止痢草油緩解斷奶仔豬腸道氧化應(yīng)激的作用及機(jī)制.pdf

1、現(xiàn)代養(yǎng)豬生產(chǎn)中“早期斷奶綜合征”的發(fā)生，給養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的經(jīng)濟(jì)損失。近年來(lái)的研究表明，早期斷奶過(guò)程中仔豬抗氧化能力降低、自由基增多，在體內(nèi)形成了氧化應(yīng)激，被認(rèn)為可能是導(dǎo)致“早期斷奶綜合征”的重要原因。在斷奶應(yīng)激時(shí)，仔豬腸道形態(tài)結(jié)構(gòu)和功能均發(fā)生顯著改變。因此，我們提出的研究假設(shè)是:仔豬早期斷奶時(shí)，體內(nèi)特別是腸道發(fā)生了顯著的氧化應(yīng)激，是造成腸道結(jié)構(gòu)和功能受損的重要原因。而植物提取物止痢草油不僅具有抗菌性而且具有抗氧化特性，可以利用止痢草油減

2、輕腸道氧化應(yīng)激，從而保護(hù)腸道的結(jié)構(gòu)和功能，調(diào)控早期斷奶綜合征的發(fā)生。
　　本研究由三部分試驗(yàn)構(gòu)成。首先以敵草快(Diquat)為應(yīng)激源構(gòu)建大鼠氧化應(yīng)激模型，確認(rèn)了Diquat誘導(dǎo)的大鼠氧化應(yīng)激模型用于腸道氧化損傷研究的可行性;隨后利用此模型評(píng)研究止痢草油對(duì)氧化應(yīng)激大鼠腸道抗氧化酶活性、促炎性因子、上皮形態(tài)及緊密連接的影響，揭示止痢草油緩解大鼠腸道氧化損傷的機(jī)制;最后組織了2次試驗(yàn)，研究了早期斷奶過(guò)程中止痢草油對(duì)仔豬腸道抗氧化酶活性

3、、促炎性因子、腸道通透性、上皮形態(tài)和緊密連接的影響，以及在保育各階段不同添加水平的效果，闡釋了仔豬早期斷奶過(guò)程中止痢草油緩解腸道氧化損傷的機(jī)制，確定了仔豬保育期各階段止痢草油的適宜添加水平。主要結(jié)果如下:
　　1、Diquat誘導(dǎo)的大鼠應(yīng)激模型用于研究腸道氧化損傷的可行性對(duì)7周齡健康雌性Wistar大鼠腹腔注射0.1mmol/kgbw的Diquat，成功誘導(dǎo)了氧化應(yīng)激。與對(duì)照組大鼠相比，注射Diquat后大鼠血漿皮質(zhì)醇水平顯著升高

4、(P＜0.05)，血漿、肝臟中脂質(zhì)過(guò)氧化產(chǎn)物MDA含量極顯著升高(P＜0.01)，而抗氧化酶SOD、GSH-Px的活性極顯著降低(P＜0.01)。同時(shí)，注射Diquat的大鼠空腸MDA含量極顯著升高(P＜0.01)，SOD和GSH-Px酶活性顯著降低(P＜0.01)，空腸上皮絨毛發(fā)生萎縮甚至，表明腸道中發(fā)生了氧化損傷。這些結(jié)果表明:Diquat誘導(dǎo)的大鼠應(yīng)激模型可以用于研究腸道的氧化損傷。
　　2、止痢草油對(duì)大鼠腸道氧化損傷的干預(yù)

5、作用及機(jī)理研究利用Diquat誘導(dǎo)的大鼠應(yīng)激模型，評(píng)價(jià)了止痢草油對(duì)大鼠氧化損傷的干預(yù)作用。
　　結(jié)果表明:與僅注射Diquat的負(fù)對(duì)照組大鼠相比，灌服止痢草油對(duì)試驗(yàn)組大鼠的影響是:顯著提高了空腸SOD酶(P＜0.05)，極顯著提高了GSH-Px酶(P＜0.01)的活性，同時(shí)極顯著降低了空腸MDA含量(P＜0.01);另外，還顯著提高了空腸食糜中乳酸桿菌數(shù)量(P＜0.05)，但顯著抑制了產(chǎn)ROS的大腸桿菌的數(shù)量(P＜0.05)。止痢

6、草油處理還顯著下調(diào)了空腸黏膜中促炎性因子TNF-α和IL-6的表達(dá)(P＜0.05)，上調(diào)了緊密連接咬合蛋白Occludin的基因和蛋白表達(dá)水平(P＜0.05)。在高劑量灌服止痢草油時(shí)，顯著降低了血漿皮質(zhì)醇水平和食糜中氧自由基ROS含量(P＜0.05)。與負(fù)對(duì)照組相比，止痢草油處理組大鼠空腸的絨毛高度以及絨腺比顯著增加(P＜0.05)，形態(tài)結(jié)構(gòu)更完整。這些結(jié)果顯示，止痢草油通過(guò)抗菌和抑制粘膜炎癥反應(yīng)，從而控制了腸道自由基的過(guò)度產(chǎn)生，能夠有

