中藥分析 ppt課件

1、第十九章中藥及其制劑分析概論,Analysis of Chinese Medicine Preparation,學(xué)習(xí)要點,掌握 中藥及其制劑的質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)，中藥分析常用的方法和技術(shù)，中藥樣品的主要制備方法。熟悉 各類中藥及其制劑的質(zhì)量分析要點。了解 中藥的特色和中藥分析的特點。,第一節(jié) 概 述,中醫(yī)典籍戰(zhàn)國?黃帝內(nèi)經(jīng)、漢?傷寒雜病論、漢?肘后備急方、宋?惠民局藥方中藥典籍唐本草、本草綱目中藥制劑湯、丸、散、膏、丹、酒劑

2、、酊劑等近40種,中藥（tradional chinese medines）,定義：在中醫(yī)理論指導(dǎo)下，用于預(yù)防、治療、診斷疾病并具有康復(fù)和保健作用的物質(zhì)。 以中醫(yī)藥學(xué)理論指導(dǎo)其臨床使用的中國傳統(tǒng)藥物，用中醫(yī)藥學(xué)理論體系的術(shù)語表達其性味（四氣五味）、功效和使用規(guī)律（歸經(jīng)）。,中藥（tradional chinese medines）,麥冬 【性味與歸經(jīng)】甘、微苦，微寒。歸心、肺、胃經(jīng)?！竟δ芘c主治】養(yǎng)陰生津，潤肺清心。用于肺燥干

3、咳，虛癆咳嗽，津傷口渴，心煩失眠，內(nèi)熱消渴，腸燥便秘，咽白喉。 五味子 【性味歸經(jīng)】：溫；酸、甘；歸肺、心、腎經(jīng) 【功能與主治】收斂固澀，益氣生津，補腎寧心。用于久嗽虛喘，夢遺滑精，遺尿尿頻，久瀉不止，自汗，盜汗，津傷口渴，短氣脈虛，內(nèi)熱消渴，心悸失眠。,中藥制劑(TCM preparation),中成藥(Chinese patent medicine)根據(jù)藥典、制劑規(guī)范和其他規(guī)定的處方，將中藥的原料藥物加工制成具有一定規(guī)格

4、，可以直接用于防病、治病的藥品。中藥制劑中的一些藥品經(jīng)過藥品監(jiān)督局審批，在市場上允許出售，可以通過醫(yī)生診斷給患者使用，也可由患者根據(jù)經(jīng)驗與常識直接使用的中藥制劑產(chǎn)品。,,君臣佐使,2010年版中國藥典,一部收載2165種，包括中藥材1102種、中藥制劑1063種HPLC用于含量測定587種GC用于含量測定16種,,中藥現(xiàn)代化(modernization of TCM)研制開發(fā)“安全有效、穩(wěn)定可控”的現(xiàn)代中藥“中藥現(xiàn)代化

5、科技產(chǎn)業(yè)行動計劃”“八六三”計劃“十一五”計劃,中藥制劑分析(analysis of TCM) 以中醫(yī)理論為指導(dǎo)，運用現(xiàn)代分析理論和方法研究中藥制劑質(zhì)量的一門應(yīng)用學(xué)科。是祖國醫(yī)藥學(xué)寶庫的重要組成部分。 如何確定中藥及其制劑質(zhì)量評價的指標(biāo)是關(guān)鍵問題,一、中藥及其制劑分析的特點,中藥及其制劑分析的特點,中藥作用的物質(zhì)基礎(chǔ)是其中的化學(xué)成分；中藥及其制劑所含的化學(xué)成分復(fù)雜，難以確定有效成分。按中醫(yī)理論和用藥原則組方：根據(jù)藥味

