屠宰。采集血液和相關(guān)組織。結(jié)果顯示:與對照組相比，止

12、痢草油組結(jié)束體重(P=0.06)和總增重(P=0.08)均有提高的趨勢，能夠顯著降低料肉比（P＜0.05）。與非應(yīng)激組相比，運(yùn)輸應(yīng)激處理血清中皮質(zhì)醇水平(P=0.09)、去甲腎上腺素水平(P=0.06)和MDA水平(P=0.09)有增加趨勢;而OEO和VE處理，極顯著抑制了血清中皮質(zhì)醇和GSH-Px的水平(P＜0.01);且皮質(zhì)醇和去甲腎上腺素存在極顯著的交互作用(P＜0.01)。與非應(yīng)激組相比，運(yùn)輸應(yīng)激處理肝臟中MDA水平有提高的趨勢

13、(P=0.05)，極顯著的提高了SOD和T-AOC的活性及ROS的水平(P＜0.01);而止痢草油處理，則極顯著降低了MDA水平(P＜0.01)，顯著提高了SOD的活性(P=0.01)。在肌肉組織中，運(yùn)輸應(yīng)激處理極顯著提高了MDA、SOD和GSH-Px的水平(P＜0.01);且MDA水平存在顯著的交互作用(P=0.04)。
　　運(yùn)輸應(yīng)激，極顯著降低了pH(45min)(P＜0.01)，顯著降低了導(dǎo)電率(72 h)(P=0.04)，

14、顯著提高肌肉滴水損失(P=0.05)。日糧處理及運(yùn)輸方式對肌肉色值及肌肉導(dǎo)電率的影響差異不顯著(P＞0.05);基礎(chǔ)日糧、VE和止痢草油處理組肌肉滴水損失差異顯著(P=0.05)。添加止痢草油極顯著地降低了肌肉中HSP27和HSP70mRNA的豐度(P＜0.01);并且運(yùn)輸方式和日糧處理對HSP27的表達(dá)存在極顯著的交互作用(P＜0.01);添加止痢草油組空腸絨毛高度、絨毛表面積、絨毛/隱窩比值顯著高于對照組(P＜0.05)。
　

15、　綜上所述，本研究的結(jié)論是:
　　(1)建立了大鼠運(yùn)輸應(yīng)激模型，其條件為溫度為35℃，搖床轉(zhuǎn)速為60 r/min，持續(xù)搖擺時間為2h。
　　(2)止痢草油通過三個方面影響肌肉能量代謝和形態(tài)特征:第一，通過降低腸道氧化損傷，減少炎性因子的產(chǎn)生，從而降低糖皮質(zhì)激素的分泌，減少肌肉以無氧酵解方式供能，減少乳酸的積累，防止pH值快速下降;第二，止痢草油通過提高機(jī)體抗氧化酶的活性，使機(jī)體處于氧化還原平衡狀態(tài)，減少氧化應(yīng)激產(chǎn)生的ROS對

16、肌肉造成的損傷;第三，止痢草油在體內(nèi)代謝過程中，通過防止肌肉細(xì)胞膜發(fā)生脂質(zhì)氧化，減少M(fèi)DA的產(chǎn)生。
　　(3)在育肥豬日糧中添加500g/t的止痢草油產(chǎn)品，可以提高宰前30天肥育豬的生長性能?？梢跃徑飧呙芏?252kg/m2)、長時間(5h)運(yùn)輸對豬應(yīng)激反應(yīng)。降低了應(yīng)激激素水平，提高了機(jī)體的抗氧化能力，改善了腸道的健康，有效緩解了運(yùn)輸應(yīng)激所帶來的負(fù)效應(yīng)。在肌肉組織中，減少了肌肉滴水損失，改善肉色等指標(biāo)。且止痢草油對肉質(zhì)的改善效果好