7、效緩解腸道的氧化應(yīng)激，對(duì)大鼠腸道氧化損傷具有良好的干預(yù)作用。
　　3、止痢草油對(duì)斷奶仔豬腸道氧化應(yīng)激的干預(yù)作用機(jī)制及對(duì)生性能的影響組織了2次試驗(yàn)，來(lái)研究止痢草油對(duì)斷奶仔豬腸道氧化應(yīng)激的干預(yù)作用機(jī)制及對(duì)仔豬生性能的影響。
　　試驗(yàn)一選擇21d斷奶的杜x長(zhǎng)大健康斷奶仔豬120頭，隨機(jī)分為2組，每組6重復(fù)欄，每欄10頭。對(duì)照組飼喂基礎(chǔ)日糧，試驗(yàn)組日糧是在基礎(chǔ)日糧添加了500g/t止痢草油。在斷奶當(dāng)天隨機(jī)選取6頭仔豬;斷奶后第7天，

8、分別從對(duì)照組和試驗(yàn)組每欄隨機(jī)抽取1頭共12頭仔豬，進(jìn)行采血及屠宰取樣。
　　試驗(yàn)二中選擇120頭遺傳背景相似，斷奶體重接近的斷奶仔豬，隨機(jī)分為4組，每組5重復(fù)，每重復(fù)1欄，每欄6頭。分別給予基礎(chǔ)日糧、基礎(chǔ)日糧+止痢草油產(chǎn)品250g/t、基礎(chǔ)日糧+止痢草油產(chǎn)品500g/t、基礎(chǔ)日糧+止痢草油產(chǎn)品750g/t的日糧處理。做好保育各階段稱重、耗料記錄，并觀察記錄排糞情況，計(jì)算各階段生產(chǎn)性能和腹瀉指標(biāo)。結(jié)果顯示:
　　1)與21d仔

9、豬相比，斷奶導(dǎo)致仔豬血漿皮質(zhì)醇(P＜0.05)以及空腸組織中ROS和MDA含量顯著升高(P＜0.05)，而SOD和GSH-Px酶的活性極顯著降低(P＜0.01)。另外，大量產(chǎn)生ROS的腸道糞腸球菌和大腸桿菌數(shù)量顯著升高(P＜0.01)，但乳酸桿菌數(shù)量顯著降低(P＜0.01)?？漳c粘膜中促炎性因子TNF-α、IL-1β、IL-6的mRNA表達(dá)均顯著上調(diào)(P＜0.01);緊密連接蛋白—咬合蛋白Occludin和閉鎖蛋白ZO-1的表達(dá)下調(diào)(P

10、＜0.01)。腸道通透性指標(biāo)血漿DAO活性(P＜0.01)、血漿D-乳酸含量(P＜0.05)升高，腸道上皮形態(tài)受到到損傷，絨毛高度降低(P＜0.01)，隱窩深度和絨毛寬度增加(P＜0.05)。表明斷奶導(dǎo)致仔豬腸道發(fā)生了顯著的氧化應(yīng)激。
　　2)與對(duì)照組相比，添加止痢草油的仔豬斷奶1周時(shí)，血漿皮質(zhì)醇水平(P＜0.05)和空腸MDA含量(P＜0.05）顯著降低， SOD酶的活性顯著提高(P＜0.05);腸道中糞腸球菌(P＜0.01）、

11、大腸桿菌數(shù)量顯著降低(P＜0.05)，而對(duì)乳酸桿菌沒(méi)有影響。飼料中添加止痢草油對(duì)斷奶仔豬空腸粘膜中TNF-α的mRNA表達(dá)有下調(diào)趨勢(shì)(P=0.0917)，但對(duì)IL-1β、IL-6無(wú)影響(P＞0.05);添加止痢草油顯著降低了血漿中DAO活性(P＜0.01)和D-乳酸含量(P＜0.05)，但對(duì)腸絨毛形態(tài)和緊密連接中Occludin、ZO-1的表達(dá)沒(méi)有影響。
　　3)先后進(jìn)行了兩次動(dòng)物試驗(yàn)，在試驗(yàn)一中發(fā)現(xiàn)，在斷奶后0-14d，日糧中添

12、加500g/t的止痢草油產(chǎn)品，可以極顯著降低腹瀉率(P＜0.01），對(duì)腹瀉指數(shù)也有改善趨勢(shì)（P=0.085），但對(duì)采食量、日增重、料肉比影響不顯著(P＞0.05);在試驗(yàn)二中發(fā)現(xiàn)，在斷奶后0-24天，添加止痢草油產(chǎn)品對(duì)腹瀉率、腹瀉指數(shù)改善不明顯(P＞0.05)，對(duì)料肉比的影響也不顯著(P＞0.05);灞口250g/t、750g/t止痢草油產(chǎn)品對(duì)采食量、日增重提高不明顯(P＞0.05)，添加量為500g/t時(shí)顯著提高采食量(P＜0.01)

13、和日增重(P＜0.05)。
　　綜上所述，本研究的結(jié)論是:
　　(1)Diquat誘導(dǎo)的大鼠氧化應(yīng)激模型，能夠?qū)δc道造成損傷，可以用于腸道氧化損傷研究。
　　(2)Diquat誘導(dǎo)的大鼠氧化應(yīng)激，導(dǎo)致腸道活性氧增加、抗氧化能力降低、炎癥反應(yīng)加重、緊密連接遭到破壞，腸道上皮絨毛損傷，而止痢草油的添加可以緩解上述問(wèn)題。
　　(3)早期斷奶導(dǎo)致了腸道氧化應(yīng)激的發(fā)生，造成了腸道氧化損傷，日糧中添加止痢草油產(chǎn)品可有效緩解上