6、的“君、臣、佐、使”，首選主藥、貴重藥、毒劇藥；指標(biāo)成分：有效成分、毒性成分和特征成分。,,含量的影響因素多原藥材（生長環(huán)境、采收時間、貯藏條件）需經(jīng)檢驗； 炮制工藝影響；貯藏條件；,4.分析方法特點,預(yù)處理（提取、純化和濃縮）；測定方法要專屬性強、靈敏度高、分離效率高；方法要簡便；必須有中醫(yī)藥理論指導(dǎo)；運用當(dāng)代先進的科學(xué)技術(shù)，逐步探明其作用機理，尋找評價和控制其質(zhì)量的新方法、新途徑，為人類健康事業(yè)作出更大的貢獻，使中藥走

7、向國際。,5.中藥化學(xué)分類,生物堿苷類：強心苷、皂苷萜類：川楝素黃酮類香豆素類揮發(fā)油：薄荷油、樟腦油醌類：紫草素,甾體：麥角甾醇、豆甾醇、膽甾醇有機酸類：綠原酸、咖啡酸鞣質(zhì)多糖 氨基酸 使君子氨酸、南瓜子氨酸蛋白質(zhì)和酶,二、中藥制劑的分類,（一）液體制劑合劑與口服液 合劑系指藥材用水或其他溶劑提取，提取液經(jīng)濃縮制成的內(nèi)服液體制劑。單劑量包裝的合劑稱口服液。酊劑和酒劑 酒劑是指藥材用蒸餾酒浸提制成的澄清液體制劑；

8、酊劑是指藥物用規(guī)定濃度的乙醇浸出或溶解而制成的澄清液體制劑。,（二）半固體制劑,煎膏劑 又稱膏滋，是指藥材用水煎煮，去渣濃縮后，加煉蜜或糖制成的半流體制劑，有的煎膏劑還可加入藥材細(xì)粉，攪拌混勻后制得。流浸膏劑 指用適宜的溶劑浸出藥材中的有效成分，蒸去部分溶劑，調(diào)整濃度至規(guī)定標(biāo)準(zhǔn)而制成的制劑，1g/1ml，乙醇為防腐劑。浸膏劑 是指用適宜的溶劑浸出藥材中有效成分后，蒸去全部溶劑，濃縮成稠膏狀或塊、粉狀的浸出制劑，2~5g/

9、g，多數(shù)為原料。,（三）固體制劑,丸劑 是指藥材粉末或藥材提取物加適宜的粘合劑或輔料制成的球形或類球形的制劑。根據(jù)粘合劑和制備方法不同分為蜜丸、水蜜丸、水丸、糊丸、濃縮丸和微丸等。散劑 多種藥材混合制成的粉末狀制劑，分內(nèi)服和外用2種。顆粒劑 又稱沖劑是指適宜的輔料與藥材提取物或與藥材細(xì)粉制成的顆粒狀制劑。片劑 是指藥材細(xì)粉或浸膏加輔料壓制而成的片狀制劑。,,5、膠囊劑 分硬膠囊、軟膠囊和腸溶膠囊。硬膠囊 將一定量的藥材提取物加藥

10、粉或輔料制成粉末或顆粒，填充于空心膠囊中制成，或?qū)⑺幉姆勰┲苯友b于空心膠囊中制成。軟膠囊 將一定量的藥材提取物加適宜的輔料密封于球形或其他形狀的軟質(zhì)囊材中，用壓制法制備，軟質(zhì)囊材用明膠、甘油或其他藥用材料制成。腸溶膠囊是指膠囊經(jīng)高分子材料處理或其他方法加工后，其囊殼在胃中不溶，在腸中才能崩解的膠囊。,（一）取樣與樣品保存,,科學(xué)性、真實性、代表性，均勻、合理藥材：一般從包裝的四角和中間五處取樣，袋裝可從中間直接插入，桶裝可在桶中央取

11、樣，深度可達1/3~2/3處。數(shù)量至少3次檢驗用量，貴重藥可酌情取樣。,三、中藥分析供試品溶液的制備,,（一）取 樣,粉狀中藥制劑：一般取樣100g。液體中藥制劑：一般取樣200ml，同時，須注意容器底部是否有沉渣，如有應(yīng)徹底搖勻，均勻取樣。,,,固體中成藥：一般片劑取量200片，未成片前已制成顆粒可取100g。丸劑一般取10丸，膠囊按藥典規(guī)定取樣不得少于20個膠囊。,,注射液：取樣要經(jīng)過兩次，配制后在灌注、熔封、滅菌前進行一次取樣

12、，經(jīng)滅菌后的注射液須按原方法進行，分析檢驗合格后方可供藥用。已封好的安瓿取樣量一般為200支。,（二）供試品溶液的制備,提取方法 萃取法 冷浸法 回流提取法 連續(xù)回流提取法 水蒸氣蒸餾法 超聲提取法 先放置一定時間 超臨界流體萃取,,純化方法 萃取 柱色譜法 硅膠、氧化鋁、大孔吸附樹脂等。,第二節(jié) 中藥的鑒別,取樣→鑒別→檢查→含量測定,鑒別,性狀鑒別法顯微鑒別 粉末藥材的特征鑒別理化鑒別色譜鑒別

13、紙色譜、薄層色譜、高效液相色譜、氣相色譜,第三節(jié) 中藥的檢查項目與內(nèi)容,中藥的安全問題：重金屬、有害元素一、雜質(zhì)檢查法性狀或部位與規(guī)定不符有機、無機雜質(zhì)，沙石、泥土,,二、水分測定法1、烘干法：適用于不含揮發(fā)性成分的藥品。,烘干法水分測定儀,2、甲苯法：適用于含揮發(fā)性成分的藥品.,甲苯法裝置,,3、減壓干燥法：適用于含揮發(fā)性成分的貴重藥品。4、GC法,三、總灰分和酸不溶性灰分的測定,熾灼殘渣藥材檢查，而中藥制劑很少檢查,四

14、、重金屬及有害元素的測定,重金屬檢查法樣品前處理檢查Pb：二硫腙法 原子吸收光譜法,五、農(nóng)藥殘留量測定,ＧＣ法,農(nóng)藥滅幼脲的測定,六、有關(guān)雜質(zhì)的檢查,根據(jù)中藥的特殊毒性物質(zhì)制定檢查項目,七、其他,黃曲霉素測定法HPLC法,第四節(jié) 中藥及制劑中成分的含量測定,一、中藥及制劑中化學(xué)成分的含量測定,1、選用君藥及貴重藥建立含量測定方法， 如有毒藥也應(yīng)建立含量測定項目，若含量太低無法測定，則應(yīng)

15、在檢查項下規(guī)定限度檢查項目；若上述藥物基礎(chǔ)研究薄弱或無法進行含量測定的，也可依次選臣藥及其他藥味測定含量；2、有效成分或指標(biāo)成分清楚的， 可以測定有效成分或指標(biāo)成分；3、成分類別清楚的， 可測定某一類總成分的含量,,,4、所測成分應(yīng)歸屬于某單一藥味：如處方中有黃連和黃柏，最好不用小檗堿作為定量成分；5、檢測成分應(yīng)盡量于中醫(yī)用藥的功能主治相近；6、若確實無法進行含量測定的，可選適當(dāng)溶劑測定浸出物的含量。,

16、（二）中藥及制劑化學(xué)成分定量方法,HPLCGCTLC-掃描法,1、高效液相色譜法,桂枝茯苓丸中桂枝為君藥，采用高效液相色譜法測定其中桂皮酸的含量。供試品的制備：精密稱取本品細(xì)粉約1g，置50ml量瓶中，加50%甲醇40ml，超聲震蕩提取30min，放冷，加50%至刻度，離心10min（1200r/min），上清液過0.45μm濾膜，取續(xù)濾液備用。對照品溶液的制備：精密稱取桂皮酸對照品適量，50%甲醇配成0.01mg /ml的溶液

17、。色譜條件：Inersil 5ODS-Ⅱ柱（25cm×4.6mm）；流動相：乙腈-0.1%磷酸（29：71）；檢測波長285nm；流速1.0ml/min。用外標(biāo)法測定其含量。,2、分光光度法,特點：靈敏、簡便，但專一性不強，需提取純化等前處理，同時用陰性對照品在相同的條件下測定，應(yīng)無紫外吸收。 中國藥典主要用于幾個最大吸收波長較高（300nm）以上，吸收較強的組分的含量測定。小檗堿、蘆丁、黃芩甙、丹皮酚等。,示例 左金丸

18、中小檗堿的含量測定。黃連為本方的君藥，小檗堿為主要有效成分，故測定其含量。,取本品細(xì)粉約1g，精密稱定，置索氏提取器中，加鹽酸-甲醇（1：100）適量，加熱回流提取至提取液無色，將提取液移至50ml容量瓶中，加鹽酸-甲醇（1：100）稀釋至刻度，搖勻。精密量取5.0ml，置已處理好的氧化鋁柱（內(nèi)徑約0.9cm，中性氧化鋁5g，濕法裝柱，用乙醇30ml預(yù)洗）上，用乙醇25ml洗脫，收集洗脫液至50ml量瓶中，加乙醇稀釋至刻度，搖勻。照分光

19、光度法，在345nm的波長處測定吸收度，按鹽酸小檗堿（C20H18ClNO4）的吸收系數(shù)為728計算，即得。本品按干燥品計算，含總生物堿以鹽酸小檗堿（C20H18ClNO4）計，不得小于6.0%。,3、薄層掃描法,薄層掃描法是用一定波長的光照射在薄層板上，對薄層色譜有紫外光和可見光吸收的斑點，或經(jīng)激發(fā)后能發(fā)射出熒光的斑點進行掃描，將掃描得到的圖譜及積分?jǐn)?shù)據(jù)用于藥品的鑒別、檢查和含量測定的方法。薄層掃描法具有分離效能高、快速、簡便等特點

20、。,,薄層色譜條件：原則組分應(yīng)完全分離，斑點對稱，均勻，不拖尾。 檢測方法：吸收測定法和熒光測定法兩種。 測量方法：有反射法和透射法兩種。 掃描方式：有單波長和雙波長兩種。,（5）測定方法的選擇,外標(biāo)法：若標(biāo)準(zhǔn)曲線經(jīng)過原點，可用一點法校正，如不通過原點，宜采用二點法校正，必要時用多點校正法。測定時，供試品溶液和對照品溶液應(yīng)交叉點于同一薄層板上，供試品點樣不少于4個，對照品每一濃度不少于2個。 內(nèi)標(biāo)法：內(nèi)標(biāo)法是將內(nèi)標(biāo)加入供試品溶液

21、和對照品溶液中以其峰面積的比值作為定量依據(jù)。目前應(yīng)用較少。 注意事項 影響因素較多，測定時應(yīng)注意以下幾點： 薄層厚度應(yīng)均勻，表面應(yīng)平整，最好使用預(yù)制板； 點樣應(yīng)準(zhǔn)確，原點大小應(yīng)一致； 噴灑顯色劑應(yīng)均勻，量適中；并用膠布加以固定。,（6）注意事項,影響因素較多，測定時應(yīng)注意以下幾點： 薄層厚度應(yīng)均勻，表面應(yīng)平整，最好使用預(yù)制板； 點樣應(yīng)準(zhǔn)確，原點大小應(yīng)一致； 噴灑顯色劑應(yīng)均勻，量適中；并用膠布加以固定。,腦得生丸中人參皂甙的

22、含量測定。,精密稱取供試品2g，置索氏提取器中先用乙醚脫脂，再用甲醇連續(xù)回流提取人參皂甙，揮去甲醇，殘渣加水溶解后，用正丁醇提取純化，正丁醇減壓回收后，殘渣加甲醇溶解，作為供試品溶液；另取人參皂甙Rg1對照品，加甲醇制成0.5mg／ml的對照液。吸取供試品溶液2~4μl，對照品溶液2μl和4μl分別交叉點于高效硅膠G薄層板上，以氯仿-醋酸乙酯-甲醇-水（15：40：22：10）5~10℃放置12h的下層液為展開劑，展開，取出晾干。噴以1

23、0%硫酸乙醇溶液，110℃加熱至斑點顏色清晰，取出，在薄層板上蓋同樣大小的玻璃板，用膠布固定，照薄層掃描法測定，波長：λS = 525nm，λR = 700nm，測定供試品和對照品吸收度積分值，計算即得。,（三）多指標(biāo)成分的測定法,,（四）中藥一測多評的定量方法,,二、中藥及制劑質(zhì)量的整體控制和中藥指紋圖譜,Traditional Chinese Medicine Fingerprint---指藥材、飲片、提取物或中藥制劑等經(jīng)適當(dāng)處理

24、后，采取一定的分析技術(shù)和方法得到的能夠標(biāo)示其化學(xué)的、生物學(xué)的或其他特性的圖譜。,,顯著特點：一是通過指紋圖譜的特征性，能有效鑒別樣品的真?zhèn)位虍a(chǎn)地。二是通過指紋圖譜主要特征峰的面積或比例的制定，能有效控制產(chǎn)品的質(zhì)量，確保產(chǎn)品質(zhì)量的相對一致。,,中藥指紋圖譜借用DNA指紋圖譜發(fā)展而來，最先發(fā)展起來的是中藥色譜指紋圖譜。中藥色譜指紋圖譜是一種綜合的，可量化的色譜鑒定手段[2]。借以鑒別真?zhèn)?，評價原料藥材、半成品和成品質(zhì)量均一性和穩(wěn)定性。其

25、基本屬性是“整體性”和“模糊性”。,,整體性 對照指紋圖譜的建與評價應(yīng)注意指紋特征的整體性。 一個品種的對照指紋圖譜是由各個具有指紋意義的峰組成的完整圖譜構(gòu)成的，各個有指紋意義的峰（或薄層色譜的斑點）其位置（保留時間或比移值）、大小或高你（積分面積或峰高）、各峰之間相對的比例是指紋圖譜的綜合參數(shù)，建立和評價時從整體的角度綜合考慮，注意各有指紋意義的峰相互的依存關(guān)系。

26、 中藥色譜指紋圖譜在一定程度上與臨床療效的穩(wěn)定性及用藥安全性方面有相關(guān)性，因此對照指紋圖譜中所有色譜峰在樣品指紋圖譜中均應(yīng)體現(xiàn)且可追溯。只有在對照指紋圖譜中所有色譜峰的穩(wěn)定體現(xiàn)，才是保證產(chǎn)品真正穩(wěn)定可控的前提。為保證色譜指紋圖譜在整體上相似，在建立對照指紋圖譜時： ①應(yīng)盡可能包含所有具有指紋意義的特征峰，尤其是含量少面指紋意義顯著的色譜峰、指紋特征區(qū)、共有特征區(qū)； ②排除溶劑

27、峰及其他可以追溯的雜質(zhì)峰，供試品的制備應(yīng)與工業(yè)生產(chǎn)相似，并盡可能采用流動相來溶解。 通過比較指紋圖譜在整體上的相似，楞以判斷出樣品的真實性.,,模糊性 在實際過程中由于受到各種因素的影響，樣品指紋圖譜中有可能出現(xiàn)個別色譜峰的增加/減少，色譜峰圖譜行為可能發(fā)生改變，如峰形、峰寬、峰高發(fā)生變化及保留時間發(fā)生偏移等，不可機械性地通過色譜圖的疊加來評價反指紋色譜圖和相似。 增加/減少的

28、色譜峰對指紋圖譜整體相似的貢獻，不是單純性的降低，有可能出現(xiàn)相互消長的現(xiàn)象。對于難以把握的色譜峰，建議由軟件去進行判別評價，盡可能避免人為判別評價。,指紋圖譜評價方法,指紋圖譜相似性的評價從兩個方面考慮： （1） 色譜的整體“面貌”，即有指紋意義的峰的數(shù)目、峰的位置和順序、各峰之間的大致比例（薄層色譜還有斑點的顏色）等是否相似，以判斷樣品的真實性。 （2） 以樣品與對照樣品或“標(biāo)準(zhǔn)圖譜”之間或不同批次樣品指紋圖譜之間

29、總積分值作量化比較。如總積分面積相差較大（如+20%），則說明同樣量的樣品含有的內(nèi)在物質(zhì)上有明顯差異，這種差異是否允許，應(yīng)視具體品種、具體工藝的實際情況，并結(jié)合含量測定項目綜合判斷。 能比較應(yīng)在同一臺儀器平行進行測定，評價的結(jié)果可能陳致誤判或不同評價者得到不同的評價結(jié)果，建議通過計算機輔助指紋圖譜相似度評價軟件來進行。,,評價指標(biāo) 采用相似度作為指紋圖譜評價的指標(biāo)。引用變量 根據(jù)《中藥注射劑指紋圖譜研

30、究的技術(shù)要求》（暫行）之規(guī)定，與中藥指紋圖譜有關(guān)的技術(shù)參數(shù)如下：①保留時間（RT）；②峰高（height）；③峰面積（area）；④峰面積比（A%）；⑤相對保留時間（RRT）；⑥積分面積相對比值（RA）。 相對保留時間（RRT）和積分面積相對比值（RA）是中藥指紋圖譜的兩個核心參數(shù)，可作為指紋相似度評價的重要變量。 參照國外實驗室的做法，現(xiàn)選擇積分面積相對比值（RA）作為計算指紋圖譜相似度的變量。,中

31、藥質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的研究,唯有質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)伴隨產(chǎn)品“終身” 在藥典標(biāo)準(zhǔn)工作管理辦法總則中規(guī)定：對象和過程 制定標(biāo)準(zhǔn)必須堅持質(zhì)量第一，充分體現(xiàn)“安全有效、技術(shù)先進，經(jīng)濟合理”的原則，擇優(yōu)發(fā)展的作用 凡正式批準(zhǔn)的藥品都要制定標(biāo)準(zhǔn)。,,分類 2級標(biāo)準(zhǔn)——法定和企業(yè)質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)的特性藥品具有安全性、有效性、穩(wěn)定性及可控性。權(quán)威性、科學(xué)性、進展性 質(zhì)量標(biāo)準(zhǔn)制定的前提處方組成固定；原料穩(wěn)定；制備工藝穩(wěn)定。,五、中藥制劑標(biāo)準(zhǔn)內(nèi)容,名稱 (漢語、拼音、

32、拉丁) 組方 制法 性狀 鑒別 檢查 含量測定,方法學(xué)的考察,提取條件的選定 分離純化 測定條件的選擇 空白試驗 標(biāo)準(zhǔn)曲線的制備 測定方法的穩(wěn)定性試驗（間隔一定時間測定） 精密度試驗,,重復(fù)性試驗 靈敏度及檢測限 回收率試驗 加樣回收 1：1 成藥空白（除去欲測藥材后的成藥） 成藥空白（加已知被測藥材測定回收率）誤差較大 回收率至少需要進行5次試驗（n=5），或三組平行試驗（n=9）,1.中藥制劑分析

33、的一般程序為（ ）,A 取樣→鑒別→檢查→含量測定→寫出檢驗報告B 檢查→取樣→鑒別→含量測定→寫出檢驗報告C 鑒別→檢查→取樣→含量測定→寫出檢驗報告D 檢查→取樣→含量測定→鑒別→寫出檢驗報告,A,習(xí)題,2.中藥制劑分析常用的提取方法有 、 、 　　 、 　 、

34、 、 　　　 。,萃取法,冷浸法,回流提取法,水蒸氣蒸餾法,超聲提取法,超臨界流體萃取法,3.中藥制劑中雜質(zhì)的一般檢查項目有 、 、 、 、 等。,水分檢查,總灰分和酸不溶性成分